树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因的表达及与细胞凋亡的关系(英文)

背景:目前对肝细胞癌(HCC)的研究大多数只局限于对人的肝癌及癌旁组织进行研究,这种研究方法的最大缺陷是不能动态观察肝癌形成过程中的不同时期的各种变化。目的:利用实验诱发树鼠句肝癌的动物模型,动态研究在树鼠句肝癌形成过程中凋亡抑制基因(survivin)的表达及其抑制凋亡的机制。设计:完全随机对照实验。干预:实验组给予AFB1(黄曲霉毒素B1)105周,然后继续喂正常饲料至150周。对照组动物不喂AFB1,仅按正常饲养方法同样喂至150周。实验期间每隔15周对实验组和对照组动物打开腹腔进行肝组织活检。活检组织用40g/L中性甲醛固定,石蜡包埋。然后将对照组30,60,90周和实验组30,60周及HCC组织的切片,采用免疫组织化学S-P法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术,进行sur-vivin基因蛋白和凋亡细胞的检测。主要观察指标:树鼠句肝细胞癌形成过程中每一阶段的survivin基因蛋白的表达情况和细胞凋亡的情况。结果:survivin基因与HCC的发生有关,在树鼠句HCC形成过程中,其表达呈递增趋势。survivin在对照组30,60,90周,实验组30,60周平均得分分别为0.62,0.77,0.92,1.02,1.6,在树鼠句HCC组织切片中平均得分为5.34,与各组肝组织中的表达差异有显著性意义(t=3.0580,3.2564,3.0316,4.7715,3.8036,P<0.

用树鼩cDNA芯片研究树鼩肝癌中参与信号传导的部分基因变化情况

目的利用树鼩cDNA芯片研究黄曲霉毒素B1(AFB1)和(或)乙型肝炎病毒(HBV)引起的树鼩肝细胞癌(HCC)发生过程中参与信号传导的部分基因表达变化情况,从而进一步探讨HCC发生的分子机制。方法实验树鼩分3组:A组(AFB1组)、B组(AFB1+HBV组)、C组(正常对照组)。所有动物在实验过程中定期接受剖腹手术取肝组织检查,至肝癌形成时处死动物取肝癌和癌旁组织。用树鼩CD N A 芯片检测实验第30、60、90周肝活检组织、肝癌组织及其癌旁组织中各基因的表达情况,并用实时逆转录聚合酶链反应(Real time RT-PCR)法验证cDNA芯片结果。结果在A组和B组从癌前到癌变过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)、C-rel、核因子-κB2(NF-κB2)均显示有差异表达, 同时bcl-2、细胞周期素A(cyclin A)、睫状神经营养因子(cNTF)仅在B组显示有差异表达。而C组这几个基因无差异表达。实验组与对照组比较,在诱癌的早、中期(30、60周)均出现CNTF及cyclin A的差异表达。real time RT PCR结果与cDNA芯片检测结果基本一致。A组IGF-Ⅱ、C-rel基因及B组IGF-Ⅱ基因,在肝癌组织表达水平明显低于癌旁及实验30、60周组织,而癌旁与实验30、60周相比较则无明显差异;B组CNTF 基因在癌旁,肝癌及60周之间比较无明显改变,但均明显高于30周;A组CNTF基因表达水平在癌旁、肝癌组织高于癌前组织,但差异无统计学意义,C组这3个基因不同时期比较亦无明显差异。结论树鼩部分信号传导通路相关cDNA芯片应用于检测树鼩HCC发生过程中信号传导通路中各基因表达的变化,对进一步了解树鼩HCC发生的机制有重要实用价值。IGF-Ⅱ、NF-κB2、C-rel、Bcl-2、cyclin A及CNTF 这几个基因与树HCC的发生发展密切相关。