抗乙肝表面抗原中草药的筛选(体外及树鼠句动物试验)

目的 :筛选具有抑制乙型肝炎表面抗原 (HBs Ag)活性的中草药。方法 :体外试验采用反向间接血凝法 ,动物实验采用本室自己建立的乙型肝炎树鼠句感染模型。结果 :通过体外试验 ,从 2 0 0种常用中草药中筛选出具有较明显抑制 HBs A活性的 5种药物 ,它们分别是珍珠草 (叶下珠 )、桑椹子、五倍子、丹参和仙茅 ,这 5种药物可使 HBs Ag滴度从 1∶ 32 76 8降至1∶ 16。进一步在树鼠句体内进行抗乙肝病毒抑制试验 ,仅有珍珠草和五倍子有清除 HBs Ag的作用。结论 :体外实验及动物实验均表明珍珠草及五倍子有较强抗 HBs Ag作用 。

树鼩(Tupaia belangeri Wagner)三个亚种的染色体比较研究

本文对中国西南部树鼩(Tupaia belangeri)三个亚种的染色体特征进行了详细比较。结果表明滇西亚种(T.b.chinensis),越北亚种(T.b.tonquinia)和瑶山亚种(T.b.yaoshanensis)的染色体数目均为62:G带和C带基本相似;Ag-NORs的数目相同(4—6个),有相似的分布。应用复制带的技术,确定了雄性树鼩的Y染色体。本结果为树鼩的分类鉴定提供了细胞遗传学依据。

肌注前列腺素提高非繁殖期树鼩的受孕率

为研究前列腺素 ( PG)对于提高非繁殖期树鼠句发情及受孕率的作用 ,对野外捕获的笼养雌性树鼠句肌注 PG,并与雄性树鼠句交配 ,结果能明显地提高树鼠句的发情和受孕率。这为实验室大规模繁殖树鼠句提供了实验依据。

中国树鼩在兰州地区饲养的生物学特性观察

在实验室环境条件下 ,通过对树鼠句生活习性和社会行为观察发现 ,在室温 2 2± 2℃ ,相对湿度 80 %左右 ,光照充足 ,通风良好和饲料营养丰富时 ,能正常生长发育。

树鼩载脂蛋白E的cDNA和蛋白质结构分析

以从树肝脏mRNA逆转录得到的Ⅰ链cDNA为模板 ,运用SMARTRACEPCR技术 ,扩增得到树载脂蛋白E(apoE)cDNA序列 ,并推导出apoE蛋白质的氨基酸序列 .利用分子生物学软件包PCGENE对氨基酸序列和二级结构进行分析和比较 .结果表明 ,树apoEcDNA序列 (作为新基因已被GenBank接收 ,登录号为AF 30 3830 )由 1138bp构成 ,其中 5′非翻译区 6 4bp ,3′非翻译区 135bp ,939bp组成一个完整开放阅读框架 ,与人apoEcDNA的同源性为 86 % .编码 313个氨基酸组成的apoE前体 ,包含 18个氨基酸构成的信号肽和 2 95个氨基酸组成的成熟蛋白 .与人apoE氨基酸序列的同源性为 78% .树apoE与人及其它种属动物apoE在氨基酸组成上相近 ,但比人apoE少4个氨基酸 ,比动脉粥样硬化易感动物家兔apoE多 2个氨基酸 .经Garnier法预测 ,树apoE蛋白二级结构与人apoE相似 ,螺旋构象 (helical) 6 9 9% ,伸展构象 (extended) 16 6 % ,转角构象 (turn)6 0 % ,无规则卷曲 (coil) 7 6 % .

树脑垂体和松果体细胞的超微结构研究

利用电镜观察了树鼠句 (Tupaia belangeri chinensis)的脑垂体和松果体细胞的超微结构 ,结果显示这两类细胞除了有正常细胞结构外 ,核膜孔较大且在核周围还有一些电子密度不同 ,大小不一的蛋白质分泌颗粒 ,这些颗粒可能是生物个体调节各种生理生化功能、生长发育和昼夜节律的信使物质 。

丙型肝炎病毒体外感染成年树肝细胞形态学的初步研究

目的 :探索丙型肝炎病毒 (HCV)体外感染成年树肝细胞形态学的变化。方法 :HCVRNA阳性血清与培养肝细胞共同孵育后 ,收集不同时相标本并用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测细胞内和上清中正负链RNA ,光镜、电镜观察感染细胞形态学变化。结果 :光镜下未发现感染细胞形态学变化 ,电镜下发现胞浆内含有大量的脂肪空泡、多泡体 ,并可见疑似病毒样结构。结论 :丙型肝炎病毒体外不仅能感染树肝细胞 。

树鼩免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1)的动物只有黑猩猩和长臂猿 ,这严重阻碍了HIV 1的疫苗研究和治疗研究。因此 ,寻找新的可以感染HIV 1的动物模型成为十分迫切的课题。已知树对许多重要的医学病毒易感 ,为了探讨树是否可以感染HIV 1,利用不同辅助受体的 5种HIV 1病毒株 ,体外感染云南野生成年树的淋巴细胞和单核 /巨噬细胞 ;同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用RT PCR、PCR和流式细胞术分别进行检测。用RT PCR方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在 ,用PCR法未能发现树的这些免疫细胞中有前病毒DNA ,用流式细胞术也未能在这些感染HIV 1的树细胞的表面检测到特异抗原 ;而感染HIV 1的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树的这些免疫细胞在体外未能感染上HIV 1,可能的原因是树的这些免疫细胞的HIV 1受体 (CD4)和辅助受体 (CCR5或CXCR4)

树鼩血栓性脑缺血时单胺氧化酶活性的变化及银杏内酯B作用机制探讨

目的 :揭示血栓性脑缺血时缺血区和血清单胺氧化酶 (MAO)活性变化及对血小板活化因子 (PAF)受体拮抗剂银杏内酯B(GB)作用机理的探讨。方法 :建立光化学诱导树鼠句血栓性脑缺血模型 ,用酶比色法测量缺血后4、2 4及 72h中心区、半暗区、对侧区及血清的MAO活性 ,并用双缩脲法测定上述各区的蛋白含量。结果 :脑缺血后不同时间缺血中心区MAO活性显著低于假手术组 [(15 4 1± 1 6 3)× 10 3 U/g蛋白 ]或对侧区 [(15 4 7± 1 6 8)× 10 3 U/g蛋白 ],以 72h最为明显 [(2 19± 1 96 )× 10 3 U/g蛋白 ,P <0 0 1];此时缺血半暗区和血清MAO活性 [分别为 (2 5 30± 2 0 1)× 10 3 U/g蛋白和 (2 10 0 4± 2 6 6 7)× 10 3 U/L]明显高于假手术组 (P <0 0 1)。光化学反应后 6h舌下静脉一次注射PAF受体拮抗剂GB(5mg·kg-1)后 2 4h时 ,半暗区MAO活性明显低于缺血组 ,而中心区则高于缺血组 (P <0 0 1)。MAO活性变化与相应区域蛋白含量改变一致 (r=0 81,P <0 0 5 )。结论 :脑缺血后中心区、半暗区MAO活性改变是相应区域单胺类递质消长变化的主要原因 ,MAO活性变化与神经元蛋白质合成能力的改变有关 ;GB的脑保护作用与其拮抗PAF受体和调节MAO活性而促进递质平衡有关。

树鼬对森林脑炎病毒的敏感性及发病机理的研究

从云南新分离森林脑炎病毒(YH和T57)及东北株经脑内、皮下及腹腔感染成年中国云南树鼩,均发生病毒血症。持续时间为7—9天。抗体应答反应和病理改变程度成反比,病变轻的能产生较好的免疫应答。血凝抑制抗体、中和抗体和补体结合抗体分别于感染后的第5、7、13天出现,且血凝抑制抗体和中和抗体的升高呈正相关。经抗原定位研究发现,腹腔注射后48小时,各组织器官均能查到抗原,除中枢神经系统外,其它组织内病毒抗原消失都很快,随病毒血症的消失而转阴,中枢神经系统携带抗原可持续27天,且病变随病程的延长而加重,表现为充血、血管周围淋巴细胞呈套状浸润,局灶性出血,神经元变性,胶质细胞增生,轴索断裂等,说明靶器官是中枢神经系统。试验表明,成年中国云南树勉对森林脑炎病毒比较敏感,是森林脑炎病毒动物模型研究首选动物。

雌性树的麻醉和生殖器官解剖与卵母细胞形态特征的观察

目的 对雌性树的麻醉、生殖器官解剖与卵母细胞形态特征进行观察 ,为制备转基因树奠定基础。方法 用 1%的戊巴比妥钠 (10 - 3ml g体重 )肌内注射对树麻醉 ,比较在不同环境温度下对麻醉效果的影响。对雌性树生殖器官解剖结构、卵母细胞形态特征等进行观察。结果 ①在 2 5～ 2 8℃、18～ 2 0℃下麻醉的持续时间分别为 80min、130min ;②雌性树的子宫为双角子宫 ,卵巢外有包膜 ;③卵母细胞富含色素 ,卵母细胞的透明带与质膜的韧性较山羊强。结论 在 2 5～ 2 8℃下 ,用 1%的戊巴比妥钠 (10 - 3ml g体重 )对树麻醉时间比较适中 ,便于实验操作而且苏醒快。雌性树生殖器官解剖结构、卵母细胞形态特征观察表明 ,树的胚胎移植、转基因等实验操作与小鼠类似 ,但树的受精卵须进行离心处理。

乙肝病毒和黄曲霉毒素B_1在树鼩肝癌形成中的协同作用

原发性肝细胞癌（HCC）是包括我国南方地区在内的世界上一些地区最常见的恶性肿瘤之一，预后差，危害极大。HCC在世界范围内明确的地理分布提示某些特殊的危险因素在其形成过程中起作用’‘’。虽已有众多的流行病学及实验室研究资料提示乙肝病毒（HBV）和黄曲霉毒素BI（A...

用原位杂交对HBV和AFB_1与树鼩肝癌发生关系的研究

用生物素标记的HBV DNA探针对经83～158周实验的55只树鼩肝组织的福尔马林固定、石蜡包埋的切片进行原位杂交研究。有45只树鼩接种过HHBV,在肝细胞检出HBV DNA的有30只,另15只肝内HBV DNA阴性。这55只树鼩,有41只摄入了AFB_1,其中肝HBV DNA阳性的A组22只有10只发生PLC;19只HBV DNA阴性的B组,只发现2例PLC。两组差别显著(P<0.05)。未接触过AFB_1的14只树鼩中,肝内HBVDNA阳性的8只(C组),有1例出现PLC;而HBV DNA阴性的6只(D组)无PLC发生。结果表明:HHBV和AFB_1在PLC发生中起协同作用,支持了HHBV感染与PLC存在病因学关系的观点。

树鼩载脂蛋白AI cDNA的克隆及其组织表达

目的克隆不易感动脉粥样硬化动物树（ｔｒｅｅｓｈｒｅｗ，ＴＳ）载脂蛋白ＡＩ（ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＡＩ，ａｐｏＡＩ）的基因，比较分析其结构特点。方法以提取的肝组织ｍＲＮＡ为模板，反转录构建了ＴＳ肝组织ｃＤＮＡ文库。利用制备的兔抗ＴＳ载脂蛋白ＡＩ多抗血清为探针筛选该文库，对阳性克隆进行测序、序列分析及组织表达实验。结果克隆获得了ＴＳａｐｏＡＩｃＤＮＡ序列，全长序列由９００个核苷酸构成，包括２８ｂｐ组成的５′非翻译区；７９５ｂｐ组成的一个完整开放阅读框架，编码翻译２６５个氨基酸的ＴＳａｐｏＡＩ前体（含１８个氨基酸构成的信号肽、６个氨基酸的原肽片段及２４１肽的成熟蛋白）；两个终止密码ＴＧＡ、ＴＡＡ和随后７２ｂｐ的３′非翻译区。新基因已被ＧｅｎＢａｎｋ接受。对编码蛋白质的亲疏水性分析表明ＴＳａｐｏＡＩ的疏水性强于人的相应蛋白。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ显示ＴＳａｐｏＡＩ基因主要在肝脏和小肠组织表达。结论获得了不易感动脉粥样硬化动物ＴＳａｐｏＡＩ的新基因，编码的蛋白质结合胆固醇及胆固醇酯的能力可能大于人的ａｐｏＡＩ。