栗酒裂殖酵母CDC2基因克隆及淡水舟形藻表达载体构建

利用试剂盒提取栗酒裂殖酵母的总DNA,以其为模板进行PCR克隆CDC2基因,再将pBI121载体质粒和CDC2基因进行BamH I和SmaI双酶切,电泳分离和检测,最后连接目的片段构建重组载体pBI121-CDC2。克隆得到长度约为1.2 kb的CDC2基因片段与NCBI网站所公开的CDC2基因序列最大同源性达98%,所构建载体经酶切和PCR验证构建成功,并且在淡水舟形藻中得到表达,表明成功构建栗酒裂殖酵母CDC2基因的淡水舟形藻表达载体。

微囊藻毒素对真菌和哺乳动物细胞毒害效应的研究

主要探讨微囊藻毒素对真菌和哺乳动物细胞的毒害效果,以及其作为水体生理毒害评价模式细胞的可能。通过毒性试验和单细胞凝胶电泳实验,利用栗酒裂殖酵母细胞(S.pombe),人肝癌细胞(Hep G2)和人脑星形胶质母细胞癌细胞(U87)3种生物模型评估MC对细胞DNA的损伤以及对细胞内氧化自由基水平的影响。并利用栗酒裂殖酵母的基因缺失体,判断MC所诱导的酵母细胞氧化应激路径。研究表明MC通过氧化路径诱导DNA损伤;缺失wis1△和pap1△基因的S.pombe细胞无法诱导ROS生产,wis1△和pap1△缺失型S.pombe细胞在40 mg·L-1-1MC暴露24 h下细胞增殖率仅下降7.3%、7.7%;氧化损伤是MC损伤S.pombe的主要方式;Hep G2细胞和U87细胞较S.pombe细胞适于研究、评估MC的毒性。