Toll样受体5基因rs2072493与肝癌易感性的关系

目的:探讨Toll样受体5基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism SNP)rs2072493位点与肝癌遗传易感性的关系。方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测205例肝癌病例组和238例正常对照组Toll样受体5基因SNP rs2072493的基因型分布。用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%置信区间评估在共显性、显性、隐性、超显性四种遗传模式下rs2072493与肝癌发病风险的关系。结果:在共显性、显性、隐性遗传模式下,Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌的发病风险有关联。其中共显性遗传模式最适合,AIC和BIC最小。与携带AA基因型者相比,携带GA和GG基因型者肝癌的发病风险降低(GA vs AA:OR=0.512,95%CI=0.333-0.787、GG vs AA:OR=0.192,95%CI=0.077-0.477)。结论:Toll样受体5基因SNP rs2072493与肝癌发病风险关联。

牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已公布牛Toll样受体5(toll-like receptors 5,TLR5)基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582bp,开放阅读框2577bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。

Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达研究

目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠ALI中的作用。方法从大肠杆菌ATCC25922中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。108只SD大鼠随机分为正常对照组(n=36)、致伤1组(n=36)和致伤2组(n=36)。经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立大鼠ALI模型。每组分别在6个时相点用原位杂交法检测大鼠肺组织中TLR5mRNA的表达,并观察动脉血气分析和肺病理改变。结果从大肠杆菌ATCC25922中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。从致伤后1h开始,鞭毛蛋白致肺损伤大鼠肺组织中TLR5mRNA表达增加,并随时间推移和鞭毛蛋白剂量增加而表达增多。各致伤组大鼠动脉血氧分压降低,肺组织出现肺间质、肺泡水肿和炎性细胞浸润等病理改变。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠ALI;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程。

猪Toll样受体5基因cDNA克隆、蛋白质序列分析及其意义

为了解猪Toll样受体5(TLR5)蛋白的结构特征和进化关系,本研究从肠系膜淋巴结组织总RNA中克隆出猪Toll样受体5基因的cDNA序列。序列全长2641bp,其中2571bp的开放阅读框编码856个氨基酸残基的猪TLR5,含17.4%的亮氨酸,并有一段19个氨基酸的信号肽序列;同源性分析结果显示,TLR5在进化过程中具有高度保守性,与人、牛、山羊、绵羊、小鼠和大鼠的氨基酸序列同源性分别为77.5%、79.6%、78.3%、81.0%、69.2%和68.9%。蛋白分子结构预测结果表明,该分子由胞外区(642个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(191个氨基酸)组成,胞外区具有LRR结构域,胞内区具有TIR结构域,表现出典型的TLR家族结构特征。表明猪TLR5分子具有病原分子模式识别和信号传导的作用,这为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。

鼻黏膜中Toll样受体5的表达

目的研究鼻黏膜中Toll样受体5(Toll-likereceptor-5,TLR-5)的表达以了解TLR-5在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法鼻息肉和下鼻甲组织从接受鼻内镜手术治疗的慢性鼻及鼻窦炎和鼻中隔偏曲患者取得。应用免疫组化法检测17例鼻息肉和13例下鼻甲黏膜中TLR-5蛋白的表达,应用实时荧光定量RT-PCR(real-time fluorescentquantitative RT-PCR,real-time FQ-RT-PCR)检测14例鼻息肉和9例下鼻甲黏膜中TLR-5 mRNA的表达。结果在所有标本中均检测到TLR-5 mRNA和蛋白表达。免疫组化显示TLR-5蛋白主要表达于鼻黏膜上皮细胞和腺体上皮细胞。在细胞核和细胞浆中均有表达。在鼻黏膜上皮,染色最强的区域位于黏膜上皮表面一侧的细胞膜和细胞核。另外在间质单核样炎症细胞及NK细胞也有表达。鼻息肉组织中TLR-5蛋白表达指数5.529±0.653较下鼻甲2.346±0.619增高,差异有统计学意义(Z=-3.107,P=0.002)。结论本次研究确认了TLR-5在鼻黏膜和鼻息肉组织的表达,鼻息肉组织中TLR-5表达的增高可能与鼻息肉内持续的炎症状态有关。提示TLR-5有可能成为鼻息肉、慢性鼻及鼻窦炎一个新的治疗靶点。

饮食或遗传所致胰岛素抵抗小鼠Toll样受体5表达的对比研究

目的研究饮食或遗传所致胰岛素抵抗小鼠Toll样受体5(TLR5)的表达。方法m/m小鼠(糖脂代谢正常的C57BL/KsJ小鼠)经高脂喂养18周,成功筛选出6只小鼠由高脂饮食诱导胰岛素抵抗模型为m/m-HFD组,随机从正常饮食喂养18周的正常对照组和遗传因素所致胰岛素抵抗组(有基因缺陷的C57BL/KsJ小鼠)中各抽取6只作为m/m-NCD组和db/db组。收集组织样本,采用western blot技术检测回肠样本TLR5的表达,ELISA检测血清样本中炎症因子IL-6、IL-10的水平。结果干预18周后,与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠血样中糖脂、胰岛素水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。成模的小鼠QUICKI<0.339,HOMA-IR>2.69,db/db组胰岛素抵抗大于m/m-HFD组;与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠回肠样本中TLR5表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与m/m-NCD组相比,m/m-HFD和db/db组小鼠血清样本中IL-6升高、IL-10下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胰岛素抵抗发生时回肠样本中TLR5的表达增加。

Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的表达纯化及初步鉴定

目的:构建Toll样受体5激动剂CBLB502-Fc融合蛋白的真核表达载体,并在CHO细胞中表达,纯化得到具有生物学活性的目的蛋白。方法:首先从合成的pUC57-CBLB502质粒中扩增出CBLB502基因片段,酶切后克隆至pUC57-Fc质粒中,然后双酶切pc DNA3.1和pUC57-CBLB502-Fc,将CBLB502-Fc基因片段克隆至载体pc DNA3.1,挑选阳性克隆并测序,再将重组质粒转染CHO细胞,筛选高表达细胞系,用免疫印迹鉴定表达情况,Protein A亲和柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白,用小鼠辐射试验初步验证目的蛋白的生物学活性。结果:构建了pc DNA3.1-CBLB502-Fc真核表达载体;转染CHO细胞,筛选得到CBLB502-Fc高表达细胞系,并经免疫印迹鉴定培养上清;纯化得到较高纯度的融合蛋白并经SDS-PAGE鉴定;小鼠辐射实验表明CBLB502-Fc具有抗辐射作用。结论:真核表达并纯化了具有抗辐射作用CBLB502-Fc融合蛋白,为后续研究CBLB502-Fc的生物学功能奠定了重要基础。

Toll样受体5在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是一种对人类健康构成严重威胁的常见病,病死率高,预后差,对社会造成了巨大的经济和卫生负担。尽管对心血管疾病进行了广泛的研究,但其发病机制仍不清楚。众多研究表明,Toll样受体(TLRs)是一种模式识别受体,在心血管疾病的发生与发展过程中,可通过激活细胞内多种信号传导途径,介导炎症、自然免疫反应。作为TLRs的关键成员,TLR5可以通过髓样分化蛋白88依赖或非依赖信号途径调控促炎因子、趋化因子和细胞膜表面分子的表达,参与多种心血管疾病。本文将系统总结TLR5在多种心血管疾病中的作用,以期为解决心血管的难题提供新思路。

Toll样受体5在肠上皮癌变及结直肠癌治疗中的研究进展

结直肠癌是全球发病率第2,死亡率第4的恶性肿瘤,全球每年约有125万人被诊断为结直肠癌,每年有60多万患者死于结直肠癌[1]。目前,结直肠癌的标准治疗方案为以手术为主的综合治疗,通常以根治性手术联合使用放、化疗,但结直肠癌患者的5年生存率仍然很低,约为60%[2]。

Toll样受体5介导抗菌鞭毛蛋白的天然免疫

天然免疫中,宿主通过Toll样受体(TLR)识别病原体中的病原相关分子格局(PAMPs)来介导免疫应答的产生及相关细胞因子的分泌。鞭毛蛋白系细菌鞭毛的主要成分及毒力因子,可被飞蝇、植物、哺乳动物的天然免疫系统所识别。已知TLR5具有TLR同源域,可与CD4胞外区融合,造成TLR5组成性激活,进而强烈激活NF-кB,诱导TNF-α的分泌,提示TLR5也是介导天然免疫的受体,但其识别的PAMPs至今未明。本研究中,作者以表达人TLR5和NF-кB反应元件——荧光报告基因的CHO为检测系统,筛选相关PAMPs。

Toll样受体5和鞭毛蛋白的相互作用影响宿主区分病原菌和益生菌(英文)

【目的】大量的证据表明机体正常的免疫活动在很大程度上依赖于免疫系统和肠道菌群的相互作用,具体表现为免疫系统对病原菌进行免疫清除而对益生菌耐受。其中,免疫系统的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和来自肠道菌群的微生物相关的分子模型(Microorganism associated molecular patterns,MAMPs)被认为在宿主免疫系统对病原菌和益生菌的区分中发挥了重要作用,因为TLRs对MAMPs的识别能够激活先天性和获得性免疫反应。在TLRs对MAMPs的识别中,只有TLR5对细菌鞭毛蛋白的识别是基于蛋白-蛋白的相互作用,比较容易对其结合方式进行研究。因此,我们研究的主要目的就是要确定TLR5与鞭毛蛋白的相互作用是如何影响宿主区分病原菌和益生菌的。【方法】构建了多种肠道细菌(包括益生菌和病原菌)鞭毛蛋白的系统发育树,并比对了鞭毛蛋白的TLR5识别序列。【结果】发现病原菌和益生菌的鞭毛蛋白序列有所不同,尤其是TLR5结合并识别的鞭毛蛋白位点。【结论】病原菌和益生菌不同的鞭毛蛋白识别区域可能是鞭毛细菌适应TLR5识别下生存的结果,据此宿主能够对病原菌和益生菌进行区分。此外,相关研究表明TLRs在肠上皮细胞的分布具有基底侧和顶端的两极性,能够分别引发对病原菌的免疫反应和对益生菌的免疫耐受,从而抵御病原菌的入侵感染、与益生菌和平共处。鞭毛蛋白和TLR5蛋白的相互作用反映了肠道菌群和免疫系统在分子层面的相互作用和共同进化,是宿主区分病原菌和益生菌的分子机制之一。

溃疡性结肠炎体内Toll样受体5核因子-κB及白细胞介素17表达及相关性研究

目的探讨Toll样受体5(TLR5)、核因子-κB(NF-κB)及白介素17(IL-17)在溃疡性结肠炎(UC)患者结肠组织及外周血中的表达及临床意义。方法收集2012年12月至2014年1月郑州大学第一附属医院门诊和住院的活动期UC患者70例,其中轻度UC患者30例,中度25例,重度15例。另外收集30名健康志愿者的血清样本作对照,20例结肠癌行外科手术切除的正常结肠断端取正常结肠组织作对照。分别采用免疫组织化学SABC检测结肠黏膜中TLR5与NF-κB的表达,ELISA检测外周血IL-17的含量。结果 TLR5和NF-κB在各组结肠黏膜的表达差异及IL-17在各组外周血的表达差异均有统计学意义(P<0.01),UC患者组高于对照组,重度UC患者高于中度及轻度UC患者。另外,TLR5与IL-17呈显著正相关(r=0.823,P<0.01)。结论 TLR5可能通过活化NF-κB增加IL-17的表达参与了溃疡性结肠炎的发生与发展,检测其变化对疾病严重程度的评价具有重要临床意义。

Toll样受体5基因多态性与中国人群脓毒症的相关性研究

目的探讨Toll样受体5（Toll-likereceptor5，TLR5）基因多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的相关性。方法采用病例一对照研究设计，募集了255例脓毒症患者和260例对照个体。应用贝克曼公司的商用SNPstream分型技术和PCR—RFLP方法对TLR5基因的3个编码区多态性位点进行分型。采用Logistic回归分析，校正性别、年龄、吸烟和饮酒、慢性病状态、APACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素的影响，评价多态性位点与脓毒症的发生风险，以及脓毒症性休克、死亡和器官功能障碍等表型的遗传相关性。结果TLR5基因的3个多态性位点在病例和对照组中的基因型分布均呈哈．温平衡状态。这3个编码区的多态性位点与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无遗传学关联。结论TLR5基因的多态性位点可能在脓毒症的发生、发展和病程转归中不发挥重要作用。

Toll样受体5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的表达及其研究

目的检测鞭毛蛋白诱导急性肺损伤大鼠肺组织中Toll样受体5(TLR5)mRNA的表达和NF-κB活性变化,初步探讨TLR5在鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤中的作用及其信号转导途径。方法从大肠杆菌中分离纯化鞭毛蛋白并鉴定。大鼠经尾静脉注射鞭毛蛋白以建立急性肺损伤(ALI)模型。原位杂交法和核酸电泳迁移率实验(EMSA)分别检测鞭毛蛋白致ALI大鼠肺组织中TLR5mRNA表达及NF-κB活性。结果从大肠杆菌中成功分离纯化出鞭毛蛋白,其分子量约65 kD。静脉注射鞭毛蛋白成功建立了大鼠急性肺损伤模型。在静脉注射鞭毛蛋白复制大鼠ALI模型过程中,随着鞭毛蛋白剂量增加及其作用时间的延长,肺组织TLR5的表达逐渐增多,NF-κB活性增强。结论静脉注射鞭毛蛋白可导致大鼠急性肺损伤;TLR5作为细胞膜上鞭毛蛋白的受体参与了鞭毛蛋白致大鼠急性肺损伤的作用过程;NF-κB信号转导通路可能在鞭毛蛋白诱导大鼠ALI的过程中发挥着作用。

冠心病患者外周血单个核细胞Toll样受体5mRNA表达及与冠心病危险因素的关系

将冠心病患者79例分为急性冠脉综合征（ACS）组63例和稳定型心绞痛（SAP）组16例，另选20名健康人为对照组。比较三组临床、生化指标及外周血单个核细胞Toll样受体5（TLR5）mRNA表达水平，分析其与冠心病危险因素的关系。结果显示，ACS组和SAP组患者外周血单个核细胞中TLR5mRNA的表达水平较正常对照组明显升高。ACS组显著高于SAP组和对照组（均P〈0．01）；冠心病患者TLR5mRNA表达量与LDL-C和血糖值呈正相关（r值分别为0．855、0．752，偏回归系数分别为3．625、1．244），提示TLR5可能参与冠心病动脉粥样硬化的发生发展，LDL-C可能也会影响TLR5的表达。

NOD样受体家族含CARD结构域5在胃癌中的相互作用蛋白及其对胃癌的诊断价值

目的 探究NOD样受体家族含CARD结构域5(NLRC5)在胃癌中的相互作用蛋白,并明确其对胃癌的诊断价值。方法 采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究NLRC5在胃癌组织和癌旁组织中的差异,结合STRING网站分析NLRC5的相互作用蛋白,通过基因表达综合(GEO)数据库验证TCGA数据库筛选出来的蛋白对胃癌的诊断价值。引用临床模型,验证筛选出来的蛋白在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况,确定各蛋白间的相关性,通过受试者工作特征(ROC)曲线明确其对胃癌的诊断价值。结果 TCGA结果显示,胃癌组织中NLRC5表达水平明显高于癌旁组织(P﹤0.01)。蛋白-蛋白相互作用发现,核因子κB激酶复合物抑制剂组分(CHUK)、核因子κB激酶亚单位β的抑制剂(IKBKB)、三重基序蛋白25(TRIM25)与NLRC5均呈正相关。经过GEO数据库验证得到TRIM25、CHUK、IKBKB与NLRC5可以构建联合模型诊断胃癌。临床模型中NLRC5在胃癌组织中高表达,且与TRIM25、IKBKB、CHUK表达水平均呈正相关(P﹤0.01)。NLRC5联合TRIM25、IKBKB、CHUK对胃癌有较高的诊断价值。结论 TRIM25、IKBKB、CHUK参与NLRC5在胃癌发展中的相关调控机制,在胃癌诊断中具有较高的效能。

狗Toll样受体5基因的克隆与序列分析

[目的]克隆狗TLR5基因,应用生物信息学软件对其进行结构和功能的预测分析。[方法]依据Gen Bank中已公布的狗TLR5基因的CDS区设计出特异性引物。PCR扩增获得狗TLR5目的基因,并构建重组质粒p CR2.1-Dog TLR5,测序正确后应用生物信息软件分析其序列特征。[结果]克隆得到的基因序列与Gen Bank中登录的狗TLR5(NC 006620.3)的同源性高达99%。狗TLR5的ORF为2 577 bp,编码858个氨基酸,蛋白分子质量约94.675 7 k Da,理论等电点为8.57,不稳定系数为43.14,表明为不稳定蛋白。狗TLR5蛋白N端的前20个氨基酸构成了其信号肽序列。核苷酸序列同源性比对结果表明,狗的TLR5基因序列与大熊猫、雪豹、东北虎和猎豹TLR5基因同源性相对于其他比对物种较高,分别为78.7%、77.2%、76.8%和76.3%。[结论]成功克隆出狗TLR5基因,生物信息学分析表明狗TLR5基因与Toll样受体家族具有相似的结构特征。狗TLR5基因的成功克隆与序列分析为进一步研究其在分子免疫方面的作用机制奠定了基础。

Toll样受体5对间充质干细胞生物学特性的影响

目的探讨Toll样受体5(TLR5)对间充质干细胞(MSC)生物学特性的影响,以期探究TLR5在MSC与肿瘤关系中的作用。方法构建过表达TLR5的慢病毒载体并用相关病毒感染MSC,通过荧光表达量、RT-q PCR和Western印迹验证TLR5在MSC中的过表达情况,通过MSC-TLR5增殖、表面抗原和细胞分化来验证TLR5过表达对MSC生物学性状影响,通过检测CBLB502激活TLR5后白细胞介素6(IL-6)和IL-8的表达水平验证TLR5生物学功能。结果 TLR5慢病毒感染MSC后,mRNA水平和蛋白水平检测TLR5表达量均显著升高,MSC-TLR5增殖、免疫表型和分化能力未发生改变,同时,CBLB502激活TLR5后,IL-6和IL-8表达量显著升高(P<0.001)。结论携带TLR5的慢病毒感染MSC后不影响MSC生物学功能,TLR5具有功能活性且可激活下游信号通路发挥免疫调节作用。

抑制活化素受体样激酶5对增生性瘢痕成纤维细胞中胶原蛋白沉积的影响

目的研究抑制活化素受体样激酶(ALK)5对增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1A2)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法手术取增生性瘢痕组织进行成纤维细胞体外原代培养,采用不同浓度(1、5、10μM)的ALK5抑制剂CP-639180对增生性瘢痕成纤维细胞干预3 h后,分别采用定量逆转录PCR和Western blot方法检测Ⅰ型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白的表达。结果与对照组比较,ALK5抑制剂处理后,成纤维细胞中COL1A2的mRNA和蛋白含量均明显降低,且COL1A2的mRNA和蛋白水平与抑制剂的浓度呈反比(P<0.05,P<0.01)。同样,ALK5抑制剂在转录水平和蛋白翻译水平降低了瘢痕成纤维细胞中α-SMA的表达(P均<0.05)。结论应用小分子ALK5抑制剂CP-639180可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA,进一步抑制胶原纤维的合成,为增生性瘢痕治疗研究提供新的思路。