群体性诺瓦克样病毒性胃肠炎疫情分析

目的 分析广州市2 0 0 3年群体性诺瓦克样病毒性胃肠炎流行特征,加强该病的预防控制工作。方法 采用现场流行病学调查方法,对广州市2 0 0 3年群体性诺瓦克样病毒性胃肠炎疫情进行调查分析。结果 2 0 0 3年10月～12月底,广州市共报告8起群体性诺瓦克样病毒性胃肠炎疫情,共计病例396例,每起疫情均从部分患者粪便标本中检出诺瓦克病毒核酸或抗原。结论 RT- PCR的阳性检出率大于ELISA法,粪便标本检出率高。诺瓦克样病毒性胃肠炎常引起暴发疫情,及时采取控制措施可避免疫情扩散。

太平洋牡蛎中诺瓦克样病毒的RT-PCR法检测和病毒聚合酶区部分序列的分析

利用pH9.5的甘氨酸缓冲液性处理太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)匀浆液,PEG沉淀病毒粒子的方法对未知的是否污染有诺瓦克样病毒(Norwalk-like Virus,NLVs)的牡蛎样品进行处理,并提取病毒RNA,进行RT-PCR,凝胶电泳检测扩增结果。初步建立了牡蛎中NVLs的检测方法。纯化所得的特异PCR产物,克隆到T-载体中,筛选转化子,提取质粒,并进行PCR电泳鉴定。重组质粒序列测定结果在NCBI上进行BLASTn显示所得产物与已发表的诺瓦克样病毒的相应序列具有极高的同源性(>95％);根据Genebee在线分析系统AliBee-Multiple Alignment进行对中国的诺瓦克样病毒粪便分离株和牡蛎分离株的扩增序列进行相似性分析,结果从我国养殖的牡蛎样品中和胃肠炎病人粪便中分离出2个的诺瓦克样病毒之间无显著的差异。

用RT-PCR法检测食品中诺沃克样病毒

使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去RTPCR抑制剂。此富集方法的回收率为135%。另外,对不同的RNA提取方法的灵敏度进行了比较,最终确认硅胶膜法为简便、快速、有效的RNA提取方法。并且,使用了Superscript反转录酶进行反转录,提高了检测的灵敏度。选用了289和290混合引物进行食品中NLVs的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLVs,扩增出1个319bp的特异性片段。通过以上条件的优化,建立了通过RTPCR检测贝类中NLVs的有效方法。该方法的NLVs最低检出限为10×103RT-PCR50/15g。对32件贝类样品进行了NLVs的检测,其中2份毛蚶中被检出NLVs。

诺瓦克样病毒胃肠炎集体性爆发的证实与思考

目的通过对诺瓦克样病毒胃肠炎集体爆发的调查和证实,总结处理不明原因疾病的经验。方法运用流行病学方法对3所幼儿园和1所小学发生的急性胃肠炎集体爆发进行调查,对病人粪便样本进行诺瓦克样病毒核酸检验。结果4起集体爆发的胃肠炎均以恶心呕吐为主要表现,有2个发病高峰,病程较短,有自愈倾向,没有明显的年龄、班级、楼层分布的集中趋势。对第4起爆发的22份病人粪便样本进行诺瓦克病毒的PCR检测,其中19份阳性,同时有4份经DNA测序证实与诺瓦克样病毒同源。结论此一系列不明原因的胃肠炎是由诺瓦克样病毒引起的。这是我国证实由诺瓦克样病毒感染而引起的集体性急性胃肠炎的爆发。

北京地区人群诺瓦克样病毒血清抗体水平调查

为了解诺瓦克样病毒在我国人群中的流行情况，采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ），分别以重组杆状病毒表达的Ｎｏｒｗａｌｋ（ｒＮＶ）和Ｍｅｘｉｃｏ（ｒＭＸ）病毒样颗粒为抗原，检测了北京地区１１０９份不同年龄人群血清标本中的特异性ＩｇＧ抗体。总检出率为ｒＮＶ８８．８％，ｒＭＸ９０．６％。两种型别抗原的抗体分布形式类似：７－１１个月的阳性率最低，分别为ＮＶ４１．４％，ＭＸ３６．２％；１岁时达到ＮＶ６５．２％，ＭＸ６９．６％；３岁时达到ＮＶ８４．６％，ＭＸ８９．７％；８、９岁后均接近１００％。结果提示。

用RT-PCR和ELISA对暴发性急性胃肠炎事件中诺沃克样病毒检测的比较

目的 诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较。方法 用RT-PCR和ELISA对 76份腹泻病人粪便 ,2 3份肛拭子 ,12份食物进行诺沃克样病毒检测。结果 粪便通过RT-PCR检出阳性 37份 ,ELISA检出阳性 17份 ,肛拭子仅通过RT-PCR检出 1份阳性 ,食物无阳性检出。结论 这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发。RT-PCR的阳性率大于ELISA ,且检品以粪便为好。并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于 90 %

90例非轮状病毒腹泻患儿粪便中诺瓦克样病毒的检测

目的了解90份婴幼儿腹泻病人轮状病毒分子生物学方法检测阴性的粪便标本中诺瓦克样病毒感染状况。方法应用酶联免疫吸附实验方法(ELISA)进行诺瓦克样病毒抗原检测。结果90份粪便标本中诺瓦克样病毒I型(G1)和Ⅱ型(G2)阳性分别检出6例和19例,阳性率分别为6.67%和21.11%,两者差异有显著性。结论诺瓦克样病毒感染可能是武汉地区婴幼儿腹泻的重要病因之一,其中基因Ⅱ型为主要流行株。

对虾副粘病毒样病毒的细胞分离培养

选用鲤鱼上皮乳状瘤细胞（ＥＰＣ）和虹鳟肝细胞（Ｒ１），对新发现的对虾暴发流行病病原副粘病毒样病毒进行了细胞分离与培养。结果证实对虾副粘病毒样病毒可在这２种鱼类传代细胞中复制，其中ＥＰＣ培养的病毒粒子的滴度在１０８／ｍＬ以上。

实时定量RT-PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒

建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测诺沃克样病毒(Norwalk-like Virus,NLV)的方法,并对中国的牡蛎样品进行了分析。选取GⅡ型NLV的RNA聚合酶区域,利用Primer Express 2.0软件设计引物和探针,建立了定量RT-PCR反应体系。将含有NLV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线。结果表明,质粒密度在6×106,6×105,6×104,6×103,6×102,6×101,6个拷贝之间,共7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为6个拷贝。制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=-3.36lgX+37.11,相关系数R2=0.998。对中国37批太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)样品进行了定量检测,有6批样品为阳性,并根据标准曲线测定了NLV的含量。

对虾暴发流行病的一种新病原——副粘病毒样病毒

对１９９６年我国河北、山东人工养殖的日本对虾和中国对虾暴发流行的虾病进行了病原学研究，发现引起本次虾病暴发流行的病原是迄今尚未见报道的对虾的一种新病原——副粘病毒样病毒。该病毒主要侵害对虾肝胰腺，导致细胞严重变性。

养殖锯缘青蟹呼肠孤样病毒粒子的电镜观察

经过对患病青蟹Scylla serrata的组织进行了超薄切片电镜观察,在病蟹的鳃上皮细胞、心肌细胞、胃和肠道上皮细胞中发现了大量的呼肠孤样病毒粒子。该病毒粒子的大小为60 nm左右,二十面体对称,无囊膜,在感染组织细胞浆中呈晶格状排列。根据病毒的形态特征和组织分布形态,初步认为该病毒为水生呼肠孤病毒,暂将其命名为青蟹呼肠孤病毒(Scylla serratareo-like virus,Ss-REO)。

儿童诺瓦克样病毒感染临床特征及危险因素

目的了解儿童诺瓦克样病毒(Norwalk-like virus,NLVs)感染的临床特征及危险因素。方法收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本并填写调查表。对收集的标本分别采用ELISA检测轮状病毒(Rotavirus,RV)、RT-PCR检测NLVs。对调查表资料采用1∶1配对病例(NLVs)-病例(RV)及1∶1配对病例对照研究,分析NLVs感染的临床特点及危险因素。结果648份标本中检出RV 339份(52.31%),NLVs 80份(12.35%)。分析表明,NLVs所致腹泻的临床特征有别于RV腹泻,前者最早出现呕吐症状者居多(62.82%),并且有呕吐症状者多于后者。而RV腹泻患儿最早出现的症状以腹泻为主(65.38%)。发热、最高温度、发热天数、腹泻天数、是否输液治疗及就诊次数均为RV感染患儿高于NLVs感染患儿。对NLVs腹泻可能的危险因素进行单因素及多因素条件Logistic回归分析,最终筛选出4项危险因素,分别为吃生冷食品、与腹泻患者接触、吮手习惯及较少洗手。结论NLVs是导致儿童腹泻的重要病原体,其所致腹泻的临床特征不同于RV腹泻;RV腹泻临床症状较NLVs腹泻严重,但NLVs腹泻所造成的家庭经济负担不容忽视。

诺瓦克样病毒及其检测方法

诺瓦克样病毒是一种分布很广泛的,可导致成人和儿童急性胃肠炎的病毒,是除轮状病毒外引起腹泻的最主要的病毒病原,与食物、水源等的污染造成的急性胃肠炎暴发密切相关。文章介绍了诺瓦克样病毒的病原学、流行病学、临床表现和诊断检测等方面的研究进展。

一起家庭聚集性诺瓦克样病毒感染的调查

目的 :调查一起家庭聚集性非菌性腹泻病原、传播途径、临床表现以及病原学特性 .方法 :感染者腹泻粪便及其可疑食物采用RT PCR方法检测 ,并测序 .结果 :患儿、患儿父亲、患儿外公粪便标本及蟹肉标本均扩增出NLVs目的片断 ,测序分析表明该四份标本同源性为 1 0 0 % .结论 :证实该起家庭聚集性非菌性腹泻为诺瓦克样病毒感染所致 ,并在食物中检测到诺瓦克样病毒 。

诺瓦克样病毒及其检测方法

诺瓦克样病毒是一种分布广泛,可导致成人和儿童急性胃肠炎的病毒,是除轮状病毒外最主要的致腹泻病毒病原,与食物、水源等污染造成的急性胃肠炎暴发密切相关。现对诺瓦克样病毒的病原学、流行病学、临床表现和诊断检测等方面的研究进展作一介绍。

广州地区扎幌样病毒的检出及基因型分析

目的了解广州腹泻儿童是否存在扎幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV)感染。方法在2003年秋冬季腹泻流行期间在南方医院儿科收集临床诊断为病毒性腹泻患儿的粪便标本,并采用半套式反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测。纯化阳性标本PCR产物并测序,然后将其同GenBank中的参比毒株序列比较。结果收集的169份标本中有1份SLV(CH03354)PCR扩增阳性,检出率为0.59%,同源性分析表明该毒株属于SLV GⅠ-1群。结论广州地区存在SLV所致感染,本次实验检出毒株基因型与安徽毒株不同,说明我国不同地区可能存在不同的SLV基因型。

诺瓦克样病毒医院感染调查

目的分析某医院诺瓦克样病毒医院感染流行特征。方法采用现场流行病学调查方法,用荧光PCR法从患者粪便标本中检出诺瓦克样病毒核酸。结果2006年12月23日-2007年1月10日,某医院报告18例老年患者群体性腹泻,病例对照分析显示年龄、南区病房、有基础病变者差异有统计学意义。结论诺瓦克样病毒医院感染可在老年住院患者中暴发,及时采取消毒为主的综合控制措施可避免疫情扩散。

中华绒螯蟹呼肠孤病毒样病毒病研究

为了探讨中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)颤抖病的发生原因 ,从表现出颤抖症状的中华绒螯蟹中初步分离纯化出一种病毒 ,人工感染健康触 ,出现明显的阳性反应 ,并从人工感染的蟹的血液、肠道、性腺等组织中检测到病毒 ,表明分离到的病毒为中华绒螯蟹的病原 ,且对野生锯齿华溪蟹 (Sesarna <Holometapus >dehanni)也具感染性。电镜观察结果显示该病毒粒子呈球状 ,无囊膜 ,大小为 55nm左右。病毒核酸在 1%琼脂糖凝胶电泳中 ,电泳图谱呈现 3/ 3/ 4 / 2型 ,总分子量约 2 0kb。该核酸对DNaseⅠ不敏感 ,对RNase敏感 ,推测病毒核酸为dsRNA ,从病毒形态大小、病毒核酸等特性初步确定该病毒为呼肠孤病毒样病毒 (Reovirus likeVirus)。该研究为探讨中华绒螯蟹颤抖病的发生原因及防治方法有很大的指导意义。

诺瓦克样病毒抗体水平及其相关因素研究

目的 了解某军校学员诺瓦克样病毒抗体水平 ,同时调查分析与血型、入学前家庭所在地等的关系。方法 利用酶联免疫吸附试验检测血清中的诺瓦克样病毒rNV、rMX和r387特异性IgG抗体水平。结果 rNV、rMX和r387IgG抗体总检出率分别为 88 9% ,5 4 1%和 90 0 %。其中rMX抗体阳性率不同血型之间存在显著性差异 (P<0 0 5 ) ,以O型抗体阳性率最高 6 2 5 % (115 / 184 ) ,B型最低 4 9 1% (16 0 / 2 16 ) ,而rNV和r387抗体阳性率未见显著性差异。不同入学前家庭所在地 3种抗体阳性率均有显著性差异 ,其中以农村籍学员抗体阳性率最高 ,城市最低。结论 该军校人群中诺瓦克样病毒感染普遍 。