Krüppel样转录因子8与乳腺癌他莫昔芬耐药的相关性

目的:探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)与乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药及预后的相关性。方法:利用公共数据库分析KLF8 mRNA在TAM敏感与耐药细胞中的表达差异及KLF8 mRNA对接受TAM治疗乳腺癌患者预后的影响。运用RT-PCR及Western印迹方法检测MCF-7与LCC2细胞中KLF8 mRNA及蛋白表达差异,免疫组化检测97例Luminal A/B亚型接受TAM治疗乳腺癌中KLF8表达情况并分析其与预后的关系,运用CCK-8试剂盒检测沉默及过表达KLF8后在不同浓度TAM作用下细胞增殖变化。结果:TAM耐药细胞中KLF8表达水平高于TAM敏感细胞,接受TAM治疗Luminal A/B亚型乳腺癌患者中,KLF8高表达者预后差,过表达KLF8后细胞对TAM耐药性增强,而沉默KLF8后细胞对TAM耐药性减弱。结论:KLF8高表达与乳腺癌TAM耐药正相关,在Luminal A/B亚型的乳腺癌中,KLF8高表达TAM治疗效果差,KLF8或可成为TAM疗效判断及逆转耐药的新靶点。

转录因子HOXC13通过上调PCNA表达促进喉鳞状细胞癌AMC-HN-8细胞的恶性生物学行为

目的:本研究旨在探讨转录因子HOXC13在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达、功能及可能的调控机制。方法:常规培养LSCC细胞,将其分为sh-NC组、sh-HOXC13组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-HOXC13组、pcDNA3.1-PCNA组和sh-HOXC13+pcDNA3.1-PCNA组,用转染试剂将相应核酸和质粒转染各组细胞。用数据库数据分析HOXC13mRNA在LSCC组织中的表达;收集2019年1月至2022年12月在联勤保障部队第九八〇医院耳鼻咽喉头颈外科手术切除的62对LSCC组织及配对的癌旁组织,免疫组织化学法检测中国人LSCC组织中HOXC13蛋白的表达,qPCR检测中国人LSCC组织、癌旁组织以及各组细胞中HOXC13和PCNAmRNA的表达,MTS法检测各组AMC-HN-8细胞的增殖能力,平板克隆实验检测各组AMC-HN-8细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组AMC-HN-8细胞的迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因实验和染色质免疫沉淀技术(ChIP)验证HOXC13与PCNA之间的结合关系。结果:HOXC13和PCNA在LSCC组织和细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01)且两者的表达水平呈正相关(P<0.01),HOXC13的表达水平与TNM分期有明显关联(P<0.01)。敲减HOXC13可明显抑制AMC-HN-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01),过表达HOXC13则促进TU686细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。HOXC13可与PCNA启动子区结合并调控其转录。敲低PCNA可部分逆转HOXC13对AMC-HN-8细胞的恶性生物学行为的促进作用(均P<0.01)。结论:HOXC13通过上调PCNA促进LSCC细胞的恶性生物学行为,HOXC13是LSSC临床诊断和治疗的潜在靶点。

miR-125a靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8对肺腺癌恶性进展的影响

目的探讨miR-125a通过靶向转录无调性碱性螺旋环螺旋转录因子8(ATOH8)对肺腺癌恶性进展的影响。方法通过在线数据库UALCAN分析ATOH8在肺腺癌中的表达水平及其与患者生存率的相关性,以及miR-125a在肺腺癌中的表达水平及其与肺癌进展的关系;提取肺腺癌及癌旁正常组织总RNA,实时PCR分析ATOH8表达水平差异;将ATOH8过表达载体转染至肺腺癌细胞中,CCK-8法检测过表达ATOH8对肺腺癌细胞存活能力的影响;预测与ATOH8的3’非翻译区(UTR)结合的微RNA(miRNA),将miR-125a模拟物和抑制物转染至肺腺癌细胞中,实时PCR和Western blotting检测ATOH8的表达水平变化。结果数据库及实时PCR验证结果显示,ATOH8在肺腺癌组织中显著下调(P<0.01);过表达ATOH8能够显著降低肺腺癌细胞存活能力(P<0.05);高表达ATOH8组患者5年生存率显著升高(P<0.05);miR-125a能够与ATOH8的3’UTR结合,显著抑制其表达(P<0.05)。miR-125a在有吸烟史、中晚期和淋巴转移的肺腺癌患者中显著上调(P<0.05)。结论ATOH8是肺腺癌潜在的抑癌基因,能够抑制肺腺癌细胞存活的能力,影响患者的5年生存率。miR-125a表达水平与吸烟史、肿瘤分期和淋巴转移密切相关。miR-125a能够靶向抑制肺腺癌患者ATOH8表达,是ATOH8在肺腺癌中异常表达的潜在因素。

荔枝转录因子LcMYB8的克隆与表达分析

为探究LcMYB8转录因子在荔枝成花调控中的作用,以妃子笑荔枝为试验材料,克隆LcMYB8转录因子的序列全长,并对其进行生物信息学分析。通过实时荧光定量PCR技术,分析LcMYB8转录因子在不同器官、年周期以及低温处理中的时空表达模式。结果显示,LcMYB8转录因子全长1749 bp,其中开放阅读框915 bp,共编码304个氨基酸。时空表达模式表明,LcMYB8转录因子可能在荔枝成花和果实发育期起着关键作用。研究结果旨在为荔枝优质新品种培育提供理论指导。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1在小鼠急性肝损伤中的作用及机制

目的探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子1(TNFAIP8L1)在小鼠急性肝损伤中的作用及机制。方法选择C57BL/6J雄性野生型(WT)小鼠和C57BL/6J雌性TNFAIP8L1^(+/-)小鼠杂交繁殖的第2代TNFAIP8L1^(+/-)小鼠和WT小鼠,进一步自交繁殖出第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠和第3代WT雄性小鼠。分别取5只正常第3代雄性WT小鼠和5只正常第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,检测比较2种正常小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察2种正常小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,采用流式细胞术检测2种正常小鼠肝组织髓系细胞亚群中性粒细胞(Neu)、嗜酸性粒细胞(EOS)、树突状细胞(DC)、骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)、骨髓来源的单核细胞(BMNCs)所占百分比。另取5只第3代雄性WT小鼠和4只第3代雄性TNFAIP8L1^(-/-)小鼠,采用脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-Gal)诱导制备急性肝损伤小鼠模型,24 h后采取上述方法检测比较2种急性肝损伤小鼠血清ALT水平,观察2种急性肝损伤小鼠肝组织中炎症细胞浸润及细胞坏死情况,并检测2种急性肝损伤小鼠肝组织髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs所占百分比。结果正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)组小鼠肝组织中髓系细胞亚群Neu、EOS、DC、BMDMs、BMNCs百分比及血清ALT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常WT小鼠和TNFAIP8L1^(-/-)小鼠的肝组织HE染色结果均显示肝小叶结构完整清晰,肝细胞形态正常、排列整齐,无明显炎症细胞浸润及细胞坏死。急性肝损伤24 h后,TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织髓系细胞亚群中Neu、BMNCs百分比及血清ALT水平显著高于WT小鼠(P<0.05);2组小鼠肝组织髓系细胞亚群EOS、DC、BMDMs百分比比较差异无统计学意义(P>0.05)。急性肝损伤WT小鼠肝组织中肝小叶结构模糊,肝细胞肿胀、散在空泡样脂肪变性,有少量炎症细胞浸润。急性肝损伤TNFAIP8L1^(-/-)小鼠肝组织中肝小叶结构几乎不存在,肝细胞损伤严重且大量坏死,并有大量炎症细胞浸润。结论TNFAIP8L1基因缺陷不影响小鼠肝组织中髓系细胞的发育和小鼠肝脏稳态。TNFAIP8L1在急性肝损伤的发生发展过程中起抑制作用。TNFAIP8L1基因缺陷加重LPS/D-Gal诱导的急性肝损伤,有可能是通过增加Neu和BMNCs浸润而招募其他类型的免疫细胞浸润入肝组织,从而加重肝细胞的坏死。

左卡尼汀联合替米沙坦对高血压病伴心力衰竭患者心输出量外周血肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2及运动耐力的影响

目的探究左卡尼汀联合替米沙坦对高血压病伴心力衰竭患者心输出量(CO)、外周血肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)水平及运动耐力的影响。方法选取2022年8月至2023年3月于浙江省杭州市临平区第一人民医院治疗的高血压病伴心力衰竭患者88例,按治疗方法分为观察组(采用左卡尼汀+替米沙坦治疗,44例)和对照组(采用左卡尼汀治疗,44例),对2组患者的临床疗效、心功能指标、外周血TIPE2水平、运动耐力指标和不良反应作对比。结果对照组临床总有效率(77%)低于观察组(95%)(χ^(2)=4.728,P=0.030);治疗后,对照组[心输出量(CO):(4.4±1.0)L/min;左室射血分数(LVEF):(41.8±3.2)%]提升水平和左室舒张末期内径(LVEDD)(43.8±7.1)mm下降水平均低于观察组[CO:(5.2±1.0)L/min;LVEF:(49.0±3.4)%;LVEDD:(40.2±6.5)mm](CO:t=3.740,P<0.01;LVEF:t=14.991,P<0.01;LVEVD:t=18.954,P<0.01);2组治疗后外周血TIPE2水平均提升,对照组(20.0±0.9)μg/L,提升幅度低于观察组[(25.2±1.1)μg/L](t=23.937,P<0.01);治疗后2组耗氧量峰值[观察组:(16.1±2.1)m·kg^(-1)·min^(-1);对照组:(15.1±2.2)m·kg^(-1)·min^(-1)]、最长运动时间[观察组:(7.6±1.3)min;对照组:(7.0±1.2)min]和6 min步行试验(6MWT)距离[观察组:(300±25)m;对照组:(261±24)m]等均升高,观察组运动耐力指标升高情况均更明显(耗氧量峰值:t=2.116,P<0.01;最长运动时间:t=2.438,P<0.01;6MWT:t=7.409,P<0.01);观察组不良反应发生情况(1例,2%)低于对照组(8例,18%)(χ^(2)=4.456,P=0.035)。结论左卡尼汀联合替米沙坦能够有效提高患者CO水平、外周血TIPE2水平和运动耐力,降低炎症反应,改善患者的生活质量。

CXC趋化因子配体8、核转录因子κB、可溶性B7-H3在肺炎支原体肺炎患儿中的临床意义及预后评估价值

目的分析CXC趋化因子配体8(CXCL8)、核转录因子κB(NF-κB)、可溶性B7-H3(sB7-H3)在肺炎支原体肺炎(MPP)患儿中的临床意义及预后评估价值。方法选择在广州医科大学附属妇女儿童医疗中心增城院区小儿内科综合三区2022年10月至2024年3月就诊的160例MPP患儿作为MPP组,选择同期接受健康体检的100例儿童作为健康组。所有患儿均接受对症治疗,于治疗7d后随访,根据预后结局分为预后良好组(n=115)、预后不良组(n=45)。比较健康组、MPP组NF-κB、CXCL8、sB7-H3水平,比较不同预后情况MPP患儿的临床资料及NF-κB、CXCL8、sB7-H3动态变化情况;采用多因素logistic分析MPP患儿预后的影响因素,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析NF-κB、CXCL8、sB7-H3对MPP患儿预后的预测价值。结果MPP组NF-κB、CXCL8、sB7-H3水平高于健康组(P<0.05);预后不良组、预后良好组急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分比较有差异(P<0.05);预后不良组治疗前后NF-κB、CXCL8、sB7-H3水平均高于预后良好组(P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示,APACHEⅡ评分、NF-κB、CXCL8、sB7-H3为MPP患儿预后的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,NF-κB、CXCL8、sB7-H3联合检测预测MPP患儿预后的曲线下面积(0.825)及灵敏度、特异度(81.37%、80.65%)均高于各项单一检测(P<0.05)。结论血清NF-κB、CXCL8、sB7-H3与MPP患儿预后存在密切关系,以上指标联合检测对预测MPP预后的价值较高。

Krüppel样转录因子8(KLF8)的结构及功能

Krüppel样转录因子8(Krüppel-like factor 8,KLF8)是KLFs家族中的一员.KLF8在羧基端含有3个保守的C2H2锌指结构域,用于与DNA结合.KLF8的转录受粘着斑激酶(focal adhesionkinase,FAK)、KLF1(erythroid krüppel-like factor1)、KLF3(basic Krüppel-like factor)的调控.类泛素化是KLF8翻译后主要的修饰方式.KLF8在氨基端含有特定的PVALS/T基序,与辅助抑制因子C末端结合蛋白(C-terminal binding protein,CtBP)相互作用,抑制调节区含CACCC元件的基因表达.此外,还可以通过招募辅助激活因子p300和p300/CBP相关因子(P/CAF)辅助激活靶基因的表达.同时,KLF8在细胞周期循环、细胞侵袭和上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)、细胞致癌性转化及肿瘤发生发展中发挥作用.

急性心肌梗死患者血清ANGPTL8、KLF2表达与冠脉病变程度及主要心脏不良事件发生的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)、Kruppel样因子2(KLF2)表达与冠脉病变程度及主要心脏不良事件(MACE)发生的关系。方法选取106例AMI患者为研究对象,根据冠脉病变程度将患者分为轻度组(52例)和重度组(54例),根据MACE发生情况将患者分为MACE组(18例)和非MACE组(88例)。收集患者一般资料,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清ANGPTL8、KLF2水平,Spearman相关分析AMI患者血清ANGPTL8、KLF2水平与Gensini评分的相关性,多因素Logistic回归分析AMI患者冠脉病变程度的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ANGPTL8、KLF2水平预测AMI患者发生MACE的价值。结果重度组AMI患者高血压史、高血脂史患者比例,收缩压、舒张压、三酰甘油(TG)、N-末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,Gensini评分以及血清ANGPTL8水平高于轻度组(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平以及血清KLF2水平低于轻度组(P<0.05);且轻度组和重度组AMI患者病变支数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AMI患者血清ANGPTL8水平与Gensini评分呈正相关(r=0.638,P<0.05),血清KLF2水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.612,P<0.05)。高血压史、高血脂史、cTnI、ANGPTL8是AMI患者冠脉病变进展为重度的危险因素(P<0.05),而HDL-C、KLF2是保护因素(P<0.05)。MACE组血清ANGPTL8水平高于非MACE组(P<0.05),而血清KLF2水平低于非MACE组(P<0.05)。血清ANGPTL8、KLF2水平及二者联合预测AMI患者发生MACE的曲线下面积分别为0.740(95%CI:0.646~0.820)、0.799(95%CI:0.710~0.870)、0.806(95%CI:0.717~0.876)。结论血清ANGPTL8、KLF2表达均与AMI患者冠脉病变程度密切相关,且对MACE发生具有一定预测价值。

NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素8的机制

目的:研究幽门螺杆菌NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌趋化因子单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的机制。方法:利用NapA蛋白处理巨噬细胞,然后使用ELISA法检测上清中MCP-1和IL-8的表达量。使用C29、ST2825、SB203580、SP600125以及PDTC和巨噬细胞预先共孵育1 h,分别抑制Toll样受体2(toll-like receptors 2,TLR2)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核糖核酸酶p蛋白亚基p38(ribonuclease p-protein subunit p38,p38)、应激活化蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,c-Jun)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的活性,然后再加入NapA蛋白孵育4 h,收集上清并检查其中MCP-1和IL-8的表达量。结果:NapA蛋白刺激巨噬细胞后,MCP-1和IL-8的表达量明显高于未处理组。利用抑制剂C29抑制TLR2的活性,NapA蛋白诱导的MCP-1和IL-8表达量降低。使用ST2825、PDTC以及SB203580分别抑制MyD88、NF-κB以及p38的活性,能够降低NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8的能力,但是抑制c-Jun不影响NapA蛋白诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。结论:幽门螺杆菌NapA蛋白通过TLR2/MyD88/NF-κB通路诱导巨噬细胞分泌MCP-1和IL-8。

胃癌组织中趋化素样因子超家族8蛋白表达与胃癌上皮-间质转化关系及临床意义

目的:探讨趋化素样因子超家族8(CMTM8)蛋白表达与胃癌上皮-间质转化(EMT)的关系及临床意义。方法:采用免疫组化法检测78例胃癌及相应癌旁正常胃组织中CMTM8和EMT标志蛋白的表达,分析CMTM8表达与胃癌临床病理特征的关系及CMTM8表达与EMT标志蛋白的相关性;应用Western blot法检测胃癌组织中CMTM8和EMT标志蛋白的表达水平。结果:采用Pearson相关检验进行相关性分析显示:患者的性别、年龄、家族史、肿瘤直径、血清糖链抗原199(CA199)、血清血清癌胚抗原(CEA)、浆膜侵犯、淋巴结是否转移与CMTM8表达无相关性(均P>0.05),患者的疾病分化程度、TNM分期、发生远处转移与CMTM8表达呈正相关(均P<0.05);CMTM8与E-cadherin表达呈正相关(P<0.05),与Vimentin和N-cadherin表达呈负相关(均P<0.05)。胃癌组织中,CMTM8蛋白和E-cadherin蛋白表达水平低于癌旁正常黏膜组织(均P<0.05);胃癌组织中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平高于癌旁正常黏膜组织(均P<0.05)。结论:CMTM8、E-cadherin在胃癌患者中低表达,Vimentin、N-cadherin在胃癌组织中高表达,且CMTM8与E-cadherin表达呈正相关,与Vimentin和N-cadherin表达呈负相关,并通过参与EMT促进胃癌的侵袭转移。

乳脂球表皮生长因子8与阿尔茨海默病的关联

目的探讨乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)与阿尔茨海默病(AD)的关联。方法使用阿尔茨海默病神经影像计划数据库,多元线性回归用来研究MFG-E8与AD病理标志物以及脑结构的关联并进行亚组分析。使用混合效应模型研究MFG-E8与AD病理标志物和脑结构的纵向变化。中介分析用来研究MFG-E8与AD病理和脑结构之间的潜在关联。结果一共377例纳入研究,MFG-E8水平与脑脊液中β淀粉样蛋白42(Aβ_(42)),tau蛋白以及磷酸化tau蛋白(P-tau)浓度呈正相关,亚组分析结果显示,在男性、老年人以及携带APOE4基因的人群中,MFGE8水平与AD病理标志物的浓度及侧脑室体积的大小关联与总体人群一致。纵向结果表明,在随访时间内,MFGE8水平的升高与侧脑室体积扩大显著相关。此外,MFG-E8可通过影响Aβ_(42)水平改变侧脑室体积。结论MFG-E8与AD存在关联,可能通过AD病理标志物影响侧脑室体积变化。

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2和叉头样转录因子3 mRNA在原发性肝癌患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)叉头样转录因子3(Foxp3)的表达及相关关系。方法选择2014年1月-2016年12月在河北医科大学第三医院门诊及住院的原发性肝癌患者55例,同期选择健康自愿者35例为对照组。检测2组PBMC中TIPE2 mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平,并与肝脏血清生化指标、AFP、血白细胞及肿瘤大小、数量等进行相关性分析。符合正态分布的计量资料2组间比较采用t检验;不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料2组间比较采用χ2检验;相关分析采用Pearson相关性检验。结果2组患者ALT、AST、AST/ALT、TBil、WBC、AFP水平比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。原发性肝癌组患者TIPE2 mRNA表达较对照组明显降低(0.396±0.174 vs 1.045±0.330,t=12.187,P<0.01);而Foxp3 mRNA表达较对照组明显升高(4.498±1.672 vs 1.922±1.297,t=7.746,P<0.01)。TIPE2 mRNA表达与血清ALT、AST、AST/ALT及AFP均呈负相关(r值分别为-0.752、-0.833、-0.992、-0.848,P值均<0.05),而Foxp3 mRNA表达与ALT、AST、AST/ALT及AFP均呈正相关(r值分别为0.449、0.536、0.843、0.640,P值均<0.05)。TIPE2 mRNA表达与Foxp3 mRNA呈负相关(r=-0.821,P<0.01)。结论肝癌患者的TIPE2 mRNA表达下调,而Foxp3 mRNA表达上调,并与肝细胞损伤程度和AFP水平有一定的相关性,TIPE2基因可能通过负性调控Treg介导的免疫反应参与肝癌的发病过程。

母体血清GDF-15、ANGPTL8对胎儿先天性心脏病产前诊断的临床意义

目的探讨血清生长分化因子-15(GDF-15)、血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)在先天性心脏病(CHD)胎儿母体中的表达及其诊断胎儿CHD的价值。方法收集2020年1月—2023年3月甘肃省妇幼保健院产前诊断中心产前筛查疑似胎儿CHD的120例孕妇作为研究对象,根据产前彩色多普勒超声心动图诊断结果分为CHD组(n=86)和非CHD组(n=34)。比较2组血清GDF-15、ANGPTL8水平;多因素Logistic回归分析胎儿CHD发病的影响因素;ROC曲线分析血清GDF-15、ANGPTL8对胎儿CHD的诊断效能。结果与非CHD组比较,CHD组血清GDF-15、ANGPTL8水平显著升高(t/P=7.860/<0.001、7.334/<0.001);多因素Logistic回归分析结果显示,孕次≥3次、CHD家族史及血清GDF-15、ANGPTL8升高均是胎儿CHD发病的危险因素[OR(95%CI)=1.383(1.082~1.767),1.596(1.148~2.218),3.596(1.694~7.633),3.175(1.571~6.417)];血清GDF-15、ANGPTL8及二者联合预测胎儿CHD的AUC分别为0.805、0.835、0.903,二者联合诊断胎儿CHD优于血清GDF-15、ANGPTL8各自单独诊断(Z=2.052、2.219,P=0.040、0.027)。结论CHD胎儿的母体血清GDF-15、ANGPTL8水平显著升高,二者联合对胎儿CHD具有较高的辅助诊断潜能。

Kruppel样转录因子8的结构和功能多样性

Kruppel样转录因子8(KLF8)是KLFs家族中的一员,其在羧基端含有3个保守的C2H2锌指结构及氨基端可变的转录调节结构域,转录调节结构域含PVALS/T基序,在氨基端和羧基端内存在核定位序。KLF8在细胞侵袭和上皮-间质转化、细胞周期循环、细胞致癌性转化及各种肿瘤(肝癌、口腔癌、卵巢癌、胃癌)发生发展中发挥重要作用。

Krüpple样转录因子8在恶性肿瘤中的研究进展

Krüpple样转录因子8（KLF8）是KLFs家族中一名年轻的成员,能结合细胞中DNA的GC box或CACCC元件,调控富含GC启动子的基因表达,参与调节细胞周期。研究表明,KLF8在人体多种恶性肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展密切相关。

大豆ERF转录因子基因GmERF8的克隆与表达分析

ERF转录因子广泛存在于植物中并且参与植物应对生物及非生物胁迫的响应。本研究利用RT-PCR技术从大豆中克隆获得1个新的ERF转录因子基因Gm ERF8,开放阅读框全长627 bp,编码1个由208个氨基酸残基组成的分子量为23.43 k D的蛋白。蛋白结构预测发现,该蛋白含有1个典型的AP2/ERF结合域,2个预测的核定位信号和1个保守的EAR抑制元件。进化分析表明Gm ERF8蛋白与烟草Nt ERF3蛋白的同源性最高。实时荧光定量PCR表明,Gm ERF8在大豆的根和叶中表达量较高。ABA、高盐和低温处理均使Gm ERF8表达量下降;乙烯(ET)和干旱处理则使Gm ERF8的表达量先下降后升高。转录调节能力分析结果显示,Gm ERF8可以抑制报告基因的表达。上述实验结果表明,Gm ERF8可能作为转录抑制子参与大豆对环境胁迫的应答。

农杆菌介导热激转录因子8基因转化大豆

环境胁迫严重影响作物的生长和发育,热激转录因子(heat shock factor 8,HSF)是一类在热应激反应中起重要作用的蛋白质,主要功能是在热休克基因的表达过程中与相应热激元件结合,启动基因的转录过程,最终促进热休克蛋白(HSP)基因的表达。本文将热激转录因子8(hsf8)基因构建在植物表达载体pCAMBIA3300中,以大豆子叶节作为受体,通过农杆菌介导法将hsf8基因导入品质性状优良的两个高产大豆新品系哈交5337和哈交5489中,最后获得转基因植株。在开展大豆遗传转化过程中,探讨了农杆菌介导大豆子叶节转化体系的影响因素,优化了转化条件。在共培养后,采用延迟筛选的方法来提高选择效率。并确定草胺磷筛选浓度为3.5mg/L。获得转化质粒pCAMBIA3300-HSF8的转基因植株,其中T1代PCR阳性植株17株。采用Real-timePCR的方法对T1代抗性植株进行hsf8基因的转录水平的相对定量分析,确定9株较非转基因植株哈交5337表达量明显提高。有1株明显低于哈交5489的hsf8基因表达量。

农杆菌介导法将热激转录因子8基因转入大豆

植物转化是开展基因工程育种和鉴定基因功能的重要途径。本研究的目的在于向大豆受体导入热激转录因子8(heatshockfactor8,hsf8)基因,以加强目的基因hsp70的表达和增加转基因大豆的抗逆性,同时探索提高大豆转化率的途径。本文以大豆子叶节为外植体,通过农杆菌介导法将hsf8基因转入栽培大豆品种科新3号中,获得了13株抗卡那霉素的转化植株。PCR检测表明,其中的9株呈阳性反应,证明hsf8基因已整合到大豆基因组中。本实验获得的实际转化率为2.39%。文中讨论了选择适宜的种子灭菌方法和大豆受体品种对提高转化率的有效作用。

受青枯菌诱导表达的马铃薯转录因子类StWRKY8的克隆与表达分析

[目的]从接种青枯菌(Ralstonia solanacearum)的马铃薯中薯3号(Solanum tuberosum)中克隆类St WRKY8部分序列,分析其序列结构特征,研究该基因在感、抗病基因型马铃薯中受诱导的差异表达模式及其不同的组织表达定位。[方法]分别培养抗病基因型马铃薯ED13、感病基因型中薯3号至9—10叶期,以伤根浸菌法接种青枯菌菌株PO41。提取叶片总RNA,反转录为cDNA,使用PCR筛选cDNA差减试剂盒构建消减文库,筛选出384个阳性克隆作为原始SMART cDNA文库,采用5'-RACE法根据SMART-RACE cDNA扩增试剂盒说明克隆全长类St WRKY8。并分别应用生物信息学软件Bio Edit、BLAST、MEGA 5.0分析类St WRKY8的基因序列、序列相似性比对以及建立系统进化树。利用Prot Param、Prot Scale、SWISS-MODEL、Net Phos2.0 Server、WOLF PSORT、Target P1.1Server等在线服务器预测类St WRKY8的理化特性、三级结构、磷酸化位点以及亚细胞定位。提取马铃薯ED13、中薯3号接种青枯菌后的叶片总RNA,采样时间点分别为处理后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d和6 d,运用反转录PCR和荧光定量PCR检测类St WRKY8的表达情况。以类St WRKY特异PCR产物制备地高辛标记探针,取材料茎、叶组织制作石蜡切片,并与标记探针进行原位杂交,定位其组织表达。[结果]获得了类St WRKY8 cDNA部分序列,长563 bp,包括一个完整开放阅读框258 bp,编码85个氨基酸。类St WRKY8属于第二类WRKY,锌指结构类型为C2H2,具有一个典型的WRKY保守结构域。其氨基酸序列与茄科(Solanaceae)其他成员具有高度同源性,与马铃薯转录因子St WRKY8相似性高达98%。预测类St WRKY8等电点约为9.1,半衰期大于5.5 h,为水溶性蛋白,其三维结构为非球状分子,含有3个磷酸化位点,亚细胞定位于细胞内。类St WRKY8受青枯菌诱导后表达上调,且在感、抗病基因型马铃薯中表达有差异。类St WRKY8在感病基因型马铃薯接种青枯菌6 h内表达量较低,而在抗病基因型马铃薯接种青枯菌6 h内高强度表达。该基因主要在茎叶维管束系统的韧皮部表达,具有组织特异性。[结论]类St WRKY8具有转录因子的一般结构特征,受青枯菌等病菌的诱导表达,同时受寄主植物固有抗性的影响,在感、抗病基因型中表达模式不同。推测其在植物防御反应中发挥作用并参与机体调控。