D816V突变型KIT特异性诱导COS-1非洲绿猴肾细胞核不均一核糖核蛋白 L(HNRNPL)和HNRNPK磷酸化

目的探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用。方法在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNPK的磷酸化,通过激光共聚焦显微镜检测KIT、HNRNPL、HNRNPK在COS-1细胞中的定位。结果野生型KIT需要其配基干细胞因子(SCF)的刺激发生活化,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化。此外,KIT D816V可诱导HNRNPL和HNRNPK发生磷酸化,而野生型KIT无此功能。HNRNPL和HNRNPK在细胞核表达,野生型KIT在细胞膜和细胞质表达,而KIT D816V主要表达于细胞质。结论野生型KIT活化需要其配体SCF参与,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化,并能特异性诱导HNRNPL和HNRNPK磷酸化。

核不均一核糖核蛋白E1表达与人乳头瘤病毒18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者术后复发的相关性

目的检测核不均一核糖核蛋白E1(hnRNP E1)在人乳头瘤病毒(HPV)18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌组织中表达情况,探讨其与术后复发的关系。方法选取2016年6月至2019年2月北京核工业医院收治的80例HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者的癌组织标本和80例子宫良性疾病患者的正常宫颈组织标本作为研究对象,采用免疫组织化学染色法检测宫颈癌和正常宫颈组织中hnRNP E1蛋白的表达。根据宫颈癌患者术后3年内复发情况将患者分为复发组(n=15)和未复发组(n=65),分析hnRNP E1蛋白表达与HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者术后复发的关系及影响HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者术后复发的危险因素。结果HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌组织中hnRNP E1蛋白表达阳性率显著低于正常宫颈组织(P<0.05);复发组宫颈癌组织中hnRNP E1蛋白表达阳性率显著低于未复发组(P<0.05);肌层浸润深度、淋巴结转移、病理类型、脉管浸润、宫旁浸润、hnRNP E1蛋白表达与HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者术后复发有关(P<0.05);有脉管浸润、有宫旁浸润、hnRNP E1蛋白阴性表达是HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论hnRNP E1蛋白在HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌组织中阳性表达率降低,且与宫颈癌患者术后复发有关,可作为HPV18阳性Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者潜在的预后标志物。

核内不均一核糖核蛋白D和上皮细胞黏附分子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其意义

目的:探讨核内不均一核糖核蛋白D(hnRNPD)和上皮细胞黏附分子(EpCAM)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和正常口腔黏膜组织中的表达及其与OSCC患者临床病理特征的关系,阐明其在OSCC发生发展中的作用。方法:选取术前均未经放、化疗的38例OSCC患者的肿瘤组织(OSCC组)和11例正常拔牙患者的口腔黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学染色法检测OSCC组织和正常口腔黏膜组织中hnRNPD和EpCAM表达水平,并分析不同临床病理特征OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平,采用Spearman相关性检验分析OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达的相关性。结果:与对照比较,OSCC组肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平升高(Z=-4.936,P=0.000;Z=-2.780,P=0.005);不同性别和年龄OSCC患者肿瘤组织中EpCAM蛋白表达水平差异有统计学意义(Z=-2.471,P=0.013;Z=-1.967;P=0.049);不同临床病理特征OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。hnRNPD和EpCAM表达水平相关性较弱(ρ=0.227,P=0.17)。结论:OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平上调,两者促进了OSCC的发生发展。

核不均一核糖核蛋白与病毒复制

核不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类高度保守的RNA结合蛋白,广泛存在于动物的各种组织和细胞中,其主要生理功能是参与细胞中mRNA前体的剪接、mRNA的转运、mRNA的稳定性以及转录的调控。近年来的研究发现,hnRNPs可以通过与病毒核酸、病毒蛋白质结合,调控宿主细胞凋亡等机制影响病毒的复制过程。作者对hnRNPs与病毒复制关系的研究进展做一综述,以期为病毒与机体互作的研究提供参考。

核不均一核糖核蛋白功能与疾病关系的研究进展

核不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNPs)是人体广泛表达的一类蛋白,该蛋白家族与人体健康密切相关,hnRNPs参与了多种疾病的发生过程,如病毒疾病、肿瘤疾病、自身免疫性疾病等;hnRNPs也参与了特异基因的调节,如cyp2a5、CYP2A6、eNOS等;机体内物质纷繁,且hnRNPs又与其他物质之间存在千丝万缕的联系,因此需要进一步加强对hnRNPs与相关疾病发病机制以及对特异基因调节机制的研究,揭开其中的奥秘。

人源核不均一核糖核蛋白E1真核表达载体在神经细胞中的表达

背景:人源核不均一核糖核蛋白E1功能广泛,可参与神经系统骨架蛋白的表达。目的:为深入研究其在神经细胞中的作用,构建其真核表达载体,观察其在神经细胞中的表达。方法:利用真核表达载体pcDNATM4/His C,通过亚克隆构建核不均一核糖核蛋白E1-pcDNATM4/His C重组质粒,经酶切、测序鉴定,通过转染神经细胞SH-SY5Y,采用western-blot,RT-PCR鉴定核不均一核糖核蛋白E1重组质粒的表达,并观察转染细胞的生长现象。结果与结论:成功构建了核不均一核糖核蛋白E1的真核表达载体,mRNA和蛋白水平上均证实了该质粒可在神经细胞SH-SY5Y中正确表达。SH-SY5Y细胞在转染核不均一核糖核蛋白E1后表现为加速生长。提示该蛋白对神经细胞的生长发育具有重要的作用。该载体为进一步研究核不均一核糖核蛋白E1在神经系统中的功能提供了前提条件。

HSVⅠ感染L-02细胞对核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)表达影响

单纯疱疹病毒(HSVⅠ)对宿主细胞转录及mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体系,探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,通过Western blot,Northern blot等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。

痰中检测核不均一核糖核蛋白A2/B1早期诊断肺癌的意义

目的:探讨检测痰中核不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在肺癌早期诊断中的意义。方法:收集63例疑诊肺癌患者的痰标本,分别采用痰涂片、痰细胞块切片细胞学检查(镜检找到癌细胞即诊断为肺癌)及痰细胞块切片免疫组织化学检测hnRNP A2/B1(表达阳性即诊断为肺癌)进行诊断,比较2种诊断方法的结果。结果:痰涂片及痰细胞块切片细胞学检查诊断肺癌的敏感度为31.8%,特异度为100%。痰细胞块检测hnRNP A2/B1诊断肺癌的敏感度为80%,特异度为68.4%。检测痰hnRNP A2/B1的敏感度显著高于痰细胞学检查(P<0.01)。结论:痰细胞块结合免疫组织化学法检测hnRNP A2/B1有助于发现早期肺癌。

检测核不均一核糖核蛋白A2/B1在胸水细胞学鉴别诊断中的意义

目的:观察核不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)在胸水转移性肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达,评价其用于两者鉴别诊断的价值。方法:采用细胞块技术对100例胸水进行免疫组织化学检测,观察hnRNPA2/B1在肺腺癌细胞和间皮细胞中的表达。结果:hnRNPA2/B1标记肺腺癌细胞的敏感度为100%,特异度为70%。结论:检测hnRNPA2/B1对鉴别胸水肺腺癌细胞和间皮细胞很有帮助。

核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用。方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体p EGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力。结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成c DNA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体p EGFP-C1中,成功构建真核表达载体p EGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加。结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖。

酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的功能伙伴

背景:酵母双杂交系统3是目前最常用的筛选相互作用蛋白质的技术平台。目的:运用酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的相互作用子。方法:构建酵母细胞表达载体hnRNPE1-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达,进行毒性和自激活检验,与转化了cDNA文库的酵母菌Y187接合,经过营养删除、滤膜反应以及回交试验筛选酵母文库中与hnRNP E1相互作用的蛋白。结果与结论:hnRNP E1蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象。经缺陷培养基3次传代及滤膜反应初步筛选出了16个候选基因,再经NCBI基因比对(BLASTN和BLASTP)及酵母细胞中的免疫沉淀反应最终获得了8个候选蛋白。提示hnRNP E1可能参与特定细胞内的复制,转录,mRNA运输、细胞周期、细胞自噬及免疫应答的过程,并且可能参与某些遗传病的发病过程。

原发性肝细胞肝癌中核不均一核糖核蛋白A_1的定位及临床意义

目的:观察核不均一核糖核蛋白A_1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A_1,hnRNP A_1)在原发性肝细胞肝癌(肝癌)中的定位,初步分析该蛋白定位与肝癌患者临床病理特征之间的相关性及其预测患者术后复发转移的临床价值。方法:由323例肝癌患者肝癌组织构成组织芯片集,采用免疫组织化学染色技术,观察肝组织中hnRNP A_1的定位,分析hnRNP A_1定位与临床病理特征及患者预后的相关性。结果:hnRNP A_1蛋白在正常肝细胞核中表达呈弱阳性,在肝癌组织的细胞核和细胞质中均有不同程度的阳性表达。hnRNP A_1在肝癌细胞质中定位的肝癌患者的术后预后最差。结论:hnRNP A_1蛋白是较好的独立预后指标,其能准确预测肝癌患者术后的预后。

核不均一核糖核蛋白L在肿瘤中作用机制的研究进展

核不均一核糖核蛋白(hnRNP)家族的重要成员hnRNP L,是一类主要位于细胞核的RNA结合蛋白。近年来发现,hnRNP L除了在免疫系统形成中发挥重要作用外,还在多种肿瘤中异常表达。进一步研究发现,hnRNP L促进肿瘤细胞的各种生物学过程,包括增殖、迁移和侵袭,并与预后相关,提示其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用。本文通过总结hnRNP L在各种癌症中的作用机制,探讨hnRNP L的临床意义。

大鼠脑缺血再灌注后核不均一性核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1在脑皮质的表达变化

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后核不均一性核糖核蛋白(Heterogeneous Nuclear Ribonulcleoprotein,hnRNP)A2/B1的表达变化与再灌注损伤时间关系。方法建立大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,检测缺血再灌注损伤后3、6、12、24、48h、72h在缺血侧大脑皮质四个区域hnRNPA2/B1含量变化,并与假手术对照组进行比较。结果与假手术组比较,hnRNPA2/B1表达量在脑缺血再灌注3h、6h、12h、24h明显下降(P<0.01)。48h后,hnRNPA2/B1蛋白表达量明显上升(P<0.01)。结论hnRNPA2/B1可能在基因转录水平参与保护调控缺血再灌注脑损伤。

核不均一核糖核蛋白A1在肿瘤发病机制中作用的研究进展

核不均一核糖核蛋白（hnRNP）家族是近年来研究较热的一组核内RNA结合蛋白,它们在许多方面参与肿瘤的发生、发展,其中hnRNP A1是对肿瘤生物学特性影响较大的hnRNP家族成员之一.目前的研究认为,hnRNP A1主要通过调节RNA表达、促进端粒延长、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖等机制参与肿瘤的发生、发展.本文就hnRNP A1在肿瘤发病机制中的研究进展作一概述.

核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)对单纯疱疹病毒(HSVⅠ)复制影响

本文研究了单纯疱疹病毒(HSVⅠ)在感染与复制过程中影响宿主细胞RNA转录,蛋白表达,进而为病毒的潜伏和持续感染创造必要条件.采用基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,构建pcDNA-hnRNP H2真核表达载体及hnRNP H2稳定转染的293T细胞系的方法,研究在核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)稳定过表达后对HSVⅠ病毒复制周期的影响.结果表明,病毒滴度和生长曲线显示,hnRNP H2可以显著影响病毒复制周期.过表达hnRNP h2的细胞系与对照相比,其病毒滴度明显下降,hnRNP H2在HSVⅠ病毒复制中起到比较明显的抑制作用,其作用机理还有待进一步研究.

核不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)在慢性肝病不同病理阶段的表达水平

目的:观察核不均一核糖核蛋白K(heterogeneous ribonucleoprotein K,hnRNP K)在健康体检者、慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液和尿液中的表达差异,探讨hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段表达水平及与乙肝相关性原发性肝癌的相关性。方法:选取2018年8月至2018年10月我院收治的健康体检者50例、慢性乙型病毒性肝炎患者43例、肝炎后肝硬化患者35例及乙肝相关性原发性肝癌患者53例,采集其空腹外周静脉血5 mL及清洁中段晨尿标本,利用ELISA分别检测hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段血液和尿液中表达的含量,绘制ROC曲线评价hnRNP K在原发性肝癌诊断中的意义。结果:hnRNP K在慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液、尿液中表达水平均高于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎相关性原发性肝癌患者血清hnRNP K的ROC曲线AUC为0.775,敏感度和特异度分别为76.9%和64.3%;尿液hnRNP K的ROC曲线AUC为0.652,诊断乙肝相关性原发性肝癌的敏感度和特异度分别为100%和28.6%。结论:相较于健康体检者,慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者的血清、尿液中hnRNP K表达水平上调,与乙肝相关性原发性肝癌具有相关性,提示hnRNP K可能是乙肝相关性原发性肝癌的潜在标志物,对原发性肝癌的诊断具有一定参考价值。

核不均一性核糖核蛋白在RNA加工过程中的作用

在真核细胞中， 初始转录产物（ 前体ｍＲＮＡ） 经过一系列复杂的转录后加工过程形成成熟的ｍＲＮＡ． 在这一过程中， 大量蛋白质和加工因子有序汇集在核糖核蛋白复合体中并参与对前体ＲＮＡ 的加工过程． 该复合体中的蛋白质部分主要由一类约２０ 种称为核不均一性核糖核蛋白的多肽分子构成． 除了早期了解的一些结构性功能外， 近来已有许多证据显示这些蛋白质在细胞中ＲＮＡ

核内不均一核糖核蛋白A3与疾病关系的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)是人体内一大类的RNA结合蛋白家族,该家族可作为“RNA骨架”,参与核酸代谢的多个环节,包括可变剪接、信使核糖核酸(message RNA,mRNA)稳定以及转录和翻译调控等方面,并最终在细胞的生物学过程中发挥关键作用。与该家族中被广泛关注的成员hnRNP A1、hnRNP A2/B1相比,hnRNP A3是一个较少被研究的蛋白。本文就hnRNP A3在多种疾病中的表达情况、临床价值以及内在机制的研究进展做一综述,旨在为相关疾病的机制探讨及新型治疗靶点的挖掘提供依据。