p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:体外培养SKOV3细胞,根据实验药物不同分成4个实验组:control组、BMH-21(核仁应激诱导剂)组、pifithrin-α(PFT-α;p53抑制剂)+BMH-21组和RG7112(抑制p53降解并激活p53通路)+BMH-21组。MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平,以及BMH-21诱导的核仁应激的发生;Western blot法检测蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,BMH-21组细胞活力比control组显著下降(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞活力与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著下降(P<0.01);荧光显微镜观察发现,BMH-21组p53蛋白表达水平比control组显著升高,PFT-α+BMH-21组p53蛋白表达水平比BMH-21组显著降低,而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高,且大部分入核堆积;Western blot结果显示,BMH-21组p53蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组p53蛋白表及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比BMH-21组显著降低(P<0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01);流式细胞术结果显示,BMH-21组细胞凋亡率比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞凋亡率与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01)。结论:BMH-21诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生核仁应激时,抑制p53对细胞凋亡无明显影响,而激活和稳定p53会促进细胞凋亡。

肾缺血再灌注损伤与核仁应激的相关性研究

目的:研究核仁应激是否参与了肾缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI),并进一步探索核仁应激的分子机制,为临床防治肾IRI提供新的靶点。方法:将48只雄性昆明小鼠根据肾脏缺血时间不同随机平均分为4组:对照(control)组(0 min)及IRI 30 min组、45 min组和60 min组,采用微创手术夹同时夹闭双侧肾动脉的方法建立急性肾IRI模型。24 h后取眼球血测定血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)和血清肌酐(serum creatinine, SCr)浓度;取双肾计算肾系数;并采用HE染色观察肾组织病理学改变;提取肾皮质组织总蛋白和RNA进行Western blot及RT-qPCR检测,待测指标包括p53蛋白、45S pre-rRNA、18S rRNA、Bax mRNA和Bcl2 mRNA。结果:与control组相比,IRI组BUN和SCr浓度上升(P<0.01),肾系数及病理损伤范围增大(P<0.01);肾组织结构和功能损害与缺血时间呈正相关(r>0.80,P<0.01)。与control组相比,IRI组皮质细胞内p53蛋白含量显著增加(P<0.05),Bax mRNA表达上调(P<0.01),同时45S pre-rRNA、18S rRNA和Bcl2 mRNA含量下降(P<0.01)。结论:IRI造成的肾组织结构和功能损害可能与核仁应激密切相关。IRI可能通过阻碍rDNA转录导致核仁应激,从而激活下游p53诱导的细胞凋亡。

哺乳动物核仁应激研究进展

核仁是一种能够在多种生理和病理生理过程中起作用的动态结构,当核仁受到应激源刺激而使其功能被扰动时便会引起“核仁应激”发生。核仁应激会导致核仁体积变小、rRNA合成受阻、核仁应激相关蛋白发生核质转位以及细胞周期阻滞。目前,核仁应激在许多领域已成为研究热点。本文对核仁应激以及核仁应激对哺乳动物肿瘤细胞和胚胎着床的调控进行综述,为核仁应激的进一步研究提供参考。

核仁应激研究进展

核仁应激(nucleolar stress)指的是多种细胞损伤引起的核仁结构和功能异常,最终导致P53或其他应激信号通路的激活和细胞行为的改变。核仁作为细胞应激感受器,在细胞应激反应网络中处于中枢地位,核仁功能异常与肿瘤、神经退行性疾病等多种疾病相关。该文就核仁应激的诱因、特征、信号通路、生物学功能及其与人类疾病相关研究进展进行综述。

核仁应激、核糖体病与出生缺陷

核仁是细胞重要的组成部分,不仅与人类的生命活动有关,而且还与各种疾病的发生,特别是新生儿的各种先天缺陷有关。编码核糖体蛋白的基因突变或核糖体合成障碍会诱发核仁应激,产生核糖体病。许多出生缺陷疾病,如Treacher Collins综合征、塞克尔综合征、Diamond-Blackfan贫血、Prader-Willi综合征、神经管畸形、先天性角化病、唐氏综合征,都与核仁有关,既属于核糖体病又属于出生缺陷。此综述主要论述了核仁应激和出生缺陷,并进一步讨论了该领域当前存在的问题和未来的发展前景。

帕金森病与核仁应激

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是中老年人常见的神经系统变性疾病，以静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势步态异常等为主要表现，其病理特征主要是中脑黑质（substantia nigra，SN）的多巴胺能神经元（dopaminergic neurons，DA）进行性丢失。核糖体RNA（rRNA）的转录下调是在应激状态下维持细胞稳态的主要方式。核仁应激即核仁的结构和功能的破坏，是变性疾病过程中新近发现的改变。近期研究表明PD患者对应激状态的反应及其调节机制受损，而代谢应激可能是PD的一种诱发机制。本文我们就PD与核仁应激的关系及机制进行综述。

补肾化痰复方对APP/PS1双转基因小鼠海马区核仁应激-MDM2-P53信号通路的影响

目的:探讨补肾化痰复方对APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(AD)模型小鼠海马区核仁应激及其下游MDM2-P53通路的影响。方法:AD小鼠分为模型组、西药组、中药低剂量组和高剂量组。正常组由同品系非转基因小鼠组成。西药组用盐酸多奈哌齐干预,剂量为0.65 mg·kg^(-1)·d^(-1)。中药高剂量组用补肾化痰复方干预,剂量为6.5 g·kg^(-1)·d^(-1),中药低剂量组的剂量减半。正常组和模型组给与等体积的ddHO。药物干预90 d后,取各组小鼠海马组织,实时荧光定量PCR检测rRNA转录水平;重亚硫酸盐测序法检测rDNA启动子区域甲基化水平;免疫荧光染色检测核仁形态;Western Blot检测核糖体蛋白(RPL5和RPL11)、MDM2,P53和pP53的表达量。结果:与正常组比较,AD模型组小鼠海马区表现出显著的核仁应激反应,包括rRNA转录水平降低、rDNA启动子区域甲基化水平升高、核仁体积减小和阳性细胞率降低(P<0.01),核糖体蛋白(RPL5和RPL11)、MDM2、P53和pP53蛋白表达量升高(P<0.01,P<0.05)。与盐酸多奈哌齐比较,补肾化痰复方能更加有效地缓解AD小鼠的核仁应激压力和逆转上述各项变化。结论:补肾化痰复方能缓解AD诱发的核仁应激压力,并能借助于MDM2-P53通路调控细胞命运,从而缓解AD进程。

BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的探讨核仁应激对人肝癌BEL-7402细胞的凋亡诱导作用。方法以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,依据给药剂量实验分为4组:对照组(0μmol/L),1、2和4μmol/L组。MTT检测BEL-7402细胞生存率,共聚焦显微镜观察核仁应激标志蛋白变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达。结果 MTT结果表明BMH-21对BEL-7402细胞生长抑制作用呈剂量依赖性,共聚焦显微镜观察发现BMH-21诱导BEL-7402细胞核仁应激标志蛋白发生变化,流式细胞仪检测结果表明BMH-21以剂量依赖性的方式诱导细胞凋亡,蛋白印迹结果显示凋亡相关蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 BMH-21诱导人肝癌BEL-7402细胞核仁应激,导致细胞凋亡的发生。