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乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达
1
作者
郝经伟
潘婷
+6 位作者
李月
朱文斌
段文博
刘立琨
岳丽玲
刘云龙
高秀丽
《解剖学报》
CAS
CSCD
2024年第2期196-202,共7页
目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制...
目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。
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关键词
乳腺癌
核仁磷蛋白乙酰化
定点突变
蛋白
质组学
人
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题名
乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达
1
作者
郝经伟
潘婷
李月
朱文斌
段文博
刘立琨
岳丽玲
刘云龙
高秀丽
机构
齐齐哈尔医学院医学技术学院
齐齐哈尔医学院药学院
齐齐哈尔医学院医药科学研究院
齐齐哈尔医学院附属第二医院肿瘤外科
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
2024年第2期196-202,共7页
基金
国家自然科学基金(81972491)
黑龙江省教育厅面上项目(2022-KYYWF-0831)
+1 种基金
齐齐哈尔医学科学院临床科研基金(QMSI2021L-14)
齐齐哈尔医学院研究生创新基金(QYYCX2022-18)。
文摘
目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。
关键词
乳腺癌
核仁磷蛋白乙酰化
定点突变
蛋白
质组学
人
Keywords
Breast cancer
Nucleophosmin acetylation
Site-directed mutation
Proteomics
Human
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达
郝经伟
潘婷
李月
朱文斌
段文博
刘立琨
岳丽玲
刘云龙
高秀丽
《解剖学报》
CAS
CSCD
2024
0
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