RP11-386G11.10在三阴性乳腺癌组织中的表达及其对细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨三阴性乳腺癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)RP11-386G11.10的表达及其通过调控miR-1299-3p/葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)分子轴对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法:收集46例三阴性乳腺癌组织及癌旁组织,RT-qPCR检测RP11-386G11.10在其中的表达以及在正常乳腺上皮MCF-10A细胞和三阴性乳腺癌细胞系(MDA-MB-435、CAL-51、BT-549、MDA-MB-231)中的表达。si-NC慢病毒和si-RP11-386G11.10慢病毒感染BT-549细胞(即si-NC组和si-RP11-386G11.10组),克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测感染后BT-549细胞中miR-1299-3p和GLUT-1 mRNA的表达;双荧光素酶报告基因实验验证RP11-386G11.10与miR-1299-3p的靶向关系。RT-qPCR检测GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中的表达;Pearson法检测RP11-386G11.10与GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中表达的关系。免疫印迹检测沉默RP11-386G11.10对BT-549细胞中GLUT-1蛋白以及JAK2/STAT3通路蛋白表达的影响。结果:与癌旁组织相比,三阴性乳腺癌组织中RP11-386G11.10的表达显著升高。与MCF-10A细胞相比,三阴性乳腺癌细胞系(MDA-MB-435、CAL-51、BT-549、MDA-MB-231)中RP11-386G11.10的表达均显著升高。与si-NC组BT-549细胞相比,si-RP11-386G11.10组细胞增殖能力和迁移能力均显著降低,miR-1299-3p表达显著升高,GLUT-1mRNA表达显著降低。RP11-386G11.10能够靶向互补结合miR-1299-3p。与癌旁组织相比,三阴性乳腺癌组织中GLUT-1 mRNA表达显著增加;Pearson法分析显示RP11-386G11.10与GLUT-1 mRNA在三阴性乳腺癌组织中的表达呈正相关。与si-NC组BT-549细胞比较,si-RP11-386G11.10组细胞中GLUT-1蛋白表达显著降低,JAK2/STAT3通路转导被抑制。结论:RP11-386G11.10在三阴性乳腺癌中表达显著上调,沉默RP11-386G11.10能够抑制三阴性乳腺癌BT-549细胞的增殖能力和迁移能力,其作用机制可能与靶向调控miR-1299-3p/GLUT-1分子轴有关。

血清可溶性神经调节蛋白-1、G蛋白偶联雌激素受体-1在急性胰腺炎患者病情及预后评估中临床价值研究

目的探讨血清可溶性神经调节蛋白-1(sNRG-1)、G蛋白偶联雌激素受体-1(GPER-1)在急性胰腺炎(AP)患者病情及预后评估中的临床价值。方法选取自2019年6月至2022年6月邯郸市第一医院收治的106例AP患者为研究对象,根据AP病情严重程度分为轻症组(n=49)、中重症组(n=36)及重症组(n=21);根据预后生存情况分为存活组(n=83)与死亡组(n=23)。采用酶联免疫吸附法检测血清sNRG-1、GPER-1水平。采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清sNRG-1、GPER-1及两者联合检测对AP患者预后的评估价值。采用多因素Logistic回归分析探讨AP患者预后影响因素。结果中重症组、重症组患者血清sNRG-1水平低于轻症组,且重症组低于中重症组;中重症组、重症组患者血清GPER-1水平高于轻症组,且重症组高于中重症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。存活组与死亡组病情严重程度、入院急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、白细胞计数、C反应蛋白、血肌酐、乳酸脱氢酶、血淀粉酶、血脂肪酶、sNRG-1、GPER-1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。APACHEⅡ评分≥12分、sNRG-1≤17.74 pg/ml、GPER-1≥4.82 pg/ml是影响AP患者预后的独立危险因素(P<0.05)。血清sNRG-1、GPER-1预测AP患者预后的ROC曲线下面积分别为0.846、0.753。两者联合预测AP患者预后的ROC曲线下面积为0.917,特异度为86.75%,灵敏度为86.96%。结论血清sNRG-1低表达、GPER-1高表达与AP患者的病情严重程度及预后有关,有望作为评估AP患者预后的生物学指标。

Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。

肺癌患者GASP-1、LCN2和TPX2的表达水平及其与TNM分期和预后的相关性分析

目的探究肺癌患者血清G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、脂质运载蛋白-2(LCN2)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平及其与TNM分期和预后的相关性。方法选取2019年4月至2022年5月在南部战区总医院接受诊疗的92例肺癌患者作为观察组,同期选取92例健康体检者作为对照组。采集所有研究对象的外周静脉血样,检测血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。将观察组按预后情况分为预后良好组和预后不佳组,比较2组患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。分析肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与TNM分期和预后的相关性。结果观察组血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于对照组(P<0.05);观察组TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期的肺癌患者(P<0.05),TNM分期为Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均高于TNM分期为Ⅲ期的患者(P<0.05)。预后良好组血清GASP-1、LCN2、TPX2水平均低于预后不佳组(P<0.05);观察组治疗前血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与TNM分期呈正相关(P<0.05),治疗后血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与预后呈负相关(P<0.05)。结论血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与肺癌患者的TNM分期相关,在对症治疗后检测上述血清指标,可在一定程度上反映患者预后情况,为临床提供参考。

基于cDNA末端快速扩增的刚地弓形虫核仁G蛋白-1的克隆

目的 克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法 根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3’-端和5’-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性。结果 5’-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长12 87bp ,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5’-RACE在5’端扩增获得未知序列为1196bp。3’-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为16 34bp ,去除引物和已知序列,经3’-RACE扩增获得的3’-端未知序列为12 0 4bp。Blast全长为316 7bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(6 5 0bp 2 80 9bp)。推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa) ,在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的。该序列已登录NCBIGeneBank ,核酸序列登录号AY6 86 734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94 2 90。结论 本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析。

舒洛地特对糖尿病足溃疡大鼠HIF-1α/GPER/VEGF通路及创面愈合的影响

目的探讨舒洛地特对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠低氧诱导因子(HIF)-1α/G蛋白耦联雌激素受体(GPER)/血管内皮生长因子(VEGF)通路及创面愈合的影响。方法构建DFU模型大鼠,分为模型组和舒洛地特低、中、高剂量组(分别腹腔注射5、10、20 mg/kg舒洛地特),每组8只,另取8只大鼠设为对照组,连续给药14 d。给药0、3、7、14 d,检测大鼠血糖水平;给药7、14 d,计算创面愈合率;给药结束后,酶联免疫吸附试验(ELISA)印迹检测血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,苏木素-伊红(HE)染色观察创面组织病理变化,Western印迹检测创面组织HIF-1α、GPER、VEGF蛋白表达。结果与对照组相比,模型组和舒洛地特低、中、高剂量组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药0、3、7、14 d血糖水平均显著升高(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d创面愈合率均显著降低(P<0.05),创面组织中存在大量炎症细胞及少量新生毛细血管;与模型组相比,舒洛地特低、中、高剂量组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药3、7、14 d血糖水平均显著降低(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d的创面愈合率均显著升高(P<0.05),创面组织中存在少量炎症细胞及大量新生毛细血管;随着舒洛地特剂量的升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药3、7、14 d血糖水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d大鼠创面愈合率均逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),创面组织炎症细胞浸润程度逐渐减轻,新生毛细血管数量逐渐增多。结论舒洛地特可降低DFU大鼠血糖及炎症水平,激活HIF-1α/GPER/VEGF通路,促进新生毛细血管生成,改善创面愈合情况。

IGHG1对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)对急性髓系白血病(AML)细胞系THP-1细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养人AML THP-1细胞,分为对照(正常培养的THP-1细胞)、pcDNA3.1[转染IGHG1过表达(pcDNA3.1-IGHG1)阴性对照质粒的THP-1细胞]、pcDNA3.1-IGHG1(转染pcDNA3.1-IGHG1的THP-1细胞)、LY364947[转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)抑制剂LY36494720μmol/L处理THP-1细胞)]、si-NC[转染IGHG1小干扰RNA(IGHG1-siRNA)阴性对照的THP-1细胞]、si-IGHG1(转染IGHG1-siRNA的THP-1细胞)和si-IGHG1+LY364947(IGHG1-siRNA和LY364947共同处理THP-1细胞)共7组。荧光定量PCR法检测各组THP-1细胞中IGHG1和免疫球蛋白G(IgG)mRNA的表达;CCK-8法检测各组THP-1细胞增殖活力;流式细胞术检测各组THP-1细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白印迹法检测各组THP-1细胞增殖、凋亡及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,过表达IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、IgG、TGF-β1、磷酸化Smad3(p-Smad3)/Smad3蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。抑制TGF-β/Smad信号通路或沉默IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);且与沉默IGHG1相比,IGHG1基因沉默和TGF-β/Smad通路抑制共同处理的THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:沉默IGHG1基因可下调IgG的表达,抑制人AML THP-1细胞增殖,阻滞细胞周期进程,并诱导细胞凋亡;其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路的激活有关。

全血NPM1、MCP-1和肠道菌群与胃癌进展及预后相关

目的探讨全血核仁磷酸蛋白1(NPM1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肠道菌群与胃癌进展及预后的相关性。方法选取2018年5月至2020年5月在南阳市第二人民医院收治的胃癌患者120例作为胃癌组,另选取同期胃镜检查胃良性病变患者120例作为胃良性病变组,再选取同期健康体检者120例作为对照组。RT-qPCR检测NPM1 mRNA、MCP-1 mRNA转录水平;用MicroScan微生物鉴定分析系统检测肠道菌群;用Pearson法分析血清NPM1、MCP-1和肠道菌群的相关性;用多因素COX回归分析胃癌患者预后的影响因素。结果对照组、胃良性病变组和胃癌组NPM1 mRNA、双歧杆菌和乳酸杆菌水平依次降低(P<0.05),而MCP-1 mRNA、肠球菌和大肠埃希菌水平依次升高(P<0.05)。胃癌Ⅲ~Ⅳ期的NPM1 mRNA、双歧杆菌和乳酸杆菌水平显著低于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),MCP-1 mRNA、肠球菌和大肠埃希菌水平显著高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。Pearson相关性分析表明,胃癌患者NPM1 mRNA与MCP-1 mRNA水平呈负相关(P<0.05),NPM1 mRNA与双歧杆菌和乳酸杆菌呈正相关(P<0.05),与肠球菌和大肠埃希菌呈负相关(P<0.05),MCP-1 mRNA与与双歧杆菌和乳酸杆菌呈负相关(P<0.05),与肠球菌和大肠埃希菌呈正相关(P<0.05)。预后不良组NPM1 mRNA、双歧杆菌和乳酸杆菌水平显著低于预后良好组(P<0.05),MCP-1 mRNA、肠球菌和大肠埃希菌水平显著高于预后良好组(P<0.05)。COX回归分析表明,MCP-1 mRNA、肠球菌和大肠埃希菌是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05),NPM1 mRNA、双歧杆菌、乳酸杆菌是保护因素(P<0.05)。结论胃癌患者中NPM1、肠道双歧杆菌和乳酸杆菌水平降低,MCP-1、肠球菌和大肠埃希菌水平升高,其均与胃癌进展和预后密切相关。

血清sLOX-1、Apelin-13、YKL-40水平对急性脑梗死患者早期神经功能恶化的预测效能

目的探讨血清可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)、孤独G蛋白偶联受体配体-13(Apelin-13)、甲壳质酶蛋白-40(YKL-40)水平对急性脑梗死(ACI)患者早期神经功能恶化(END)的预测效能。方法选取2021年4月至2024年5月安阳市人民医院收治的219例ACI患者进行前瞻性研究,根据住院期间是否发生END分为END组(n=48)、无END组(n=171)。比较两组基线资料及血清s LOX-1、Apelin-13、YKL-40水平,采用Pearson法、偏相关性系数分析END组血清各指标与△美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性、偏相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析各指标对END的预测价值,采用K-M生存曲线分析各指标表达水平对ACI预后的影响。结果END组患者入院时的NIHSS评分及血清sLOX-1、YKL-40水平分别为(12.96±4.20)分、(3.07±0.93)ng/mL、(119.38±25.76)μg/L,明显高于无END组的(9.17±3.00)分、(2.44±0.78)ng/mL、(87.52±19.43)μg/L,Apelin-1为(40.94±9.58)ng/mL,明显低于无END组的(48.63±12.31)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,血清sLOX-1、YKL-40水平与△NIHSS评分呈正相关性(r=0.679、0.730,P<0.001),Apelin-13与之呈负相关性(r=-0.814,P<0.001);偏相关性分析结果显示,血清s LOX-1、YKL-40水平仍与△NIHSS评分呈正相关性,Apelin-13仍与之呈负相关性(P<0.001);ROC分析结果显示,s LOX-1、Apelin-13、YKL-40联合预测END的曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.961),优于单独预测价值;以Cut-off值为界,K-M生存曲线显示,血清sLOX-1、YKL-40高水平亚组不良预后率分别为27.66%、30.77%,明显高于低水平亚组的4.80%、5.67%,Apelin-13高水平亚组不良预后率为8.41%,明显低于低水平亚组的20.54%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论sLOX-1、Apelin-13在急性ACI发生END患者血清中表达上调,YKL-40表达下调,且各指标水平均与预后相关,联合检测对END具有一定预测价值,可作为临床预测END、评估预后的辅助指标,并指导临床防治工作。

食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨食管癌组织微小核糖核酸-758-3p(miR-758-3p)、核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)表达变化及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择食管癌患者97例,取手术切除的食管癌组织及其癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达。通过TargetScan数据库预测miR-758-3p与NUSAP1的结合位点,分析食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达的关系以及二者表达与临床病理特征和预后的关系。结果与癌旁正常组织比较,食管癌组织miR-758-3p相对表达量降低,NUSAP1 mRNA相对表达量升高(t分别为23.037、25.253,P均<0.05)。经TargetScan数据库预测,NUSAP1基因3′非翻译区583~589位点处存在miR-758-3p的结合位点。Pearson相关分析显示,食管癌组织miR-758-3p表达与NUSAP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.732,P<0.01)。食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA表达与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、病理类型、吸烟史、饮酒史、肿瘤最大径无关(P均>0.05)。以食管癌组织miR-758-3p、NUSAP1 mRNA相对表达量的均数为临界值,将患者分为miR-758-3p高表达者(≥0.64,47例)与miR-758-3p低表达者(<0.64,50例)、NUSAP1 mRNA高表达者(≥3.19,43例)与NUSAP1 mRNA低表达者(<3.19,54例)。生存分析发现,miR-758-3p高表达者3年累积生存率高于其低表达者,NUSAP1 mRNA高表达者3年累积生存率低于其低表达者(Log-rankχ^(2)分别为5.682、6.918,P均<0.05)。结论食管癌组织miR-758-3p低表达、NUSAP1 mRNA高表达,二者表达变化与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移以及患者预后密切相关。

长链非编码RNA SNHG1靶向miR-340-5p/CCND1轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)靶向miR-340-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:体外培养人食管上皮细胞、食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109,qRT-PCR法测定细胞中LncRNA SNHG1、miR-340-5p、CCND1 mRNA水平。将对数期NEC细胞分为对照组、sh NC1组、sh LncRNA SNHG1组、sh NC2组、sh CCND1组、sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组、sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组。CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室法测定细胞侵袭、迁移能力,Western blot法检测CCND1、Ki-67、MMP-2蛋白表达,双荧光素酶验证miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1的靶向关系,通过裸鼠瘤内注射转染试剂进行体内试验。结果:与人食管上皮细胞相比,食管癌细胞KYSE-30、TE-1、NEC、Eca109中LncRNA SNHG1、CCND1 mRNA表达升高,miR-340-5p表达降低(P<0.05),其中NEC细胞变化最显著,所以使用NEC作为下续研究菌株。与对照组、sh NC组相比,sh LncRNA SNHG1组NEC细胞LncRNA SNHG1、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2降低(P<0.05);与对照组、sh NC组相比,sh CCND1组CCND1 mRNA与蛋白表达、OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2表达降低(P<0.05)。miR-340-5p与LncRNA SNHG1、CCND1均靶向结合,与sh LncRNA SNHG1组相比,sh LncRNA SNHG1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);与sh CCND1组相比,sh CCND1+miR-340-5p inhibitor组OD_(450)、侵袭细胞数、迁移细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白表达升高(P<0.05);裸鼠移植瘤实验进行了体内验证。结论:LncRNA SNHG1沉默可能通过调控miR-340-5p/CCND1表达抑制食管癌NEC细胞增殖、侵袭与迁移,裸鼠体内也验证了这一结果。

纤维蛋白原Bβ-249C/T和Bcl-1G/A基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ-249C/T和Bcl-1G/A基因多态性与血浆Fg浓度、分子聚合活性等指标和脑梗死(CI)的关系。方法选取160例急性CI患者、114例陈旧CI患者和160例正常对照者,应用PCR方法进行Bβ-249C/T和Bcl-1G/A位点的基因多态性分析;采用微机辅助血浆Fg功能自动监测系统测定血浆Fg浓度、Fg单体聚合反应速率(FMPV)、最大光密度(Amax)、FMPV/Amax等。结果急性CI组Bβ-249C/T的CT+TT型FMPV/Amax低于CC型,Bcl-1G/A的GA+AA型Fg浓度、FMPV均高于GG型,陈旧CI组Bcl-1G/A的GA+AA型FMPV/Amax高于GG型,正常组Bcl-1G/A的GA+AA型Fg浓度高于GG型(P均<0.05)。结论FgBβBcl-1G/A变异基因型可调控血浆Fg含量,吸烟、血糖升高等因素可通过Bcl-1G/A变异基因型使血浆Fg浓度和FMPV的表达增强,Bcl-1G/A变异基因型是CI发病或复发的高危人群。

纤维蛋白原Bβ-249C/T和BβBcl-1G/A基因多态性与其浓度和分子聚合功能的关系

目的研究纤维蛋白原(Fg)Bβ-249C/T和BβBcl-1G/A基因多态性在多种生理和环境因素条件下对血浆Fg浓度和分子聚合功能的影响。方法采用整体抽样方法选取开滦集团职工1507人,样本均空腹抽取静脉血测定血糖等12项生化指标;应用聚合酶链反应-限制性酶切法进行两位点基因多态性分析;采用血浆Fg功能自动监测系统测定血浆Fg浓度和Fg单体聚合反应速率(FMPV)、最大吸光度(Amax)、FMPV/Amax等反映Fg分子活性的参数并进行体检和问卷调查。结果在有脑梗死史组BβBcl-1G/A的A等位基因和AA+GA基因型分布频率高于无脑梗死史人群(P<0.05),Bβ-249C/T的TT+CT组与CC组间Fg浓度、FMPV、Amax、FMPV/Amax差异均无统计学意义(P>0.05),BβBcl-1G/A的AA+GA组Fg浓度及FMPV均高于GG组(P<0.05)。结论 Bβ-249C/T和BβBcl-1G/A位点基因多态性对于Fg分子聚合功能均无影响,Bβcl-1G/A变异基因型人群为脑梗死易感人群,有可能通过影响血浆Fg浓度而使脑梗死发病危险性增加。

尿α-1微球蛋白和尿免疫球蛋白G与移植肾功能的关系

目的研究肾移植术后受者尿α-1微球蛋白、尿免疫球蛋白G(IgG)的变化规律及其与移植肾功能短期转归之间的关系。方法29例肾移植受者,于肾移植术后第1、7、14、21、28天分别检测晨尿α-1微球蛋白和尿IgG含量;根据临床、实验室、影像学等检查综合评价移植肾功能状况;分析尿α-1微球蛋白和尿IgG与血清肌酐(SCr)的关系。结果在肾移植术后1月内,尿α-1微球蛋白、尿IgG与SC r水平相关。29例中移植肾功能恢复正常15例(A组),移植肾功能未恢复正常14例(B组);A组尿α-1微球蛋白显著降低(P<0.05),A组中符合尿α-1微球蛋白和尿IgG临界值(<10 mg/dL,<2 mg/dL)的受者检测例次明显多于B组(P<0.01)。两组间尿α-1微球蛋白/SC r比值存在显著差异。结论尿α-1微球蛋白和尿IgG与肾移植受者短期肾功能相关。

纤维蛋白原Bβ-249C/T和Bcl-1G/A基因多态性与脑梗死类型的相关性

目的:研究纤维蛋白原(Fg)Bβ-249C/T,Bcl-1G/A的基因多态性、血浆Fg浓度、分子聚合活性等指标与脑梗死(CI)类型的关系.方法:采用病例对照研究方法,选取主干支脑梗死(MCI)患者54例,穿通支脑梗死(PCI)患者106例,正常对照组160例,应用聚合酶链反应-限制性酶切法进行Bβ-249C/T,Bcl-1G/A位点的基因多态性分析.抽取患者清晨空腹静脉血测定血糖等4项生化指标和血浆Fg浓度,Fg单体聚合反应速率(FMPV),最大光密度(Amax),FMPV/Amax等反映Fg分子聚合功能的参数,并进行体检.结果:BβBcl-1G/A的A等位基因和GA,AA基因型在MCI组均高于对照组(P<0.05),FgBβ-249C/T等位基因和各基因型在MCI组,PCI组和对照组组间的分布频率差异无显著性.MCI组Bβ-249C/T的CT+TT型Fg浓度(4.04±0.88)g/L,FMPV(0.72±0.12)均低于CC型Fg浓度(5.01±0.43)g/L,FMPV(0.83±0.06)(P<0.05).对照组BβBcl-1G/A的GA+AA型Fg浓度(4.03±0.90)g/L高于GG型(3.69±0.95)g/L(P<0.05);PCI组BβBcl-1G/A的GA+AA型FMPV(0.74±0.11)高于GG型(0.69±0.11)(P<0.05).结论:Bβ-249C/T基因多态性可能是影响血浆FMPV功能表达的重要位点,BβBcl-1GA,AA基因型可能仅使血浆纤维蛋白单体聚合功能表达增强而诱发PCI.

长链非编码SNHG1/miR-145/ADAM17轴在椎间盘髓核退变中的作用及其调控机制

目的 :研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(SNHG1)、miR-145及解整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)在椎间盘退变(IDD)组织中的表达,探讨SNHG1调控miR-145/ADAM17轴对椎间盘髓核细胞退变的影响及机制。方法 :采用qRT-PCR、免疫印迹检测30例IDD患者经手术摘除的髓核组织SNHG1、miR-145与ADAM17的表达;双荧光素酶报告基因、RNA免疫共沉淀等确定SNHG1、miR-145与ADAM17的关系;白介素(IL)-1β诱导髓核细胞建立细胞退化模型,SNHG1 siRNA或miR-145模拟物等转染后,CCK-8、流式细胞术等检测细胞增殖、凋亡以及相关分子指标的变化。结果 :相比于对照髓核组织,IDD髓核组织中SNHG1与ADAM17表达上调,miR-145表达下调,均与Pfirrmann分级显著相关。SNHG1可通过海绵作用靶向miR-145,miR-145也可靶向ADAM17的3’-非编码区(3’-UTR)抑制ADAM17蛋白表达。SNHG1沉默逆转了IL-1β诱导的髓核细胞凋亡及基质酶(基质金属蛋白酶13、ADAMTS4)合成,上调了collagenⅡ和aggrecan表达;而SNHG1过表达增强了IL-1β诱导的上述效应。结论 :SNHG1调控miR-145/ADAM17分子轴,促进髓核细胞凋亡和细胞外基质降解,参与椎间盘退变的发展变化。

内皮素-1预处理时大鼠心脏Gαq/11和Giα蛋白含量的变化

探讨内皮素 1预处理和缺血预处理两种预处理方式与G蛋白有关的信号转导途径的异同。用 0 5nmol/ml内皮素 1左心室注射或夹闭左冠状动脉 5min/再灌 5min× 2进行预处理 ,然后两组均缺血 6 0min ,再灌 30min。观察心电变化 ,免疫印迹法测定心脏Gαq/11和Giα2的含量。结果显示 ,无论是内皮素 1预处理还是缺血预处理均明显减轻缺血再灌注性室性心律失常。与对照组相比 ,缺血预处理组Gαp/11含量升 77 8% (P <0 0 5 ) ,Giα2含量无明显改变。内皮素 1预处理组Gαq/11含量升高 110 6 % (P <0 0 1) ,Giα2含量下降 31 0 % (P <0 0 5 )。本研究结果提示 ,激活Gαq/11蛋白是两种预处理对心肌产生保护作用的共同信号转导通路 ,而Giα2蛋白在两种预处理中的作用方式有所不同。

苦瓜皂苷G通过调控Notch/Snail1信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾功能减退及肾纤维化

【目的】观察苦瓜皂苷G对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用及机制。【方法】从55只大鼠中随机抽取45只采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导DN模型。将造模成功的38只大鼠随机分为模型组9只、苦瓜皂苷G低剂量组9只、苦瓜皂苷G中剂量组10只、苦瓜皂苷G高剂量组10只。剩余10只大鼠设为正常组。对应灌胃给药4周后,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠24 h尿蛋白水平,血糖仪检测空腹血糖(FBG),全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,苏木素-伊红染色(HE)法观察大鼠肾组织病理学变化,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot法分别检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Notch1、锌指蛋白转录因子1(Snail1)、Jagged1 m RNA及蛋白表达情况。【结果】与正常组比较,模型组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著升高,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平降低,肾组织可见肾小球萎缩、肾小管扩张及间质纤维化;与模型组比较,苦瓜皂苷G低、中、高剂量组24 h尿蛋白、FBG、血清SCr和BUN水平及肾组织α-SMA、Notch1、Snail1、Jagged1 mRNA及蛋白水平显著降低,肾组织E-cad m RNA及蛋白水平升高,肾组织病理损伤得到改善。【结论】苦瓜皂苷G可有效改善DN大鼠肾功能障碍、减轻肾脏纤维化,其机制可能与通过调控Notch/Snail1信号通路,抑制α-SMA和Jagged1 mRNA及蛋白表达,增强E-cad mRNA及蛋白表达有关。

血小板反应蛋白-1G14678A位点基因多态性与复发性流产的相关性研究

目的研究血小板反应蛋白-1(THBS-1)的G14678A位点基因多态性与复发性流产的相关性。方法选取2019年1月至2021年2月辽宁中医药大学附属医院收治的120例复发性流产患者作为观察组,另选取同期进行健康体检的120例正常非孕期女性作为对照组。比较两组患者的THBS-1基因G14678A位点的基因频率及等位基因之间的差异,单因素及多因素分析复发性流产的影响因素。结果观察组患者THBS-1基因G14678A位点的GG基因频率显著高于对照组(χ^(2)=102.410,P=0.000);观察组患者THBS-1基因G14678A位点的G等位基因频率显著高于对照组(χ^(2)=127.581,P=0.000);相关性分析结果可见,THBS-1基因多态性GG基因型与复发性流产呈显著相关(r=0.526,P=0.000)。通过单因素及多因素分析可知,THBS-1基因多态性GG基因型是造成复发性流产的影响因素。结论THBS-1的G14678A位点碱基由C向G进行突变,复发性流产的发病风险显著升高,可作为日后诊断及治疗的重要靶点。

家蚕G蛋白γ1亚基(BmGγ1)的克隆及其谷胱甘肽硫转移酶融合蛋白的表达与纯化

异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究家蚕体内G蛋白的生理功能及其作用机制,运用生物信息学方法预测了家蚕G蛋白γ1亚基(Gγ1)的序列,设计引物验证预测序列后,克隆了家蚕Gγ1的序列,再通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+)后,导入E.coliBL21宿主菌中,经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组谷胱甘肽硫转移酶(glutathione s-transferase,GST)融合蛋白,并亲和层析纯化表达产物。家蚕Gγ1重组GST融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,在分子质量约36 kD处出现特异性蛋白条带,重组蛋白经GST亲和层析柱纯化后,得到了高纯度的融合蛋白,说明已经成功克隆到家蚕Gγ1基因,并在E.coliBL21中高效表达。