D816V突变型KIT特异性诱导COS-1非洲绿猴肾细胞核不均一核糖核蛋白 L(HNRNPL)和HNRNPK磷酸化

目的探究Ⅲ类酪氨酸激酶受体KIT D816V突变对核不均一核糖核蛋白L(HNRNPL)和HNRNPK的调控作用。方法在COS-1非洲绿猴肾细胞表达野生型KIT或KIT D816V,或与HNRNPL或HNRNPK共表达,用免疫沉淀法和Western blot法检测KIT活化及HNRNPL、HNRNPK的磷酸化,通过激光共聚焦显微镜检测KIT、HNRNPL、HNRNPK在COS-1细胞中的定位。结果野生型KIT需要其配基干细胞因子(SCF)的刺激发生活化,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化。此外,KIT D816V可诱导HNRNPL和HNRNPK发生磷酸化,而野生型KIT无此功能。HNRNPL和HNRNPK在细胞核表达,野生型KIT在细胞膜和细胞质表达,而KIT D816V主要表达于细胞质。结论野生型KIT活化需要其配体SCF参与,而KIT D816V无需SCF刺激即可发生自活化,并能特异性诱导HNRNPL和HNRNPK磷酸化。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1在舌鳞状细胞癌中的表达及作用

目的:舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部的常见癌症,严重危害人们的生命健康。核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)是一种RNA结合蛋白,可调控多种基因的表达,参与多种癌症的发生和发展。本研究旨在探究hnRNP A2/B1对TSCC进展的表达及作用。方法:基于基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)相关芯片GSE146483、GSE85195分析hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中的差异表达情况,基于TSCC相关芯片GSE4676分析hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期的相关性。收集2021年7月至12月于湖南省肿瘤医院就诊的30例TSCC患者的癌及癌旁组织样本,采用real-time RT-PCR和蛋白质印迹法验证TSCC患者样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质表达情况。以人TSCC细胞Tca-8113为研究对象,分别转染hnRNP A2/B1空载敲减质粒(sh-NC组)、敲减质粒(sh-hnRNP A2/B1组)、空载过表达质粒(OE-NC组)和过表达质粒(OE-hnRNP A2/B1组)。采用蛋白质印迹法检测hnRNP A2/B1敲减或过表达效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测Tca-8113细胞增殖活性,流式细胞术检测Tca-8113细胞凋亡率。结果:基于GEO数据库中的OSCC相关芯片GSE146483、GSE85195分析发现:hnRNP A2/B1在OSCC及正常口腔黏膜细胞、组织中均存在差异表达(均P<0.01),同时对TSCC相关芯片GSE4676的分析证实hnRNP A2/B1表达与TSCC患者无病生存期呈负相关(P=0.006)。Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法结果显示:与癌旁组织样本相比,TSCC组织样本中hnRNP A2/B1的mRNA和蛋白质相对表达水平均显著上调(均P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示:Tca-8113细胞在转染敲减或过表达hnRNP A2/B1质粒后,细胞内的hnRNP A2/B1表达水平被显著抑制或促进(均P<0.01)。CCK-8及流式细胞术结果显示:抑制Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以降低细胞增殖活性(P<0.05),增高细胞凋亡率(P<0.01);促进Tca-8113细胞中hnRNP A2/B1的表达可以增加细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01)。结论:HnRNP A2/B1是调控TSCC细胞增殖和凋亡水平的关键因子,通过抑制hnRNP A2/B1的表达可以降低TSCC细胞的增殖活性,促进TSCC细胞的凋亡。

核不均一核糖核蛋白K(hnRNP K)在慢性肝病不同病理阶段的表达水平

目的:观察核不均一核糖核蛋白K(heterogeneous ribonucleoprotein K,hnRNP K)在健康体检者、慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液和尿液中的表达差异,探讨hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段表达水平及与乙肝相关性原发性肝癌的相关性。方法:选取2018年8月至2018年10月我院收治的健康体检者50例、慢性乙型病毒性肝炎患者43例、肝炎后肝硬化患者35例及乙肝相关性原发性肝癌患者53例,采集其空腹外周静脉血5 mL及清洁中段晨尿标本,利用ELISA分别检测hnRNP K在慢性肝病不同病理阶段血液和尿液中表达的含量,绘制ROC曲线评价hnRNP K在原发性肝癌诊断中的意义。结果:hnRNP K在慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者血液、尿液中表达水平均高于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎相关性原发性肝癌患者血清hnRNP K的ROC曲线AUC为0.775,敏感度和特异度分别为76.9%和64.3%;尿液hnRNP K的ROC曲线AUC为0.652,诊断乙肝相关性原发性肝癌的敏感度和特异度分别为100%和28.6%。结论:相较于健康体检者,慢性乙型病毒性肝炎、肝炎后肝硬化及乙肝相关性原发性肝癌患者的血清、尿液中hnRNP K表达水平上调,与乙肝相关性原发性肝癌具有相关性,提示hnRNP K可能是乙肝相关性原发性肝癌的潜在标志物,对原发性肝癌的诊断具有一定参考价值。

纤维支气管镜刷检细胞核内不均一核糖核蛋白B_1染色诊断肺癌价值的研究

目的 探讨纤维支气管镜刷检细胞核内不均一核糖核蛋白B1(HnRNPB1)染色在肺癌诊断中的价值。方法 对 381例病理检查证实的肺癌患者及 10 0例非肺癌患者 ,经纤维支气管镜刷检脱落细胞涂片 ,采用抗HnRNPB1单克隆抗体免疫细胞化学染色 ,研究HnRNPB1诊断肺癌的敏感性与特异性 ,并与传统的CT及痰脱落细胞学检查进行比较。结果 381例肺癌患者均经纤维支气管镜检查于病变所在叶支气管进行刷检涂片 ,HE染色脱落细胞学检查发现癌细胞 2 18例 ,采用抗HnRNPB1单克隆抗体免疫细胞学检查 ,2 0 8例样本可见HnRNPB1染色。在癌细胞阴性的 16 3例样本中HnRNPB1染色阳性 12 1例 ,癌细胞阳性与阴性组间HnRNPB1表达有明显差异 (P <0 .0 5 )。不同病理类型肺癌的HnRNPB1表达为 :鳞癌 2 19例 ,HnRNPB1染色阳性 197例 (90 .0 % ) ;腺癌 10 8例 ,HnRNPB1染色阳性 85例 (78.7% ) ;小细胞癌 5 4例 ,HnRNPB1染色阳性 4 7例 (87.0 % )。鳞癌及小细胞肺癌HnRNPB1表达阳性率高于腺癌 (P <0 .0 5 )。HnRNPB1免疫细胞化学染色诊断肺癌的敏感性为 86 .4 % ,特异性为 91% ,假阴性率为 13.6 % ,假阳性率为 9% ,阴性提示率为 6 3.6 % ,阳性提示率为 97.3%。结论 HnRNPB1免疫细胞学检查诊断肺癌的敏感性明显优于痰脱落细胞学检查 。

核内不均一核糖核蛋白A_2/B_1在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨核内不均一核糖核蛋白A2 /B1(hnRNPA2 /B1)在非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达特征及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S P法检测hnRNPA2 /B1在 5 8例NSCLC及癌旁组织、支气管切缘和 3 0例肺良性病变肺组织中的表达 ,并分析该蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果 NSCLC组织中hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 63 .79% )显著高于癌旁肺组织 ( 4 3 .10 % )和肺良性病变肺组织 ( 2 0 .0 0 % )(P =0 .0 0 0 ) ,癌旁肺组织中hnRNPA2 /B1阳性率亦显著高于肺良性病变肺组织 (P <0 .0 5 )。肺癌患者支气管切缘上皮增生组织阳性表达率 ( 4 0 .0 0 % )显著高于正常支气管上皮 ( 15 .15 % ) (P =0 .0 3 2 )。低分化肺癌hnRNPA2 /B1阳性表达率 ( 78.13 % )显著高于中 -高分化肺癌 ( 4 6.15 % ) (P <0 .0 5 ) ,伴有淋巴结转移肺癌阳性表达率 ( 75 .0 0 % )显著高于无淋巴结转移肺癌 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,Ⅲ +Ⅳ期肺癌阳性表达率 ( 78.5 7% )显著高于Ⅰ +Ⅱ期 ( 5 0 .0 0 % ) (P <0 .0 5 ) ,T3 +T4肺癌阳性表达率 ( 77.42 % )显著高于T1+T2 ( 4 8.15 % ) (P<0 .0 5 )。不同组织学类型肺癌组织中hnRNPA2 /B1表达水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 hnRNPA2 /B1的异常表达在肺癌的发生、发展和转移中?

核内不均一核糖核蛋白A2/B1在子宫内膜异位症组织中的表达

目的:研究核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1)在正常子宫内膜、子宫内膜异位症(EMs)患者在位内膜、患者异位内膜间的表达差异。方法:用免疫组织化学法和Western blot分析,研究3例增生中晚期正常子宫内膜、3例增生中晚期EMs患者的在位内膜和异位内膜中,hnRNP A2/B1蛋白的表达差异。结果:hnRNP A2/B1主要表达于间质和腺上皮细胞的细胞核内,且EMs患者在位内膜和异位内膜中的表达强度,均低于正常内膜中的表达(P<0.05);而患者在位内膜和异位内膜中的表达,无明显差异(P>0.05)。结论:hnRNP A2/B1可能参与EMs的发生和发展。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1及p53蛋白诊断肺癌的价值

目的探讨检测支气管肺泡灌洗液(BALF)脱落细胞中核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1和血细胞中p53蛋白在肺癌诊断中的价值。方法收集经病理确诊的肺癌患者30例BALF,以30例肺部良性疾病患者BALF为对照组,采用流式细胞术(FCM),检测两组患者BALF脱落细胞中hnRNPA2/B1表达率及血中p53蛋白表达率。结果肺癌组hnRNPA2/B1为(74.04±22.34)%显著高于肺部良性疾病组(28.03±9.01)%(P<0.01);hnRNPA2/B1水平与非小细胞肺癌临床TNM分期无关(P>0.05)。肺癌组p53蛋白水平为(2.16±1.88)%显著高于肺部良性疾病组(0.93±0.51)%(P<0.01);hnRNPA2/B1和p53蛋白诊断肺癌的敏感性分别为86.7%、70.0%,特异性为96.7%、83.3%;联合检测hnRN-PA2/B1和p53的敏感性为93.3%,特异性为100%。结论hnRNPA2/B1和血细胞中p53蛋白水平对肺癌有辅助诊断价值,尤其对早期肺癌的诊断有重要意义,两种指标联合检测可提高诊断敏感性。

HSVⅠ感染L-02细胞对核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)表达影响

单纯疱疹病毒(HSVⅠ)对宿主细胞转录及mRNA修饰翻译通路的调控是一个系统的、复杂的体系,探索其具体机制将有助于了解病毒复制过程及与宿主细胞之间的相互作用。基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,通过Western blot,Northern blot等技术方法验证其在病毒复制过程中不同时段对其表达影响。

大鼠脑缺血再灌注后核不均一性核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1在脑皮质的表达变化

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后核不均一性核糖核蛋白(Heterogeneous Nuclear Ribonulcleoprotein,hnRNP)A2/B1的表达变化与再灌注损伤时间关系。方法建立大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,检测缺血再灌注损伤后3、6、12、24、48h、72h在缺血侧大脑皮质四个区域hnRNPA2/B1含量变化,并与假手术对照组进行比较。结果与假手术组比较,hnRNPA2/B1表达量在脑缺血再灌注3h、6h、12h、24h明显下降(P<0.01)。48h后,hnRNPA2/B1蛋白表达量明显上升(P<0.01)。结论hnRNPA2/B1可能在基因转录水平参与保护调控缺血再灌注脑损伤。

核内不均一核糖核蛋白B1在非小细胞肺癌中的表达

目的核内不均一核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonulcleoprotein，HnRNP）B1在肺癌病灶中的表达的特征。方法应用电泳法检测30例非小细胞肺癌及癌旁组织中的表达并分析其与肺癌临床分期的关系。结果NSCLC组织中HnRNPB1的表达阳性率（80％）显著高于癌旁组织（40％），在四种组织类型中的表达率为50％～100％，其中鳞癌表达率较高；30例手术标本进行临床分期后发现HnRNPB1在Ⅰ～Ⅱ期阳性率达100％，Ⅲ期下降至85．7％，Ⅳ期的阳性率最低，为50％。结论HnRNPB1的过度表达与非小细胞肺癌有密切关系。在早期肺癌尤其是鳞癌中有较高的表达。检测肺组织中HnRNPB1表达对NSCLC尤其鳞癌的早期诊断有一定的意义。

核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)对单纯疱疹病毒(HSVⅠ)复制影响

本文研究了单纯疱疹病毒(HSVⅠ)在感染与复制过程中影响宿主细胞RNA转录,蛋白表达,进而为病毒的潜伏和持续感染创造必要条件.采用基于2-DE分析,人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H2,hnRNP H2)在感染HSVⅠ前后存在表达差异,构建pcDNA-hnRNP H2真核表达载体及hnRNP H2稳定转染的293T细胞系的方法,研究在核不均一性核糖核蛋白H2(hnRNP H2)稳定过表达后对HSVⅠ病毒复制周期的影响.结果表明,病毒滴度和生长曲线显示,hnRNP H2可以显著影响病毒复制周期.过表达hnRNP h2的细胞系与对照相比,其病毒滴度明显下降,hnRNP H2在HSVⅠ病毒复制中起到比较明显的抑制作用,其作用机理还有待进一步研究.

异质性胞核核糖核蛋白K在肝癌组织及不同密度肝癌细胞中的表达

目的:观察异质性胞核核糖核蛋白K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K,hnRNPK)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及在不同密度肝癌细胞(PLC/PRF/5)中的亚细胞定位。方法:免疫组化染色观察肝细胞癌组织中hnRNPK的表达;Western印迹检测肝癌组织(n=30)及对应癌旁组织hnRNPK蛋白表达差异;应用细胞免疫组化和Western印迹法比较不同密度肝癌细胞hnRNPK蛋白的亚细胞定位及表达。结果:肝细胞癌组织hnRNPK蛋白主要表达于细胞核。hnRNPK蛋白表达在30例的肝癌组织中有21例高于其对应的癌旁组织;20倒HBV阳性肝癌组织有16例高于其对应的癌旁组织,而10例HBV阴性肝癌组织仅有5例表达高于癌旁组织。细胞免疫组化结果表明。hnRNPK主要表达于PLC细胞核中,并且随密度(汇合率为30%、50%、90%)的上升。其表达量逐渐上升。Western印迹结果表明,不同密度(汇合率为30%、50%、70%、90%)肝癌细胞的细胞质中,hnRNPK的表达量无统计学差异;而在细胞核中,随着细胞密度的增大,hnRNPK的表达量逐渐升高。结论:肝癌组织细胞核hnRNPK表达上调,且随着肝癌细胞密度的增加。其表达会逐渐增强,HBV感染可能会促进其表达。

核内不均一核糖核蛋白在前体mRNA加工中的功能

核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)是一类存在于真核生物体内具有类似结构特征的高丰度RNA结合蛋白,一般均匀分布在核内。多种hnRNP具有多样的功能,参与从转录调节,前体mRNA剪接,mRNA输出到mRNA降解等多种生物过程,从而进行基因表达调控。现着重介绍hnRNP在前体mRNA加工过程(加帽,剪接,加尾,输出,选择性降解)中的功能及研究进展。

核内不均一核糖核蛋白研究进展

核内不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类参与了多种重要生命过程的RNA结合蛋白。早期的研究发现hnRNPs主要参与新生前体mRNA(pre-mRNA)的包装过程,随着各方面研究的逐渐深入,越来越多的证据表明hnRNPs的功能不仅限于pre-mRNA的包装,还在转录调节、可变剪接、核质运输、DNA修复等过程中发挥重要作用。本文将对hnRNPs的结构特征和生物学功能予以综述,旨在为后续关于hnRNPs的调控网络及功能分析等研究提供依据。

核内不均一核糖核蛋白A2/B1研究进展

目前肺癌发病率居高不下，绝大多数肺癌早期表现无特征性，明确诊断一般已属晚期，治疗亦受限制，故5年生存率〈15％，为降低癌症死亡率，提高早期检测率，核内不均一核糖核蛋白A2／B1（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/BI, hnRNPA2/B1, hnRNPA2/B1 ）研究作为新的早期标记物，在临床表现之前，运用痰脱落细胞学预测肺癌可提高至1年，下面对近期研究进展做一综述。

核不均一性核糖核蛋白在RNA加工过程中的作用

在真核细胞中， 初始转录产物（ 前体ｍＲＮＡ） 经过一系列复杂的转录后加工过程形成成熟的ｍＲＮＡ． 在这一过程中， 大量蛋白质和加工因子有序汇集在核糖核蛋白复合体中并参与对前体ＲＮＡ 的加工过程． 该复合体中的蛋白质部分主要由一类约２０ 种称为核不均一性核糖核蛋白的多肽分子构成． 除了早期了解的一些结构性功能外， 近来已有许多证据显示这些蛋白质在细胞中ＲＮＡ

WASH通过与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用调控选择性剪接和基因转录

目的探讨Wiskott-Aldrich综合征蛋白和富含脯氨酸同源物(WASH)与核内不均一核糖核蛋白A1(hnRNP A1)的相互作用及其生物学功能.方法利用质谱鉴定、免疫共沉淀技术,研究WASH复合体核心成员WASH/FAM21与hnRNP A1相互作用.使用实时定量PCR检测WASH沉默细胞与对照细胞中端粒长度.使用RNA-Seq检测WASH沉默细胞与对照细胞转录谱.结果质谱鉴定结果显示包括hnRNP A1在内的多种hnRNP家族成员与FAM21-d219N相互作用.免疫沉淀结果验证了内源WASH/FAM21与hnRNP A1的相互作用.WASH沉默并未对端粒的相对长度产生影响,但明显提高了外显子跳跃的数量,并且影响包括部分核因子κB(NF-κB)靶基因在内的数百基因的转录.结论细胞核内的WASH可与hnRNP A1相互作用,参与选择性剪接和基因转录的调控.

核内不均一核糖核蛋白A3与疾病关系的研究进展

核内不均一核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)是人体内一大类的RNA结合蛋白家族,该家族可作为“RNA骨架”,参与核酸代谢的多个环节,包括可变剪接、信使核糖核酸(message RNA,mRNA)稳定以及转录和翻译调控等方面,并最终在细胞的生物学过程中发挥关键作用。与该家族中被广泛关注的成员hnRNP A1、hnRNP A2/B1相比,hnRNP A3是一个较少被研究的蛋白。本文就hnRNP A3在多种疾病中的表达情况、临床价值以及内在机制的研究进展做一综述,旨在为相关疾病的机制探讨及新型治疗靶点的挖掘提供依据。

核内不均一核糖核蛋白D和上皮细胞黏附分子在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其意义

目的:探讨核内不均一核糖核蛋白D(hnRNPD)和上皮细胞黏附分子(EpCAM)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织和正常口腔黏膜组织中的表达及其与OSCC患者临床病理特征的关系,阐明其在OSCC发生发展中的作用。方法:选取术前均未经放、化疗的38例OSCC患者的肿瘤组织(OSCC组)和11例正常拔牙患者的口腔黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学染色法检测OSCC组织和正常口腔黏膜组织中hnRNPD和EpCAM表达水平,并分析不同临床病理特征OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平,采用Spearman相关性检验分析OSCC组织中hnRNPD和EpCAM表达的相关性。结果:与对照比较,OSCC组肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平升高(Z=-4.936,P=0.000;Z=-2.780,P=0.005);不同性别和年龄OSCC患者肿瘤组织中EpCAM蛋白表达水平差异有统计学意义(Z=-2.471,P=0.013;Z=-1.967;P=0.049);不同临床病理特征OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。hnRNPD和EpCAM表达水平相关性较弱(ρ=0.227,P=0.17)。结论:OSCC患者肿瘤组织中hnRNPD和EpCAM表达水平上调,两者促进了OSCC的发生发展。

核内不均一核糖核蛋白与肿瘤的发生发展

2015年，在《CA：A Cancer Journal for Clinji-cians》杂志上发表的中国癌症统计数据指出，中国有4292000例癌症新发病例，2814000例癌症死亡。随着癌症的发病率和死亡率急速增长，目前癌症已经成为了中国人死亡的首要原因和威胁公共健康的主要问题。