Ras信号通路通过激活转录因子Myc促进核内复制细胞生长

【目的】果蝇Ras信号通路在细胞增殖与生长过程中发挥着重要的作用。Myc基因是bHLH转录因子家族基因,可调控细胞生长、竞争和再生增殖等生理过程。本研究旨在明确Ras信号通路与Myc的关系,探索Ras信号调控核内复制细胞生长的作用机制。【方法】生物信息学分析转基因家蚕Bombyx mori后部丝腺Myc基因的转录水平,并通过qPCR验证;在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Kc细胞中,分别转染pAc5.1-HisB-Ras^(V12)-V5或pAc5.1-HisB-Raf-Flag过表达Ras^(V12)或Raf后,通过qPCR和Western blot技术分别检测Myc基因在mRNA和蛋白水平的相对表达量;在黑腹果蝇幼虫脂肪体和唾液腺中,结合黑腹果蝇遗传工具和分子生物学手段,验证Ras信号通路对Myc基因的调控作用。【结果】家蚕后部丝腺过表达Ras1^(CA)上调Myc转录水平。激活Ras信号使得黑腹果蝇Kc细胞内Myc在转录水平和蛋白水平上的表达量上调;黑腹果蝇幼虫唾液腺和脂肪体中,游走期Myc基因的表达量高于取食期;过表达Myc或激活Ras信号可以促进细胞核内周期进程;激活Ras信号促进Myc表达。【结论】Ras信号通路激活Myc表达,促进细胞核内周期进程,促进器官发育。

Cdh1对胎盘滋养干细胞分化过程中细胞周期的影响

本研究旨在探究Cdh1对胎盘滋养干细胞分化过程细胞周期的影响及其机制。构建Cdh1-/-的模型小鼠并分离培养Ts细胞,通过MTT和流式细胞术的方法研究Cdh1-/-对未分化Ts细胞增殖和细胞周期的影响,通过相差显微镜观察Cdh1-/-对Ts细胞形态的影响,并且通过对磷酸化组蛋白H3的抗体进行免疫染色以及MTT的方法研究Cdh1-/-对Ts细胞有丝分裂和分化后Ts细胞增殖的影响,最后用Western blotting和RT-PCR的方法探索Cdh1对有丝分裂细胞周期蛋白以及胎盘滋养干细胞分化相关基因表达的调控。结果显示,成功分离培养Ts细胞,Cdh1-/-能够促进未分化Ts细胞的增殖并且使G2/M期细胞比例增加,Cdh1-/-能够使Ts细胞持续进行有丝分裂并促进分化后Ts细胞继续增殖,Cdh1能够使细胞周期蛋白cyclinB表达增加,P27蛋白有所减少并且能够影响多个胎盘滋养干细胞分化相关基因表达。Cdh1能够通过调控有丝分裂细胞周期蛋白的表达影响分化过程中的胎盘滋养干细胞的细胞周期,使其维持在有丝分裂持续增殖,并且Cdh1能够调控多个胎盘滋养干细胞分化相关基因表达影响干细胞分化,因此Cdh1在有丝分裂/核内周期转换以及胎盘滋养干细胞分化中起重要调节作用。