rH2AX核内斑点在不同成胶质瘤细胞中的剂量时间效应研究

将成胶质瘤细胞MO59K和MO59J两种细胞分别给予1Gy,2Gy,4Gy和8Gy的6MV-X线照射,并分别于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h收集细胞,检测rH2AX核内斑点时间及剂量效应特点.结果发现,MO59K细胞和MO59J细胞随着照射剂量的增加rH2AX核内斑点数量增加;并且MO59K细胞接受8Gy照射后rH2AX斑点在24h内能够恢复到放疗前的水平,而MO59J细胞内rH2AX斑点不能恢复到照射前水平.提示MO59J细胞较MO59K细胞敏感,照射后rH2AX核内斑点更难恢复到未照射水平.

沉默H2AX食管癌ECA109中MDC1和53BP1斑点的变化

目的探讨沉默H2AX后在食管高分化鳞状细胞癌ECA109细胞中应答电离辐射时对MDC1和53BP1的影响。方法构建沉默H2AX的慢病毒载体,将慢病毒转染食管癌ECA109细胞并检测转染后的沉默效用;免疫荧光检测r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点的情况以及用Western blot检测这几种蛋白的表达。结果 1)成功构建了沉默H2AX的ECA109细胞。2)电离辐射可引起r-H2AX表达量的增加,不引起MDC1和53BP1表达的增加,同时电离辐射诱导产生的r-H2AX、MDC1和53BP1核内斑点变化的规律一致。3)沉默H2AX后的ECA109细胞核内r-H2AX、MDC1和53BP1斑点的数量明显减少,尽管MDC1和53BP1蛋白表达无变化。结论在ECA109细胞中H2AX是电离辐射后比较早的反应蛋白,可以调节下游MDC1和53BP1斑点的位置。

顺铂诱导食管癌细胞系ECA109损伤机制

目的探讨顺铂诱导食管癌细胞系ECA109 DNA机制。方法用MTT法测定ECA109细胞增殖,绘制细胞增殖曲线,筛选出低细胞毒性药物浓度用于后续实验。用免疫荧光法检测顺铂作用24 h后50个ECA109细胞内r-H2AX、P-STAT1和CHK2-T68核内斑点(IF)平均数量。分别检测沉默H2AX基因和沉默STAT1基因前后,顺铂作用24 h后50个ECA109细胞内r-H2AX、P-STAT1和CHK2-T68核内斑点(IF)平均数量。结果顺铂呈时间剂量依赖性抑制ECA109细胞增殖。顺铂可以诱导ECA109细胞产生r-H2AX、P-STAT1和CHK2-T68核内斑点(IF)(P<0.05)。沉默H2AX基因使顺铂诱导的r-H2AX、P-STAT1和CHK2-T68核内斑点(IF)均减少(P<0.05)。沉默STAT1基因可以减少顺铂诱导的P-STAT1和CHK2-T68核内斑点(IF)生成(P<0.05)。结论顺铂可以诱导食管癌细胞损伤,产生多种核内斑点(IF)。在这一损伤通路中,H2AX位于上游,调控STAT1和CHK2;STAT1位于H2AX下游,CHK2上游,可调控CHK2。

调控靶向Xklp2表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达的影响

目的探讨调控靶向Xklp2(TPX2)表达对肺鳞癌细胞放射线照射后γ-H2AX蛋白表达及细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成的影响。方法利用前期构建的稳定转染TPX2 shRNA质粒的SK-MES-1细胞和稳定转染TPX2过表达质粒的NCI-H226细胞,采用Western印迹检测4 Gy照射后0～24 hγ-H2AX蛋白表达,免疫荧光技术观察4 Gy照射后4 h细胞核内γ-H2AX和MDC1斑点形成情况。结果 4 Gy照射后0～24 h,TPX2干扰的SK-MES-1细胞和TPX2过表达的NCI-H226细胞中γ-H2AX蛋白表达水平均出现显著增加后逐渐下降的趋势,但在TPX2干扰的细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著高于单纯照射组(P<0. 05),而在TPX2过表达细胞中,各时间点γ-H2AX蛋白表达水平均显著低于单纯照射组。②照射后4 h,下调TPX2表达则γ-H2AX和MDC1核内斑点形成增加,而过表达TPX2则γ-H2AX和MDC1核内斑点增加幅度降低(P<0. 05)。结论照射后H2AX磷酸化及γ-H2AX和MDC1核内斑点形成变化,提示TPX2参与DNA损伤修复。