三尖杉酯碱诱导HL-60细胞程序性死亡过程中的细胞质和细胞核出泡与染色质凝集

本文利用视频显微影像反差增强技术(VideoEnhancement Contrast,VEC)对三尖杉酯碱诱导的单个HL-60活细胞程序死亡(Apo-ptosis,Apo)全过程进行了观察,结果表明每个Apo细胞在染色质凝集前都要发生细胞核的出泡,而每一个核出泡又都是由相应的质出泡所诱导的,但并不是每个质出泡都能诱导核出泡,质出泡的次数远远高于核出泡,提示核、质出泡可能与染色质凝集有关,并且核、质出泡是程序死亡细胞形成Apo小体所必需的。进一步研究则说明核、质出泡与微丝解聚和重组有关。核、质出泡虽可加速细胞程序死亡过程中的染色质凝集,但并不是程序死亡细胞染色质凝集所必需的,提示HL-60细胞程序死亡过程中的核变化和质变化可能是相对独立的。

拨核挑核出核方法在手法小切口白内障复明手术中的应用

目的介绍拨核挑核出核方法在手法小切口白内障复明手术中的应用。方法回顾应用拨核挑核出核方法对238例（268只眼）不宜进行超声乳化手术的白内障患者进行手法小切口白内障囊外摘除联合人工晶状体植入手术,观察术中、术后并发症及手术效果。结果所有患者无一例发生严重并发症。术后观察3个月,最佳矫正视力≥1.0者87只眼（32.46%）,0.5～0.9者167只眼（62.31%）,6只眼视力无提高（眼底病变）,其余视力均较术前提高,有效率97.76%。结论拨核挑核出核法在手法小切口白内障囊外摘除联合人工晶状体植入手术中是一种安全、有效、简单、实用的新方法。

剖宫产术同时核出子宫肌瘤患者临床研究

目的 探讨分析剖宫产术同时核出子宫肌瘤的可行性以及术后的复发情况.方法 随机抽取在2011年6月至2013年12月间我院收治的进行剖宫产手术的同时行子宫肌瘤核出的80例患者,设为观察组,再随机抽取同期到我院进行子宫肌瘤切除的非妊娠妇女40例设为对照组,比较两组患者的术后复发情况,进行回顾性对比分析.结果 所有患者的手术均成功完成,而且在患者出院后1-2年后进行随访,观察组80例患者中复发的有5例,占6.25%,对照组40例患者中复发的有8例,占20%,观察组患者的术后复发情况显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 剖宫产术同时核出子宫肌瘤是安全可行的,复发率较低,值得在临床上推广应用.

巨大宫颈肌瘤核出术创腔内平行多层荷包缝合技术简介

目的:探讨较大宫颈肌瘤核出术巨大创腔内平行多层荷包缝合有效止血的临床实用价值。方法:对既往手术的31例病例进行回顾性分析。结果:全部病例术中创腔均采用平行多层荷包缝合法,达到了有效止血目的,无死腔感染及副损伤发生。结论:宫颈肌瘤核出术创腔内平行多层荷包缝合法具有操作简单、止血确切、无死腔残留、避免副损伤发生的特点,可最大限度恢复解剖关系,值得临床推广。

心肌肥大时细胞核被膜核苷三磷酸酶活性及mRNA出核转运的变化

目的：探讨心肌肥大时心肌细胞ｍ ＲＮＡ 出核转运率及核被膜核苷三磷酸酶（ ＮＴＰａｓｅ） 活性的变化。方法：采用腹主动脉缩窄法复制大鼠心肌肥大模型，密度梯度离心法制备心肌细胞核被膜，观察心肌肥大时对心肌ＮＴＰａｓｅ 活性和成熟ｍ ＲＮＡ 出核转运速率的影响。结果：早、晚期肥大组心肌细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率以ＡＴＰ 为底物时较对照组增加２５ ％ ～６２ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，以ＧＴＰ 为底物时增加８ ％ ～４４ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，其中晚期肥大组ＮＴＰａｓｅ 最大反应速率增加幅度低于早期组。早期肥大组细胞核被膜ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值不变，晚期组ＮＴＰａｓｅ Ｋｍ 值下降，以ＡＴＰ 和ＧＴＰ 为底物时晚期肥大组Ｋｍ 值分别下降２２ ％ 和８６ ％ 。早期肥大组１０ ｍｉｎ 心肌细胞核ｍ ＲＮＡ 出核转运率以ＡＴＰ 或ＧＴＰ 启动反应时分别较对照组增加６８ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 或７８ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０１） ，晚期肥大组增加幅度不如早期组大，仅增加２７ ％ 和２１－７ ％ （ Ｐ＜ ０－０１） 。结论：大鼠心肌肥大组细胞核被膜ｍ ＲＮＡ 出核转运率的增加可能是心肌肥大时蛋白质合成增加的一个重要原因，而这种ｍＲＮＡ

核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

目的:探讨位于雄激素受体(androgen receptor,AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor,NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法:绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合蛋白表达载体p EGFP-AR(1-918aa),p EGFP-NESAR(743-817aa),p EGFP-NAR(1-665aa)和p EGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体(赖氨酸K突变为精氨酸R)p EGFPNESAR K776R,p EGFP-NESAR K807R和p EGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果:在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论:核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。

放射性废物水泥固化样品核素浸出率测量分析

以放射性废树脂、残渣和蒸残液的水泥固化热配方试验为依据,运用HPGe-γ谱仪、低本底α、β测量仪对废物固化样品的放射性核素浸出率进行测量,分析不同源项的水泥固化体核素浸出率结果,验证相应水泥固化样品配方的准确性及可靠性。结果表明,残渣、蒸残液和废树脂的不同水泥固化样品中60Co、137Cs和总β的浸出率均在浸泡前期急剧下降;随着浸泡时间的延长,浸出率变化趋于稳定;浸出率满足GB14569.1-93的要求。

出核转运抑制剂的抗肿瘤临床转化研究进展

真核生物由于双层核膜的存在,蛋白及大分子物质需依赖核质转运受体进行跨核膜转运。核输出蛋白1(exportin1,XPO1)是最重要的出核转运受体之一,负责多种蛋白和RNAs的出核转运。XPO1往往在肿瘤细胞中过量表达,导致多种抑癌基因蛋白及生长调节蛋白亚细胞定位及功能的紊乱,从而促进了肿瘤的发生发展。XPO1不仅可作为肿瘤患者预后判断的指标,还是抗肿瘤治疗的潜在靶标。近年来,一系列XPO1小分子抑制剂的研发,尤其是高效低毒的SINE系列抑制剂的抗肿瘤临床研究,揭示了XPO1抑制剂在治疗难治性、耐药性、转移复发性血液恶性肿瘤及实体肿瘤的独特疗效,并引起广泛关注。本文就出核转运抑制剂的临床转化研究进展进行综述。

P27^(kip1)与出核因子CRM1在人淋巴瘤细胞系中的表达及相互关系

目的研究P27kip1与出核因子CRM1在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系。方法运用血清饥饿同步化处理淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji,10%血清刺激细胞增殖。Western blot分别检测生长阻滞及增殖的淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1的表达。用核浆分离方法检测P27kip1与CRM1分别在胞核、胞质的定位。免疫沉淀检测P27kip1与CRM1在淋巴瘤细胞中的结合。结果在不同状态的淋巴瘤细胞中,P27kip1与CRM1蛋白水平的表达均表现为负相关,并且P27kip1的核内外分布与CRM1的核内外分布一致。免疫沉淀结果验证在淋巴瘤细胞中P27kip1与CRM1相互结合。结论出核因子CRM1可能通过与P27kip1结合而影响P27kip1的核内外分布及表达水平,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长。

固化体大小对核素浸出的影响

本文介绍了放射性废物固化体大小对核素浸出的影响。文中讨论了核素浸出的数学模拟问题，并根据实验数据拟合了适用于计算具有不同体积的固化体的有效扩散系数的公式。用此公式计算的结果与实验结果相符很好。

放射线诱导BRCA1出核效应对PARP抑制剂的增敏作用

目的探讨放射线诱导的乳腺癌1号基因(BRCA1)出核效应对同源重组介导的DNA双链断裂损伤(DSB)修复功能的影响及对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂的增敏作用。方法采用亚细胞纯化及蛋白印迹法检测乳腺癌细胞株MCF7经放射线处理后BRCA1的亚细胞定位,同时采用免疫荧光法检测细胞核磷酸化的H2AX组蛋白(γ-H2AX)、Rad51核焦点形成。流式细胞技术检测细胞凋亡、克隆形成实验检测体外细胞存活情况,并制作裸鼠皮下移植瘤模型,分为4组,分别为:对照组、放射+DMSO组、假照+ABT-888(ABT-888为PARP抑制剂)组、放射+ABT-888组,每5 d为1个治疗周期,周期第1天给予2 Gy照射或假照射。第2~5天给予溶剂(对照组、放射+DMSO组)或20 mg/(kg·d)的ABT-888(假照+ABT-888组),总共给予4个周期的治疗。检测各组的体内抑瘤作用。结果经4 Gy放射处理后,MCF7胞核BRCA1表达量减少,仅为对照组的41%,但胞浆内表达量明显增多,是对照组的2.14倍(P<0.01);同时MCF7细胞经4 Gy放射处理后ABT-888诱导的Rad51核焦点形成阳性细胞也较对照组明显减少(7%vs.30%,P=0.01)。放射线和ABT-888联合应用导致MCF7细胞凋亡率增高(19%),与对照组(5%)、放射+DMSO组(9%)或假照+ABT-888组(6.2%)相比较差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠移植瘤模型中放射+ABT-888组对肿瘤生长抑制作用明显优于假照+DMSO组或假照+ABT-888组(P<0.01)。结论放射线可诱导BRCA1出核并增强PARP抑制剂的抗肿瘤作用。

体内转录的多聚腺苷酸加速外源基因mRNA的出核转运

目的:探索体内转录的短多聚腺苷酸[poly(A)]对外源基因mRNA的表达及出核转运的影响。方法:构建依赖于H1启动子体内转录的poly(A)载体,用脂质体转染方法将其与外源绿色荧光蛋白(GFP)基因表达质粒导入MCF-7细胞,采用qPCR和Western印迹分别检测GFP在mRNA和蛋白水平的表达情况,并通过体外实验检测体内转录的poly(A)对GFP mRNA的加尾影响;采用qPCR法考察16种内源基因的mRNA水平;将其与p53表达质粒共转染MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果:在MCF-7细胞中,依赖于H1启动子转录的poly(A)能够加速外源GFP mRNA的poly(A)加尾,促进其从细胞核向细胞质输出,从而提高12 h内GFP的表达量,对内源基因mRNA水平没有影响;它还能加速外源p53基因的表达。结论:建立了通过体内转录poly(A)从而加速外源基因表达的策略,可能对基因治疗或快速研究某个特异基因的功能具有重要的应用价值。

614例孕中期羊水细胞染色体核型分析

目的探讨孕中期羊水细胞染色体核型分析结果及不同产前诊断指征下异常核型检出率。方法纳入2018年12月—2022年3月在川北医学院附属南充市中心医院行羊膜腔穿刺术的614例孕妇染色体核型分析结果进行回顾性分析。对产前诊断指征进行分类总结,并对不同产前指征下正常、异常核型进行比较,分析不同产前诊断下羊水细胞培养及染色体核型结果对临床遗传咨询价值。结果614例羊水样本中共检出33例异常核型,检出率为5.37%。异常核型中染色体数目异常(含嵌合体)21例,结构异常11例,同时出现数目及结构异常的1例。高龄、产筛高风险、B超异常、NT>2.5 mm、不良孕产史及用药史、无创DNA高风险、夫妻一方染色体异常这7类产前诊断指征中的异常核型检出率分别为2.53%、3.89%、2.7%、12.82%、3.03%、42.11%、40%。异常核型检出率在无创DNA高风险及夫妻一方染色体异常这两个指征中最高,二者间差异无统计学意义(P>0.05);NT>2.5 mm指征排第三;其余四种指征异常核型检出率最低,四种指征间差异无统计学(P>0.05)。结论羊水细胞培养及染色体核型分析技术对预防缺陷儿出生具有重要意义。产前诊断指征中,无创高风险与夫妻一方染色体异常指征对羊水异常核型的检出率最高。

Nrf2出核转运机制及意义的研究进展

核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)是C'n'C转录因子家族成员之一,在各种组织细胞中广泛表达,是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子。近年来研究发现Nrf2完成抗氧化应激基因诱导后快速降解与其转录激活同样重要,而Nrf2的出核转运是在细胞质中快速降解的前提。文中就目前Nrf2出核转运机制的研究进展作一综述。

紫外线、雌激素对角朊细胞表达浸出性核抗原及分泌白介素1的影响

近10年的研究发现紫外线可促进SSA/Ro抗原在角朊细胞膜的表达,这种表达依赖于中波紫外线,并与照射强度有关。雌激素也能产生类似的效应,并能增强紫外线对角朊细胞的影响作用。另外,紫外线还可以使角朊细胞生成白介素1增多,而白介素1又可参与调节角朊细胞产生核抗原,如ssDNA。

不同指征介入性产前诊断异常核型检出率及分娩结局的比较

目的:比较分析不同指征介入性产前诊断异常核型检出率及分娩结局。方法:将2012年1月至2014年1月入住我院的365例进行介入性产前诊断并分娩的产妇按照高龄、血清筛查高风险、超声软指标阳性及产妇配偶双方不良病史及孕史四种不同指征分组,分析探讨各组产妇进行介入性产前诊断胎儿异常核型的检出率,比较介入性产前诊断检出率与分娩后胎儿异常核型检出率的差异情况。结果:经介入性诊断后,超声软指标阳性指征胎儿异常核型的检出率(3.33%)与高龄产妇、血清筛查高风险及产妇配偶双方不良病史及孕史三组(5.49%、4.60%、2.06%)无明显差异,统计学无意义(P>0.05);应用不同指征介入性产前诊断异常核型检出率为4.11%,分娩后,直接对胎儿进行核型检查,异常核型发生率为3.84%,无明显差异,统计学无意义(P>0.05)。结论:对于产妇进行介入性产前诊断有重要意义,可准确判断胎儿的异常核型发生情况,对异常胎儿及早采取治疗及处理方案,切实得为异常核型胎儿家长提供意见,可行性高,应该在妇女产前筛查方面大量应用。

内障核松动器与内障核娩出器的临床应用

本文介绍作者自制的内障核松动器与内障核娩出器,在手术中能帮助摘出晶体核,减少对眼球的挤压。内障核松动器是将5号注射针头去尖、磨钝、打光,自其前端2mm 处弯成弧形而制成(见图1)。内障核娩出器又名环形针,是白内障现代囊外摘除术中新式娩核法的器械(见图2)。现将上述两种器械在使用中的体会作一简介:采用开罐式截囊法。截囊毕,即将内障核松动器套在2ml 注射器上,吸入平衡液,自截囊穿刺口插入内障核与囊膜之间,一面徐徐注水,一面将松动器弯曲部自然滑入内障核赤道部,使其凹面与内障核赤道部相贴。

小切口注水晶状体圈套出法娩核白内障非超声乳化摘除术临床分析

目的：探讨小切口注水晶状体圈套出法娩核白内障非超声乳化摘除术的疗效及价值。方法：对168例白内障患者225只眼随机分为超声乳化手术组和小切口非超声乳化手术组。比较两组病术后视力、手术成本、住院费用以及患者的满意度。结果：小切口非超声乳化摘除术组手术成本以及住院费用明显低于超声乳化术组,且术后视力与超声乳化组无显著差异。结论：小切口非超声乳化摘除术,手术成本、住院费用明显下降,值得推广应用。