血清核受体亚家族3C组成员2在恶性肿瘤中的研究进展

血清核受体亚家族3C组成员2(NR3C2)可能与肿瘤的发生发展和患者的预后有关。研究发现,血清NR3C2通过抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,在肝癌、胰腺癌、乳腺癌、口腔鳞状细胞癌、宫颈癌、结直肠癌、肾细胞癌等肿瘤中发挥重要作用,是一种潜在的诊断及预后评估的生物标志物,可以帮助临床医师为患者制订个性化治疗方案提供参考。本文对血清NR3C2在肿瘤中的研究进展进行综述,旨在为相关肿瘤筛选新的有效早期诊断及预后评估的生物标志物提供参考。

膀胱癌组织miR-20a-5p、NR4A3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的分析膀胱癌(BC)组织miR-20a-5p、核受体亚家族4成员3(NR4A3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2016年12月—2019年1月曲靖市第一人民医院泌尿外科行手术治疗BC患者30例,收集其膀胱癌组织及相应的癌旁组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BC癌组织中miR-20a-5p、NR4A3的表达水平,并分析miR-20a-5p、NR4A3表达与BC临床病理特征的关系;Kaplan-Meier曲线分析miR-20a-5p、NR4A3与BC患者预后的关系;Cox风险比例回归模型评估BC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,BC癌组织中miR-20a-5p表达上升(t/P=7.013/<0.001),NR4A3表达下降(t/P=9.658/<0.001)。TargetScan网站显示,miR-20a-5p与NR4A3存在靶向关系,且Pearson相关性分析显示,BC癌组织中miR-20a-5p与NR4A3表达呈负相关(r/P=-0.599/<0.001)。病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者miR-20a-5p高于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(t/P=2.159/0.040、2.157/0.040、2.403/0.023),病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者NR4A3表达显著低于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(t/P=3.421/0.002、5.445/<0.001、2.849/0.008)。BC患者3年总生存率为63.33%,miR-20a-5p高表达组3年生存率低于低表达组(χ^(2)/P=4.474/0.034),而NR4A3低表达组低于高表达组(χ^(2)/P=9.853/0.002);miR-20a-5p高表达是影响BC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.028(1.764~2.895)]。结论BC癌组织中miR-20a-5p表达上升,NR4A3表达下降,与BC病理分级、淋巴结转移、TNM分期及预后有关,且miR-20a-5p高表达为BC患者预后的独立危险因素。

miR-20a通过靶向NR4A3促进前列腺癌细胞增殖

前列腺癌是男性患者中常见的恶性肿瘤,探讨前列腺癌的发病机制和寻找合适的治疗靶标具有重要的临床意义。来源于类固醇核激素受体超家族NR4A3在多种肿瘤的恶性进展中发挥重要作用,但其在前列腺癌中的作用尚未阐明。本课题拟以前列腺癌细胞为研究对象,揭示NR4A3在前列腺癌中的作用;在此基础上,寻找靶向NR4A3的miRNA,为前列腺癌的诊断和治疗提供新靶点。GEPIA网站预测显示,NR4A3在前列腺癌组织中呈低表达。qRT-PCR检测证实,NR4A3在前列腺癌细胞中也呈低表达(P<0.01);CCK8和克隆形成的结果显示,过表达NR4A3可使前列腺癌细胞活力显著下降(P<0.01),集落数量和大小显著减少。生物信息学网站预测,NR4A3可能是miR-20a靶基因。通过qRT-PCR检测发现,miR-20a在前列腺癌细胞中呈高表达(P<0.01),双荧光素酶报告基因结果证实,miR-20a能够与NR4A3的3’-UTR的2个位点靶向结合(P<0.05,P<0.001),且Western印迹结果显示,miR-20a可抑制NR4A3的表达;进一步CCK8检测发现,随着时间的延长miR-20a inhibitor能够使前列腺癌细胞活力显著下降(P<0.05),miR-20a mimic则得到与之相反的结果(P<0.05,P<0.01);而当共转染miR-20a mimic和pcDNA3.1-NR4A3重组质粒时,通过CCK8和克隆形成实验发现,上调NR4A3的表达可部分抵消miR-20a mimic对PC3细胞活力(P<0.05),集落数量和大小的促进作用。综上所述,miR-20a通过靶向NR4A3促进前列腺癌细胞增殖。

miR-7977、NR4A1在狼疮性肾炎肾组织中的表达及意义

目的探究miR-7977、核受体亚家族4A组成员1(NR4A1)在狼疮性肾炎(LN)肾组织中的表达及临床意义。方法选取2016年3月—2019年4月收治的126例系统性红斑狼疮为研究对象,根据肾组织病理检查分为LN组58例与非LN组68例。比较两组肾组织miR-7977表达量及NR4A1表达评分差异,应用受试者工作特征(ROC)曲线评估二者对LN的诊断价值;比较不同病理分型LN患者肾组织miR-7977表达量、NR4A1表达评分,并采用Spearman秩相关分析二者与病理分型的相关性。结果LN组肾小管萎缩、间质纤维化发生率均高于非LN组(P<0.01);LN组肾组织miR-7977表达量、NR4A1表达评分均高于非LN组(P<0.01)。肾组织miR-7977表达量、NR4A1表达评分对LN均有较高诊断价值(曲线下面积分别为0.888、0.897)。不同病理分型LN患者肾组织miR-7977表达量、NR4A1表达评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。肾组织miR-7977表达量和NR4A1表达评分与LN患者病理分型无明显相关性(P>0.05)。结论肾组织miR-7977表达量、NR4A1表达评分能辅助诊断LN,在LN诊疗中具有重要作用。

核受体NR2E1与肥胖人群慢性炎症状态的相关性研究

目的:探讨核受体亚家族2,E组,成员1(nuclear receptor subfamily 2,group E,member 1,NR2E1)与肥胖人群慢性炎症状态的相关性。方法:选取42例肥胖患者作为肥胖组,53例健康体检者为对照组。检测两组身高、体质量、腰围(waist circumference,WC)、血浆三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、空腹胰岛素(fasting insulin,FIN)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)等指标。采用胰岛素抵抗稳态模型(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)评估胰岛素抵抗指数。分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),Western Blot检测NR2E1蛋白水平;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度。结果:肥胖组体质量指数、WC、TC、TG、HDL-C、LDL-C、FIN、HOMA-IR均较对照组明显升高(均P<0.01);且肥胖组NR2E1、TNF-α及IL-6表达水平均较对照组明显增加(均P<0.01);NR2E1表达水平与TC、LDL-C、TNF-α、IL-6均呈正相关(r=0.478、0.439、0.609、0.696,均P<0.01);NR2E1的变化与IL-6呈正相关关系(R2=0.524,B=0.019,β=0.488,t=2.275,P=0.029)。结论:NR2E1在肥胖患者中表达增加可能跟肥胖相关慢性炎症状态有关。

甲状腺癌患者组织及手术前后血清中NR3C2和ZEB1表达水平及其与预后价值研究

目的探讨核受体亚家族3C组成员2(nuclear receptor subfamily 3,group C,member 2,NR3C2)和E盒结合锌指蛋白1(E-box-bindingzincfingerprotein1,ZEB1)在甲状腺癌组织中的表达差异及手术前后血清NR3C2mRNA和ZEB1 mRNA的相对表达水平,分析其与患者预后的关系。方法选取2018年3月~2019年5月在邹城市人民医院进行手术治疗的85例甲状腺癌患者的癌组织和癌旁组织(距癌组织>3cm)样本,采用免疫组织化学法(ICC)检测癌组织和癌旁组织中NR3C2和ZEB1的表达;分别收集甲状腺癌患者(实验组)手术前、术后1周、术后1个月的血清样本,以及同期到该院体检的30例健康者(对照组)的血清样本,采用实时荧光定量PCR检测NR3C2 mRNA和ZEB1 mRNA相对表达水平;分析NR3C2mRNA和ZEB1mRNA相对表达水平与临床病理特征的关系;术前NR3C2和ZEB1表达水平与甲状腺癌患者三年生存率的关系用Kaplan-Meier法分析,采用对数秩检验进行组间生存曲线差异分析;采用多因素COX回归分析甲状腺癌患者预后影响因素。结果免疫组织化学法观察显示,癌组织中NR3C2阳性表达率(36.47%)低于癌旁组织(72.94%),癌组织中ZEB1阳性表达率(67.06%)高于癌旁组织(30.59%),差异具有统计学意义(χ^(2)=22.814,22.624,均P<0.001);实验组术前血清NR3C2 mRNA表达水平(0.55±0.14)低于对照组表达水平(0.97±0.22),术前、术后1周和术后1个月血清NR3C2mRNA表达水平(0.55±0.14,0.69±0.15,0.89±0.19)依次升高,差异具有统计学意义(t=12.038,F=95.217,P<0.001);实验组术前ZEB1 mRNA表达水平(1.88±0.28)高于对照组表达水平(1.02±0.41),术前、术后1周、术后1个月血清ZEB1mRNA表达水平(1.88±0.28,1.43±0.32,1.15±0.29)依次降低,差异具有统计学意义(t=12.716,F=130.564,P<0.001);甲状腺癌患者血清NR3C2 mRNA表达和ZEB1mRNA表达水平与TNM分期、淋巴结转移、分化程度和包膜浸润有关(t=2.449,2.081,3.938,2.212;2.013,2.348,2.029,2.096,均P<0.05);NR3C2 mRNA高表达组三年生存率(86.00%)显著高于低表达组(40.00%),ZEB1 mRNA高表达组三年生存率(35.29%)显著低于低表达组(88.24%),差异均有统计学意义(χ^(2)=4.168,5.593,均P<0.05);多因素COX回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、包膜浸润、NR3C2 mRNA和ZEB1 mRNA均为甲状腺癌患者预后影响因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织和血清中NR3C2表达下调,ZEB1表达上调,NR3C2和ZEB1表达水平影响患者预后生存率,对甲状腺癌患者预后评估具有重要意义。

结直肠癌组织中NR2F1的表达及其与预后的相关性

目的检测结直肠癌中核受体亚家族2组F成员1(NR2F1)的蛋白表达水平,并探讨其与患者预后的关系。方法选择2012年8月至2013年9月在苏州市立医院进行根治性切除术的56例结直肠癌患者作为研究对象,采集患者的结直肠癌组织标本及对应的癌旁组织标本。采用EnVision法测定结直肠癌组织和癌旁组织的NR2F1的蛋白表达水平,比较不同NR2F1蛋白表达水平结直肠癌患者的临床病理特征。采用Kaplan-Meier法绘制结直肠癌患者的生存曲线,分析NR2F1蛋白表达水平与结直肠癌的预后的相关性。结果结直肠癌组织的NR2F1高表达率为48.21%,明显高于癌旁组织的7.14%,差异有统计学意义(P<0.05);NR2F1高表达者的无脉管侵犯率为85.19%,明显高于NR2F1低表达者的58.62%,差异有统计学意义(P<0.05);NR2F1高表达患者突破浆膜层的占比为48.15%,明显低于NR2F1低表达者的65.52%,且随着浸润深度从固有肌层到突破浆膜层,NR2F1低表达增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);NR2F1高表达和低表达患者在性别、年龄、肿块大小、分化程度、淋巴结转移方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05);经Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,结直肠癌的NR2F1高表达患者的10年总生存率为26.79%,明显高于NR2F1低表达患者的17.86%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结直肠癌的NR2F1表达升高,NR2F1可能参与了结直肠癌的发生、侵袭,对患者的预后造成一定的影响。

内皮素-1诱导A549细胞对Nur77表达的影响

目的探讨Nur77在内皮素-1(Endothlin-1)诱导的A549细胞中的表达水平及亚细胞定位。方法首先绘制A549细胞生长曲线并观察Endothlin-1对A549细胞的毒性作用;再通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测不同刺激时间和浓度的Endothlin-1对A549细胞Nur77 mRNA和蛋白表达的影响;最后通过免疫荧光检测Nur77在Endothlin-1刺激反应中的亚细胞定位情况。结果Endothlin-1各浓度和时间对A549细胞均无毒性作用(P>0.05),Endothlin-1刺激后A549细胞中Nur77在mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但可以刺激Nurr7由细胞浆转移至细胞核内。结论在A549细胞中,Endothlin-1可能是通过改变Nurr7亚细胞定位来发挥作用。

lncRNA NR2F2在胰腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核受体亚家族2组F成员2(NR2F2)在胰腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系。方法收集2015年9月-2018年7月在西安国际医学中心医院接受手术治疗胰腺癌患者的临床资料,采用RT-PCR法检测胰腺癌组织及癌旁组织中lncRNA NR2F2的相对表达量。采用χ2检验分析lncRNA NR2F2表达水平与各临床特征的关系;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并比较lncRNA NR2F2高表达组与低表达组患者的3年生存率;采用Cox回归分析影响胰腺癌患者预后的危险因素。结果与癌旁组织比较,lncRNA NR2F2在胰腺癌组织中高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NR2F2高表达组患者3年生存率低于低表达组,预后较差(P<0.05)。肿瘤病理(TNM)分期、淋巴结转移、lncRNA NR2F2高表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论lncRNA NR2F2在胰腺癌患者组织中高表达,是胰腺癌预后独立危险因素,可能是胰腺癌患者预后标志物和治疗靶点。

乳腺癌患者血清NR3C2和DNMT3A表达水平及其诊断价值研究

目的 探讨乳腺癌患者血清核受体亚家族C组成员2(nuclear receptor subfamily 3, group C, member 2,NR3C2),DNA甲基化转移酶-3A[DNA(cytosine-5)-methyltransferase 3A,DNMT3A]水平及其临床诊断价值。方法收集复旦大学附属华东医院2017年5月~2020年12月期间住院的94例乳腺癌患者为乳腺癌组,另选取同期健康体检者86例作为对照组。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组血清NR3C2和DNMT3A水平,Pearson法分析乳腺癌患者血清NR3C2和DNMT3A表达水平相关性,多因素Logistic回归分析乳腺癌发生的影响因素,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估NR3C2和DNMT3A对乳腺癌的诊断价值。结果 乳腺癌组患者血清NR3C2水平为317.84±33.47 ng/L,低于对照组(374.25±47.72ng/L),DNMT3A的表达水平为451.63±75.47μg/L,高于对照组(349.85±63.72μg/L),差异有统计学意义(t=9.243,9.729,均P<0.05)。Pearson分析结果显示,乳腺癌患者血清NR3C2与DNMT3A表达水平存在明显负相关(r=-0.501,P=0.000)。Logistic回归分析结果显示,NR3C2高水平为乳腺癌发生的保护因素(OR=0.563,95%CI:0.372~0.851,P=0.006),DNMT3A高水平是乳腺癌发生的危险因素(OR=1.834,95%CI:1.249~2.693,P=0.002)。ROC曲线结果发现,血清NR3C2与DNMT3A诊断乳腺癌的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.853(0.791~0.915),0.930(0.896~0.965),当两者联合时其AUC为0.969(0.949~0.990),高于两者单独检测(Z=3.460,1.894,P=0.000,0.034)。结论 乳腺癌患者血清NR3C2表达水平降低,DNMT3A表达水平升高,两者联合检测能够提高乳腺癌的诊断价值。

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-145-5p调控结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核受体亚族2F组成员1反义RNA(NR2F1-AS1)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法收集2015年3月至2017年5月青海省第五人民医院外科手术切除并经病理证实为原发性结肠腺癌组织25例,另留取距肿瘤边缘3 cm的癌旁组织(正常结肠组织)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中NR2F1-AS1和微小RNA-145-5p(miR-145-5p)表达水平。以结肠癌细胞HCT116为研究对象,双荧光素酶报告基因实验验证NR2F1-AS1和miR-145-5p调控关系。转染NR2F1-AS1小干扰RNA或miR-145-5p模拟物至HCT116细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell分别检测干扰NR2F1-AS1表达或过表达miR-145-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁组织比较,结肠癌组织中NR2F1-AS1表达升高[(3.39±0.33)比(1.01±0.11),P<0.05],miR-145-5p表达降低[(0.55±0.05)比(1.00±0.08),P<0.05]。与共转染WT-NR2F1-AS1的miR-NC组比较,miR-145-5p组细胞荧光素酶活性降低P<0.05)。过表达NR2F1-AS1后细胞中miR-145-5p表达水平降低(P<0.05),干扰sNR2F1-AS1表达后细胞miR-145-5p表达水平升高(P<0.05)。干扰NR2F1-AS1表达或过表达miR-145-5p后,HCT116细胞光密度(OD)值、迁移和侵袭数降低(P<0.05)。干扰miR-145-5p表达逆转了干扰NR2F1-AS1表达对HCT116细胞OD值、迁移和侵袭数的影响。结论NR2F1-AS1在结肠癌组织中呈高表达,干扰NR2F1-AS1表达可能通过上调miR-145-5p表达来抑制结肠癌细胞恶性行为,是结肠癌治疗的潜在靶点。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。

孤儿核受体NR4A1表达对氧-葡萄糖剥夺诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨孤儿核受体NR4A1表达对氧一葡萄糖剥夺（oxygen．glucose deprivation，OGD）诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响及其可能机制。方法大鼠小脑颗粒细胞原代培养7～8d后给予OGD处理。应用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测NR4A1、胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达，实时定量聚合酶链反应检测NR4A1 mRNA表达。用编码NR4A1的慢病毒载体转染大鼠小脑颗粒神经元，并检测转染大鼠小脑颗粒神经元OGD后凋亡率以及细胞色素c和胱天蛋白酶-3表达。结果随着OGD时间的延长，培养大鼠小脑颗粒神经元活性显著性降低，凋亡率显著性增高，NR4A1mRNA和蛋白以及胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达均显著性上调。转染NR4A1的大鼠小脑颗粒神经元过表达NR4A1，OGD后凋亡率显著性降低，胱天蛋白酶-3和细胞色素C蛋白表达显著性下调。结论NR4A1过表达能通过下调胱天蛋白酶-3和细胞色素c表达减少OGD诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。

小鼠NR1D1基因过表达载体的构建及其生物信息学分析

目的:构建小鼠核受体亚家族1组D成员1(NR1D1)基因的过表达载体,分析小鼠NR1D1蛋白的基本特征。方法:从小鼠肝脏组织中提取总RNA,反转录后获得cDNA,采用PCR技术扩增得到小鼠NR1D1基因的编码区片段,经同源重组与pcDNA3.1载体相连接,将酶切鉴定和测序正确的重组质粒命名为pcDNA3.1-NR1D1。将pcDNA3.1空质粒和pcDNA3.1-NR1D1重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为对照组和pcDNA3.1-NR1D1转染组,48 h后提取总RNA和总蛋白样品,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Westernblotting法检测2组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平。使用DNAStar和MEGA7软件对小鼠与其他物种的NR1D1基因编码区序列(CDS)进行相似性分析,并构建系统进化树;利用ExPASy、ProtScale、SingalP5.0、TMHMM-2.0、PhosphoSitePlus®、SOPMA和SWISS-MODEL等在线工具分析NR1D1蛋白的氨基酸组成、亲/疏水性、跨膜区域、信号肽、二级结构和三级结构。结果:酶切鉴定和测序结果均表明过表达载体pcDNA3.1-NR1D1构建成功。与对照组比较,pcDNA3.1-NR1D1转染组细胞中NR1D1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。生物信息学分析,小鼠NR1D1 CDS区与人、大鼠、中国仓鼠、黑猩猩、兔、犬、猪、马、牛、绵羊、山羊、家猫和斑马鱼的相似性分别为90.0%、94.8%、86.5%、90.0%、89.6%、88.3%、89.7%、89.8%、88.8%、89.1%、89.1%、89.7%和65.1%。系统进化树分析,小鼠NR1D1基因与中国仓鼠和大鼠的遗传距离最近,与斑马鱼的遗传距离最远。小鼠NR1D1蛋白是一种疏水性碱性蛋白质,不属于分泌蛋白和跨膜蛋白,含有12个磷酸化位点和10个泛素化位点;二级结构中无规则卷曲占54.63%,α-螺旋占26.50%,延伸链占12.68%,β-转角占6.18%;三级结构预测,小鼠与人的NR1D1蛋白相似度大,差异较小。结论:成功构建了小鼠NR1D1基因过表达载体pcDNA3.1-NR1D1,验证了其在HEK293T细胞中的过表达效果,为进一步研究NR1D1基因及其蛋白的功能提供了依据。

LncRNA NR2F2-AS1靶向抑制miR-129-5p调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)核受体亚家族2组F成员2反义RNA1(NR2F2-AS1)靶向抑制微小RNA-129-5p(miR-129-5p)调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的情况。方法:选取2020年4月—2020年12月经病理检查确诊为子宫内膜癌的50例患者。采用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)对子宫内膜癌组织与细胞中miR-129-5p和LncRNA NR2F2-AS1的表达水平进行检测;用流式细胞术与MTT比色法(MTT法)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa)凋亡与增殖水平进行检测;用蛋白质印迹法(Western blot)对细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、兔抗人单克隆抗体(Bax)、p21基因(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达水平进行检测;采用双荧光素酶报告系统对miR-129-5p与LncNR2F2-AS1的调控关系进行验证。结果:子宫内膜癌组织中LncRNA NR2F2-AS1的含量明显高于正常子宫内膜组织(P<0.05)。干扰LncNR2F2-AS1表达、过表达miR-129-5p可抑制子宫内膜癌细胞增殖,加速细胞凋亡,细胞中的Bcl-2和CyclinD1含量大幅降低(P<0.05),而p21含量明显升高(P<0.05)。结论:干扰LncRNA NR2F2-AS1可以靶向促进miR-129-5p的表达,从而抑制子宫内膜癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

孤儿核受体Nur77在衣霉素诱导小鼠海马神经元损伤中的作用:与内质网应激的关系

目的评价孤儿核受体Nur77在衣霉素(TM)诱导小鼠海马神经元损伤中的作用及其与内质网应激的关系。方法小鼠HT22细胞,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组(C组)、Nur77特异性激动剂Csn-B组(Csn-B组)、内质网应激诱导剂TM组(TM组)和TM+Csn-B组。C组细胞正常培养24 h;Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10μg/ml)培养细胞24 h;TM组培养基中加入TM(终浓度为200 ng/ml)培养24 h诱导细胞内质网应激损伤;TM+Csn-B组培养基中加入Csn-B(终浓度为10μg/ml)预处理细胞15 min后,给予TM(终浓度为200 ng/ml)共同培养24 h。各组细胞处理结束后采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,Western blot法检测内质网应激相关蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和活化的caspase-3(cleaved-caspase-3)的表达。结果与C组比较,TM组细胞活力下降,CHOP、GRP78、Bax和cleaved-caspase-3表达上调,Bcl-2和caspase-3表达下调(P<0.05或0.01);与TM组比较,TM+Csn-B组细胞活力升高,CHOP、GRP78、Bax和cleaved-caspase-3表达下调,Bcl-2和caspase-3表达上调(P<0.05或0.01)。结论孤儿核受体Nur77参与了TM诱导小鼠海马神经元损伤的过程,与激活内质网应激有关。

NR4A1通过上调NRF2表达抑制顺铂诱导的近端肾小管上皮细胞铁死亡

目的探究核受体亚家族4 A组成员1(nuclear receptor subfamily 4 group A member 1,NR4A1)在缓解顺铂对近端肾小管上皮细胞毒性的作用及其分子机制。方法通过"Tabula-muris"单细胞转录组测序数据库分析肾脏组织各细胞亚群NR4A1基因的表达。在近端肾小管上皮细胞HK-2细胞系及原代细胞中,通过慢病毒感染以过表达NR4A1基因。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测顺铂的细胞毒性。细胞用碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染后通过流式细胞仪检测细胞的死亡比例。通过实时荧光定量PCR和Western印迹法检测细胞中NR4A1和核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2)基因的表达。通过检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)以及脂质活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量分析细胞铁死亡程度。结果单细胞转录组数据分析的结果表明NR4A1基因表达在肾脏组织的近端肾小管上皮细胞亚群中最低。50μmol/L和100μmol/L顺铂能够显著诱导近端肾小管上皮细胞MDA、GSSG和脂质ROS含量的上升(均P<0.01),且顺铂浓度越高诱导MDA、GSSG和脂质ROS增加越多。相比对照HK-2细胞,过表达NR4A1的HK-2细胞脂质ROS含量及铁离子含量显著较低(均P<0.01),过表达NR4A1抑制了顺铂对近端肾小管上皮细胞的毒性及其诱导的铁死亡。分子机制研究发现,在近端肾小管上皮细胞中,过表达NR4A1上调了抗铁死亡基因NRF2的表达(P<0.01)。进一步单细胞转录组数据分析的结果表明,与NR4A1在肾脏组织细胞亚群的表达状态相似,NRF2表达在近端肾小管上皮细胞中也最低。结论顺铂能够诱导近端肾小管上皮细胞发生铁死亡,且浓度越高越明显。NR4A1通过上调近端肾小管上皮细胞NRF2的表达抑制顺铂诱导的细胞铁死亡,从而缓解顺铂对细胞的毒性。

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16对急性肺栓塞小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)通过微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/核受体亚家族4组A成员3(NR4A3)对急性肺栓塞(APE)小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和凋亡的影响及机制。方法用颈总静脉注射自体血栓法建立APE小鼠模型,将小鼠随机分为假手术组和模型组,并制备小鼠PASMCs。随后,将空白质粒(设为pcNC组)、SNHG16过表达质粒(设为pc-SNHG16组)、阴性对照寡核苷酸(设为miR-NC组)和miR-106b-5p模拟物(设为miR-106b-5p mi组)分别转染至模型组小鼠PASMCs中。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)染色实验检测PASMCs增殖能力;用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测PASMCs凋亡率;用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PASMCs中miR-106b-5p的表达;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-106b-5p与SNHG16之间的结合关系;用Western blot检测PASMCs中NR4A3蛋白的表达。结果假手术组、模型组、pc-NC组和pc-SNHG16组细胞增殖率分别为(29.57±2.86)%,(33.08±0.96)%,(32.85±2.41)%,(36.86±2.25)%;细胞凋亡率分别为(19.25±1.09)%,(17.04±1.33)%,(15.80±1.77)%,(10.93±1.40)%;以上指标,假手术组和模型组相比,pc-NC组和pcSNHG16组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达SNHG16可显著降低miR-106b-5p的表达,双荧光素酶报告基因实验证实miR-106b-5p与SNHG16可直接结合,过表达miR-106b-5p可显著降低NR4A3蛋白的表达。结论SNHG16通过调控miR-106b-5p/NR4A3轴促进APE小鼠模型PASMCs增殖,并抑制细胞凋亡。

糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Rev-erbα与NLRP3炎症小体的关系

目的评价糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1(Rev-erbα)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的关系。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~240 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备1型糖尿病模型。取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组,n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NIR组,n=12)。取糖尿病大鼠30只,采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组,n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组,n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα抑制剂SR8278组(DIR+SR组,n=12)。采用结扎左冠脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DIR+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR82782 mg/kg。再灌注结束时经采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH和cTnI浓度,TTC法测心肌梗死面积百分比,HE染色法观察心肌组织病理学结果,Western blot法检测心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β的表达水平。结果与假手术大鼠比较,心肌缺血再灌注大鼠血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调(P<0.05),心肌组织病理学损伤明显;与NIR组比较,DIR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调(P<0.05),心肌组织病理学损伤加重;与DIR组比较,DIR+SR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达下调(P<0.05),心肌组织病理学损伤减轻。结论Rev-erbα可促进NLRP3炎症小体活化,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理机制。

小鼠念珠菌性阴道炎中维A酸相关孤儿受体、白细胞介素17表达

目的探讨Th17／白细胞介素（IL）17轴在小鼠念珠菌性阴道炎发病中作用。方法120只雌性BALB／c小鼠随机分为雌激素感染组（Ei）、雌激素非感染组（En）、对照感染组（Ci）和对照非感染组（Cn）。Ei、En组在阴道接种前3d于后腿皮下注射雌二醇0．05mg，而Ci、Cn组皮下注射灭菌大豆油0．1ml，以后隔日注射1次直至实验结束；Ei、Ci组在接种日在阴道内接种白念珠菌悬液10μL（5×10^4个孢子），而En、Cn组阴道内注入10μl无菌磷酸盐缓冲液。接种后3、7、14d，每组于各时间点分别随机取10只小鼠处死，完整切取阴道组织作液氮冷冻或石蜡包埋，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹和免疫荧光染色分别检测阴道组织中维A酸相关孤儿受体（ROR）γt、RORα、IL-17mRNA、蛋白表达及免疫荧光强度。结果激光共聚焦显微镜显示，En、Cn组中RORγt、RORα和IL—17主要表达于阴道固有膜及血管中炎症细胞，Ci组中主要表达于黏膜上皮及其表面附着的菌丝、固有膜及血管中炎症细胞，Ei组中则广泛分布于黏膜上皮、固有膜及血管中炎症细胞、阴道腔和黏膜上皮中内吞菌丝。qRT-PCR和免疫荧光检查显示，En、Ci和Ei组中RORγt、RORα、IL-17mRNA表达及其免疫荧光强度在相同时间点均显著高于Cn组（均P〈0．05），且Ei组显著高于En、ci组（P〈0．05）；除Cn组外，其余各组中RORγt、RORα、IL-17mRNA表达及其免疫荧光强度均随时间延长有增加的趋势，其中RORγt、RORαmRNA和免疫荧光强度及IL-17mRNA一般在14d时最高，而IL-17免疫荧光强度在7d时最高（P〈0．05）。Western印迹显示，Ci、Ei组中RORγt和IL-17蛋白表达在相同时间点均明显高于Cn、En组（RORγt：F组别=45．685，P〈0．001；IL-17：F组别=29．655，P〈0．01），其中H组表达水平最高（P〈0.05），而Cn、En组表达差异无统计学意义（P〉0．05）；Ci、Ei组中二者表达均在感染后7d明显上调，14d无显著增加（RORγt：Fs时间=13．137，P〈0．001；IL-17：F时间=11．182，P〈0．001）。结论阴道念珠菌感染可上调RORγt、RORα、IL-17表达，提示Th17／IL-17轴可能参与BALB／c小鼠念珠菌性阴道炎发生。