CCCTC-结合因子与核周蛋白α4存在分子间相互作用并调控其基因表达

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpull-down实验表明CTCF与KPNA4之间存在相互作用;当CTCF敲降时,KPNA4基因的表达随之下降。结论:CTCF与KPNA4之间存在相互作用并调控其基因表达。

猫眼草提取物通过调控miR-501-3p/KPNA4轴影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的探讨猫眼草提取物对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法猫眼草提取物作用于肝癌Hep3B细胞后,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞增殖蛋白Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E-钙黏附素(E-cadherin)和核周蛋白α4(KPNA4)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-501-3p和KPNA4 mRNA表达水平。转染miR-501-3p模拟物至Hep3B细胞,或猫眼草提取物作用于转染KPNA4过表达载体的Hep3B细胞,上述相同方法检测过表达miR-501-3p或过表达KPNA4对猫眼草提取物处理的Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-501-3p与KPNA4调控关系。结果猫眼草提取物作用Hep3B细胞后,细胞存活率、迁移和侵袭数及CyclinD1、Ki67和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),miR-501-3p表达升高(P<0.05),KPNA4 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。过表达miR-501-3p后,Hep3B细胞存活率、迁移和侵袭数及CyclinD1、Ki67和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。miR-501-3p在Hep3B细胞中靶向负调控KPNA4表达。过表达KPNA4降低了猫眼草提取物对Hep3B细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结论猫眼草提取物可能通过调控miR-501-3p/KPNA4轴抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。