血红素激活含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体诱导肾小管上皮细胞焦亡

目的研究血红素是否通过活化肾小管上皮细胞含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性体引起焦亡而损伤肾脏功能。方法使用血红素处理人肾小管上皮HK-2细胞,通过扫描电镜观察细胞膜上是否有穿孔,免疫荧光染色检测焦亡执行蛋白消皮素D氨基端蛋白(GSDMD-N)的形成情况,明确血红素是否引起人肾小管上皮HK-2细胞焦亡。通过Western blot法检测NLRP3炎性体相关蛋白分子NLRP3、含胱天蛋白酶募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶l前体(pro-caspase-1)和剪切体(caspase-1 p20)、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)和IL-1β等确定血红素是否引起人肾小管上皮HK-2细胞中NLRP3炎性体的活化;通过异体输血构建小鼠溶血模型在动物水平进一步验证溶血释放的血红素是否活化NLRP3炎性体而导致肾损伤。采集静脉血进行血涂片进行Wright-Giemsa染色光镜观察,分光光度计比色法检测游离血红蛋白;全自动生化分析仪检测血清尿素氮以及HE染色观察肾组织病变情况确定溶血模型建立是否成功;分离提取溶血小鼠肾小管上皮细胞,Western blot法检测NLRP3、ASC、pro-caspase-1、caspase-1 p20、pro-IL-1β、IL-1β、GSDMD-N蛋白表达情况明确溶血模型中NLRP3炎性体的活化情况以及焦亡执行蛋白的表达。结果血红素造成肾小管上皮HK-2细胞损伤,细胞膜上出现小孔,焦亡执行蛋白GSDMD-N表达增高,HK-2细胞中NLRP3炎性体相关蛋白caspase-1 p20、IL-1β表达上调;溶血模型小鼠的肾脏功能受损,小鼠肾小管上皮细胞中NLRP3炎性体相关蛋白caspase-1 p20、IL-1β、GSDMD-N表达上调。结论血红素活化肾小管上皮细胞的NLRP3炎性体,诱导焦亡,进而导致肾功能损伤。

含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)炎性体抑制剂及其作用机制研究进展

含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)炎性体是由NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及胱天蛋白酶1(caspase-1)组成的蛋白复合体,主要介导白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的前体成熟参与炎症反应。NLRP3炎性体的异常活化与代谢紊乱、神经退行性疾病、自身免疫性疾病等炎症性疾病的发生发展关系密切。寻找并开发NLRP3炎性体的有效抑制剂成为治疗炎症性疾病的新策略。我们总结了已报道的在NLRP3炎性体活化的起始阶段和激活阶段发挥作用的抑制剂及其作用机制,期望为开发以NLRP3炎性体为靶点的抗炎药物提供新思路。

三叶香茶菜含药血清对肝细胞TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究三叶香茶菜含药血清对大鼠原代肝细胞的Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路的影响。方法将脂多糖(LPS)诱导的肝细胞分为A~G组7个组,采用MTT比色法检测肝细胞增殖,生化法检测肝细胞中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量;ELISA法测定肝细胞白介素-1β(IL-1β)、IL-18、caspase-1。通过RT-PCR、Western blotting或免疫荧光法检测检测肝细胞TLR4、p-IκB-α、NF-κB、IκB-α、NLRP3、GSDMD、ASC的mRNA和蛋白表达。结果三叶香茶菜含药血清对肝细胞的增殖具有抑制作用,并能有效减少肝细胞中ALT、AST、caspase-1、IL-1β、IL-18的分泌;此外,还能明显降低TLR4、NF-κB p65、NLRP3、ASC以及GSDMD等炎症相关蛋白表达,同时上调IκB-α的表达。结论三叶香茶菜通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3活化,有效阻止肝细胞的过度活化,减少肝细胞炎性因子的释放,从而改善肝细胞炎症损伤状况。

炎性体成分NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3对重型颅脑损伤患者预后评估的价值

目的探讨炎性体成分NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）对重型颅脑损伤患者预后评估的价值。方法采用酶联免疫吸附法检测20例重型颅脑损伤患者脑脊液NLRP3浓度，结合格拉斯哥预后评分（GOS）等临床资料对比分析。结果重型颅脑损伤患者脑脊液NLRP3浓度为（33．8±11．6）μg/L，明显高于中型颅脑损伤组[（11．4±2．9）μg/L，P〈0．01]和正常对照组[（1．1±0．3）μg/L，P〈0．01]；预后不良组NLRP3浓度为（42．8±14．4）μg/L，明显高于预后良好组[（29．9±7．9）μg／L，P〈0．05]；患者NLRP3浓度与CT表现（r=0．601，P〈0．01）及GOS评分（r=0．665，P〈0．01）明显相关。结论脑脊液中NLRP3水平可以反映脑损伤程度，可作为评估颅脑损伤患者预后的标志物。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

秦艽鳖甲散调控Toll样受体4信号通路改善银屑病小鼠皮损作用机制研究

目的:研究秦艽鳖甲散改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应的分子机制。方法:将60只小鼠按照随机数字表法随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组(0.98、1.95、3.90 g/kg)。除对照组仅剔除毛发,其余各组均使用咪喹莫特构建银屑病小鼠模型。苏木精-伊红(HE)染色检测皮损组织病理变化;银屑病面积与严重性指数评分(PASI)评估皮损程度;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清炎症介质水平;实时萤光定量PCR(qRT-qPCR)检测白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平;免疫组织化学检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)表达水平;蛋白免疫印迹检测NLRP3、TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果:与模型组比较,甲氨蝶呤组及低剂量、中剂量、高剂量秦艽鳖甲散组小鼠皮损状态明显改善;PASI评分明显降低;血清炎症介质水平、NLRP3及TLR4/NF-κB通路相关蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:秦艽鳖甲散能够改善银屑病小鼠皮肤损伤和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB通路,下调NLRP3表达有关。

Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白12在自身炎症性疾病中的研究进展

Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白12(NLRP12)作为发现较晚的Nod样受体家族成员,是重要的模式识别受体之一,识别多种病原体并启动下游免疫应答,参与多项机体炎症反应的调控,与自身炎症性疾病的发生、进展相关。现从其结构、功能及NLRP12相关自身炎症性疾病等方面对NLRP12进行综述,探讨NLRP12在自身炎症中的作用机制,为认识、探索、治疗NLRP12相关自身炎症疾病提供新思路。

Ghrelin通过调控NF-κB/NLRP3焦亡信号通路抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡的机制研究

目的探究胃饥饿素(Ghrelin)调控核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路在前交叉韧带成纤维细胞焦亡中的作用。方法前交叉韧带成纤维细胞分为对照组、肿瘤坏死因子α(tumor necrotic factor-α,TNF-α)炎症模型组、TNF-α+Ghrelin干预组,通过CCK-8确定TNF-α和Ghrelin干预的剂量和时间,Transwell法检测细胞迁移能力,Western Blot检测细胞焦亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-1)、白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)的表达,q-PCR检测Caspase-1、IL-18、IL-1β、GSDMD m RNA表达水平,Western Blot检测磷酸化P65(p-P65)和NLRP3的表达。结果绘制CCK-8结果曲线,确定Ghrelin的干预浓度为20 ng/mL,TNF-α干预浓度为20 ng/mL,干预时间都为48 h;与对照组相比,TNF-α炎症模型组的细胞迁移能力明显降低(P<0.001),细胞焦亡相关蛋白表达显著增高(P<0.05),p-P65和NLRP3的表达显著增高(P<0.05),Ghrelin干预后细胞迁移能力明显提高(P<0.001),细胞焦亡相关蛋白显著降低(P<0.05),p-P65和NLRP3的表达显著降低(P<0.05)。结论Ghrelin能够显著抑制前交叉韧带成纤维细胞焦亡,改善其迁移能力,这可能是通过调控NF-κB/NLRP3实现的。

外周血NLRP3 mRNA、NF-κB、PCT水平与COPD患者肺功能及肺动脉高压的关系

目的探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信使RNA(NLRP3 mRNA)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强(NF-κB)、降钙素原(PCT)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺功能及肺动脉高压的关系。方法选取COPD稳定期患者47例、COPD急性加重期(AECOPD)未合并肺动脉高压患者47例及AECOPD合并肺动脉高压患者47例,以同期体检健康人群为对照组(n=47),抽取4组受检者空腹静脉血,采用酶联免疫吸附法检测血液NF-κB和PCT表达,采用聚合酶链式反应(PCR)法检测外周血淋巴细胞NLRP3 mRNA的表达;采用肺功能仪检测对照组、COPD稳定期组及AECOPD未合并肺动脉高压组受检者的肺功能指标[第一秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)占预计值的百分比(FEV_(1)%pred)];采用超声心动仪测量AECOPD未合并肺动脉高压组和AECOPD合并肺动脉高压组受检者的肺动脉高压、右心房径及右心室径。结果受检者外周血PCT、NLRP3 mRNA、NF-κB水平表现为AECOPD未合并肺动脉高压组>COPD稳定期组>对照组(P<0.05);AECOPD未合并肺动脉高压组患者血清NLRP3 mRNA、PCT、NF-κB表达水平较AECOPD合并肺动脉高压组减少(P<0.05);受检者PCT、NLRP3 mRNA、NF-κB与肺功能FEV_(1)%pred、FEV_(1)/FVC指标呈负相关(P<0.05),与肺动脉高压、右心房内径、右心室内径3个指标均呈正相关(P<0.05)。结论外周血NLRP3 mRNA、NF-κB、PCT水平可作为COPD疾病的监测指标。

柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。

血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值

目的:分析血清B细胞活化因子(BAFF)、新饱食分子蛋白1(Nesfatin-1)、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值。方法:选取2019年6月至2021年6月该院收治的149例癫痫患者进行前瞻性研究。治疗后随访1年,根据1年后预后情况将患者分为预后不良组(n=43)和预后良好组(n=106)。比较两组治疗前及治疗3、6个月后血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平,采用Spearman相关性分析BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合检测预测癫痫患者预后的价值。结果:治疗3、6个月后,预后不良组血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关(r>0,P<0.05);治疗6个月后,血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合预测癫痫患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.730、0.756、0.737、0.906,均具有一定预测价值,其中联合检测预测价值最高。结论:血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关,且三者联合检测预测癫痫患者的价值高于各单项检测。

六味抗抑郁汤通过调控TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路和抑制炎症因子改善小鼠抑郁样行为的机制研究

目的:探讨六味抗抑郁汤对抑郁症小鼠神经细胞以及Toll样受体4(TLR4)/髓分化因子88(MyD88)/核因子kappa B(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分成正常对照组、慢性轻度不可预测的刺激(CUMS)模型组,六味抗抑郁汤9.62、19.24、38.48 g/kg组和氟西汀5.20 mg/kg组,每组12只。采用CUMS法制备抑郁症小鼠模型。各组分别灌胃给予相应药物,正常对照组和CUMS模型对照组给予等体积蒸馏水,1次/d,连续4 w。采用蔗糖偏好、强迫游泳、悬尾、旷场、Morris水迷宫试验检测各组小鼠行为学;检测各组小鼠血液和海马组织中炎症介质(iNOS、NO、COX-2、PGE2)和炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、IFN-γ)含量;检查海马组织病理学变化;Real-time PCR法检测海马组织中Tlr4/Myd88/Nfkb/Nlrp3通路相关基因的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠糖水偏好率,水平穿越格子数、直立次数,目标象限的百分率以及穿越平台次数明显降低(P<0.01);强迫游泳和悬尾不动时间升高,游泳潜伏期明显延长,血清和海马组织中iNOS、NO、COX-2、PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、IFN-γ含量显著升高,海马神经元细胞排列紊乱和胞体空泡增多,炎性细胞浸润,海马组织中Tlr4、Myd88、Irak1、Irak4、Tak1、Traf6、Nfkb、Nlrp3、Asc、Capsase1、Nek7、Txnip、Gsdmd、Il1b、Il18 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,六味抗抑郁汤可明显升高CUMS模型小鼠糖水偏好率,水平穿越格子数、直立次数,目标象限的百分率以及穿越平台次数,降低强迫游泳和悬尾不动时间,缩短游泳潜伏期,可显著减低CUMS模型小鼠血清和海马组织中iNOS、NO、COX-2、PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-18、IL-6、IFN-γ含量,减少海马神经元细胞排列紊乱和胞体空泡,减轻炎性细胞浸润,显著下调小鼠海马组织中Tlr4、Myd88、Irak1、Irak4、Tak1、Traf6、Nfkb、Nlrp3、Asc、Capsase1、Nek7、Txnip、Gsdmd、Il1b、Il18 mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:六味抗抑郁汤对抑郁症小鼠具有抗抑郁作用,其作用机制可能与抑制CUMS诱导抑郁症小鼠海马组织中TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3信号通路炎性激活,减轻炎症反应和神经元细胞炎性损伤有关。

幽门螺杆菌感染对胃癌患者NF-κB/NLRP3信号通路和炎性因子的影响

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染对胃癌患者单个核细胞核因子κB(NF-κB)/Nod样受体蛋白3(NLRP3)信号通路和炎性因子的影响.方法选取2020年6月-2023年1月天津市第五中心医院收治的49例Hp阳性胃癌患者为感染组,选择同期Hp阴性的47例胃癌患者为对照组;采用酶联免疫吸附法检测患者血清炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白-1(Caspase-1)的水平;分别采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)以及Western blot方法检测NF-κB p56、NLRP3、Caspase-1三个基因mRNA以及蛋白表达水平.结果感染组外周血炎性因子IL-1β、IL-18、TNF-α、Caspase 1水平均高于对照组,外周血单个核细胞中NF-κB p56 mRNA、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表达量与蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05);感染组、对照组Ⅲ期患者NF-κB p56、NLRP3、Caspase-1蛋白表达量均高于对照组Ⅰ~Ⅱ期,蛋白表达量随着病理分期增加而上升(P<0.05).结论Hp感染能促进胃癌患者NF-κB/NLRP3信号通路的活化程度及IL-1β、IL-18等炎性因子的释放,与胃癌的发生密切相关.

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)介导庆大霉素所致大鼠急性肾损伤

目的探讨抗炎细胞因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在庆大霉素所致急性肾损伤(AKI)中的作用。方法SD大鼠分为5组,对照组、模型组和3个实验组。模型组和实验组皮下注射庆大霉素400 mg/(kg·d),连续注射2 d,建立庆大霉素中毒性AKI动物模型;3个实验组大鼠在注射庆大霉素前2 d,分别给予(0.5、5、50)mg/kg的CTRP6腺病毒表达载体。苦味酸比色法检测肌酐(Cr)含量,紫外分光光度法检测血清尿素氮(BUN)含量,ELISA检测血清CTRP6的水平以及肾组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测肾脏组织中CTRP6、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和caspase-1的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠AKI指标血清BUN和Cr水平较对照组显著增高,炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌量以及NLRP3和caspase-1蛋白表达水平也显著增加。与模型组相比,实验组大鼠血清BUN和Cr水平降低,IL-1β和TNF-α的分泌减少,NLRP3和caspase-1的表达水平下降。随着注射CTRP6腺病毒表达载体注射剂量的增加,抑制效果逐渐增强。结论 CTRP6以剂量依赖的方式减弱庆大霉素所致的大鼠急性肾功能损伤。

NASH患者外周血单个核细胞TXNIP/NLRP3水平变化及其临床意义探讨

目的探讨非酒精性脂肪性肝炎(NASH)患者外周血单个核细胞(PBMCs)硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)水平变化及其临床意义。方法2019年1月~2021年1月我院收治的150例NASH患者和同期体检的单纯性脂肪肝患者45例,取外周血分离PBMCs,并检测TXNIP/NLRP3 mRNA。对NASH患者行两次肝穿刺活检,将肝组织病变程度分为轻度、中度和重度及进展和无进展组。结果NASH患者血清ALT和AST水平分别为(72.2±6.9)U/L和(61.8±5.1)U/L,显著高于单纯性脂肪肝组【分别为(33.4±4.0)U/L和(31.3±3.1)U/L,P<0.05】;NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(1.9±0.1)、(1.5±0.1)和(1.3±0.1),显著高于单纯性脂肪肝组【分别为(0.7±0.1)、(0.6±0.1)和(1.1±0.1),P<0.05】;33例重度NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(2.4±0.2)、(1.9±0.2)和(1.6±0.1),显著高于49例轻度组【分别为(1.5±0.1)、(1.2±0.1)和(1.0±0.1),P<0.05】或68例中度组【分别为(2.0±0.2)、(1.5±0.1)和(1.4±0.1),P<0.05】;31例进展期NASH组PBMCs TXNIP mRNA、NLRP3 mRNA和TXNIP/NLRP3比值分别为(2.1±0.2)、(1.7±0.2)和(1.5±0.1),显著高于119例无进展组【分别为(1.8±0.1)、(1.4±0.1)和(1.2±0.1),P<0.05】。结论NASH患者PBMCs TXNIP/NLRP3基因水平显著升高,与肝功能损害程度明显存在某种关系。积极监测患者PBMCs这些基因的动态变化可能对评估病情和疾病转归有重要的意义,值得深入研究。

绿原酸抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤研究

目的:探究绿原酸(CGA)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞神经炎症损伤及核因子κB(NF⁃κB)/Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎性体通路的影响。方法:培养小胶质细胞BV2,3⁃(4,5⁃二甲基噻唑⁃2)⁃2,5⁃二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度(0,1,2,4,8 mmol·L^(-1))CGA对BV2细胞活力的影响;再次培养BV2细胞,依次分为对照(Control)组、LPS组、脂多糖和药物溶剂对照[LPS+二甲亚砜(DMSO)]、脂多糖和阳性药物对照(LPS+Positive)组以及脂多糖和绿原酸处理(LPS+CGA)组。免疫荧光法检测肿瘤坏死因子α(TNF⁃α)和白细胞介素(IL)⁃1β表达情况;ELISA法检测TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃10、IL⁃12和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量;免疫印迹分析NF⁃κB/NLRP3炎性体通路和凋亡相关蛋白水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与CGA 0 mmol·L^(-1)比较,CGA 1,2,4 mmol·L^(-1)对BV2细胞增殖活力的影响无统计学意义(P>0.05),CGA 8 mmol·L^(-1)显著降低BV2细胞增殖活力(P<0.05)。LPS诱导后细胞凋亡率升高,细胞上清液中TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃12和iNOS分泌量增多,IL⁃10分泌量减少,细胞中NF⁃κB p65、磷酸化NF⁃κB抑制蛋白(p⁃IκBα)、NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase⁃1)和B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)相关X蛋白(Bax)蛋白水平上调,细胞中Bcl⁃2蛋白水平下调(P<0.05)。添加CGA可明显改善LPS对BV2细胞的影响(P<0.05)。结论:CGA通过抑制NF⁃κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导的BV2细胞神经炎症损伤。

胰岛素处理促进糖尿病大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)表达并抑制炎症反应

目的研究胰岛素控制糖尿病(DM)大鼠血糖后,DM大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白2(ASC-2)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及炎性介质和相关纤维化指标的表达情况。方法SD大鼠随机分为正常对照组、DM组及胰岛素处理组。链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,每组8只,DM成模4周后,胰岛素处理组予以皮下注射胰岛素[8 U/(kg·次)],每天3次,连续注射6周后处死大鼠。免疫组织化学染色检测肾皮质BAMBI、NLRP3、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达,Western blot法检测肾皮质BAMBI、NLRP3、ASC-2、caspase-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)蛋白的表达,实时定量PCR检测肾皮质中BAMBI、NLRP3的mRNA水平,ELISA检测肾皮质中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的水平。采用Spearman秩相关检验对BAMBI和NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果与正常对照组相比,DM组肾皮质NLRP3的mRNA和蛋白水平及ASC-2、caspase-1的蛋白水平升高,α-SMA、FN、Col4蛋白表达也升高,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达降低,胰岛素处理组NLRP3的蛋白和mRNA水平及ASC-2、caspase-1的蛋白水平低于DM组,α-SMA、FN、Col4蛋白表达也低于DM组,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达高于DM组;胰岛素处理组IL-1β、IL-18的水平较DM组降低,相关性分析显示在DM组以及胰岛素处理组中BAMBI和NLRP3的表达呈负相关。结论胰岛素处理可恢复DM大鼠肾皮质中BAMBI的表达,进而抑制NLRP3炎性体激活,减轻DM大鼠肾脏的炎症反应,阻止或延缓糖尿病肾病的病程进展。

鼠尾草酸基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路对脓毒血症所致急性肾损伤大鼠肾脏及血管内皮的保护作用

目的 探讨鼠尾草酸对脓毒血症所致急性肾损伤(AKI)大鼠的肾脏和血管内皮的保护作用,并探讨其机制。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、模型组、鼠尾草酸低剂量组(50 mg/kg)、鼠尾草酸中剂量组(100 mg/kg)和鼠尾草酸高剂量组(200 mg/kg),每组10只。除健康对照组外,给予其余4组采用盲肠结扎穿刺手术构建脓毒性急性肾损伤大鼠模型。术后3 d,给予鼠尾草酸低、中、高剂量组分别灌胃50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg鼠尾草酸,给予健康对照组和模型组等量生理盐水灌胃,均干预4周。采用HE染色法观察各组大鼠肾脏组织的病理学变化;比较各组大鼠血清肌酐和尿素氮水平,以及肾脏组织中核因子κB(NF-κB)、 NF-κB抑制蛋白(IκB)α、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、血管性血友病因子(vWF)蛋白表达量。结果 与健康对照组相比,模型组的肾脏组织病理损伤评分,血清肌酐和尿素氮水平,以及肾组织中vWF、NF-κB、TLR4、NLRP3蛋白表达量均升高,而肾组织中IκBα蛋白表达量降低(均P<0.05)。与模型组比较,鼠尾草酸低、中、剂量组的肾脏组织病理损伤评分,血清肌酐和尿素氮水平,以及肾组织中vWF、NF-κB、TLR4、NLRP3蛋白表达量均降低,而肾组织中IκBα蛋白表达量均升高(均P<0.05)。在鼠尾草酸干预组中,肾脏组织病理损伤评分与血清肌酐和尿素氮水平的改善程度与鼠尾草酸浓度呈剂量依赖性(均P<0.05)。结论 鼠尾草酸对脓毒血症所致AKI模型大鼠具有较好的肾脏保护作用,其主要作用机制可能与改善血管内皮细胞损伤,抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路有关。

miR-21通过抑制A20促进小鼠RAW264.7细胞NF-κB和NLRP3的表达

目的探讨调控微小RNA21(miR-21)表达对脂多糖(LPS)刺激下RAW264.7细胞中核因子κB(NF-κB)及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的影响及机制。方法RAW264.7细胞给予100 ng/mL LPS刺激24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平;转染miR-21抑制物或模拟物调节RAW264.7细胞miR-21的表达水平,并给予LPS刺激,实时定量PCR检测其对白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β的mRNA表达的影响,Western blot法检测对NF-κB、NLRP3蛋白及NF-κB抑制分子锌指蛋白A20表达的影响。结果LPS刺激RAW264.7细胞后,miR-21表达明显升高。上调miR-21表达后,IL-6、TNF-α、IL-1β、NF-κB、NLRP3表达均上升,下调miR-21表达后,IL-6、TNF-α、IL-1β、NF-κB、NLRP3表达均下调。miR-21靶向抑制A20表达。结论miR-21促进RAW264.7细胞NF-κB、NLRP3表达,其机制可能与靶向抑制A20有关。