核因子κB激活蛋白与疾病关系的研究进展

NKAP是一种高度保守的47kD蛋白质,在转录抑制、T细胞发育、成熟和功能获得、造血干细胞的维持和存活以及RNA剪接中发挥重要作用。近年来,对NKAP与疾病发生发展关系的研究越来越多,诸如肺炎、肺癌、乳腺癌、肝细胞癌、结肠癌、肾细胞癌等。多数研究结果表明NKAP作为一个癌基因在肿瘤疾病中发挥作用,其对细胞的增殖、侵袭、迁移有促进作用。但目前对NKAP在疾病中的研究仍较为局限。本文主要就近年来NKAP的研究情况予以综述。

针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB/激活蛋白-1信号通路的影响

目的探讨针刺对脑心综合征大鼠脑组织细胞凋亡、炎症因子及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的影响。方法将36只SD大鼠随机分为针刺组、模型组和对照组,各12只。采用胶原酶加肝素联合注射大鼠尾状核制备脑心综合征大鼠模型,对照组给予等剂量生理盐水向大鼠尾状核注入,手术操作过程同模型组。模型组和假手术组均不予针刺;针刺组选心俞穴、内关穴、风府穴和水沟穴,每日针刺1次,连续3天。采用原位末端凋亡(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法测定脑组织细胞凋亡情况;神经功能采用Zea-Longa法评估;运用酶联免疫法测定白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平;采用Western Blot法测定MAPK、NF-κB、AP-1蛋白表达。结果模型组和针刺组大鼠脑组织细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠脑组织AI低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠神经行为评分高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠神经行为评分低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值高于假手术组(P<0.05);针刺组大鼠MAPK蛋白灰度值、NF-κB蛋白灰度值和AP-1蛋白灰度值低于模型组(P<0.05)。结论脑心综合征大鼠采用针刺可减轻大鼠脑组织细胞凋亡,减轻大鼠炎症因子,且可下调MAPK/NF-κB/AP-1信号通路表达。

核因子κB激活蛋白和p19Ink4d在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞凋亡中作用的研究

目的探讨核因子κB激活蛋白(NKAP)和p19^(Ink4d)表达变化在DM大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法16只SD大鼠随机分为正常对照(NC)组和DM组,每组各8只。DM组尾静脉注射STZ建立DM动物模型。检测生化指标,观察肾组织病理改变及NKAP表达部位;Western blot观察NKAP、p19^(Ink4d)、Bcl‐2相关X蛋白(Bax)及B淋巴细胞瘤2(Bcl‐2)蛋白表达。Spearman相关分析NKAP、p19^(Ink4d)与Bax、Bcl‐2的相关性。结果与NC组比较,DM组血糖、24 h尿总蛋白浓度、血肌酐升高(P<0.01),肾小球及肾小管间质纤维化病变明显。NKAP主要在肾小管上皮细胞质中表达。与NC组比较,DM组NKAP、Bax升高,p19^(Ink4d)、Bcl‐2降低。Spearman相关分析显示,NKAP与Bax呈正相关(P<0.01),与Bcl‐2呈负相关(P<0.05);p19^(Ink4d)与Bcl‐2呈正相关(P<0.01),与Bax呈负相关(P<0.01)。结论NKAP表达上调和p19^(Ink4d)表达下调可能加速DM大鼠肾小管上皮细胞凋亡。

重度烧伤患者早期血清护骨因子/核因子κB受体激活蛋白配体和钙磷相关指标的变化

目的了解重度烧伤患者早期血清护骨因子/核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和钙磷相关指标的变化。方法将2017年6月-2018年12月武汉大学同仁医院暨武汉市第三医院收治的符合入选标准的30例伤后8 h内入院的重度烧伤患者纳入重度烧伤组[男24例、女6例,年龄(38±13)岁],同期招募该单位体检中心体检结果正常的10名健康志愿者纳入健康对照组[男7名、女3名,年龄(37±8)岁],进行前瞻性对照研究。重度烧伤组患者于伤后1、7、14、21、28 d各抽取5 mL空腹静脉血,健康对照组志愿者取5 mL空腹静脉血,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中护骨因子、RANKL、25羟维生素D及甲状旁腺激素(PTH)水平并计算RANKL/护骨因子比值,分别采用溴甲酚绿法、甲基百里酚蓝比色法和磷钼酸法测定血清白蛋白、血钙和血磷水平。对数据行Fisher确切概率法检验、重复测量方差分析、独立样本t检验、Mann-Whitney U检验以及Bonferroni校正。结果(1)重度烧伤组患者伤后1、7、14、21、28 d血清护骨因子水平分别为155.11(102.91,187.02)、170.07(84.60,196.86)、174.95(59.09,208.35)、190.01(47.08,214.52)、188.85(58.73,223.13)pg/mL,均明显高于健康对照组志愿者的33.34(28.59,45.68)pg/mL,Z=-3.436、-4.311、-3.248、-2.811、-4.217,P<0.01;血清RANKL水平分别为(1869±791)、(1746±857)、(1781±713)、(2015±825)、(2272±583)pg/mL,均明显高于健康对照组志愿者的(49±16)pg/mL,t=12.600、10.844、13.294、13.041、20.880,P<0.01;RANKL/护骨因子比值分别为12.23(8.10,24.73)、11.40(8.25,16.96)、11.15(6.91,38.32)、12.98(9.22,49.68)、13.91(10.29,40.68),均明显高于健康对照组志愿者的1.17(0.91,1.74),Z=-4.560、-4.529、-4.529、-4.560、-4.623,P<0.01。(2)重度烧伤组患者伤后1 d血清25羟维生素D水平明显低于健康对照组志愿者(Z=-2.749,P<0.01)。与健康对照组志愿者比较,重度烧伤组患者伤后1、7、14、21、28 d血清白蛋白水平明显降低(t=-4.374、-7.689、-8.257、-7.651、-6.259,P<0.01),血清PTH水平明显升高(Z=-4.685、-4.685、-4.685、-4.654,-4.685,P<0.01),血磷水平无明显变化。重度烧伤组患者伤后1、7、14、21 d血钙水平明显低于健康对照组志愿者(Z=-2.375、-3.455、-2.442、-2.016,P<0.05或P<0.01)。结论重度烧伤患者早期血清护骨因子、RANKL、RANKL/护骨因子比值、PTH升高,25羟维生素D、白蛋白及血钙下降,这可能是导致患者骨质流失的机制。

补肾通络方抑制NF-κB/RANK/RANKL通路减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠骨破坏

目的探讨补肾通络方(BSTL)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠模型骨破坏的改善作用以及对核因子κB/核因子κB受体激活蛋白/核因子κB受体激活蛋白配体(NF-κB/RANK/RANKL)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、CIA模型组、1 mg/kg甲氨喋呤(MTX)处理组、(0.5、2)g/kgBSTL处理组,每组10只。除空白对照组外,其余大鼠采用含有卡介苗的完全Freund佐剂和牛Ⅱ型胶原蛋白(Col2)混合乳液免疫刺激,建立CIA模型。建模15 d后(第0天)根据关节炎指数(AI)评价造模是否成功。自第0天起,连续给予MTX或BSTL处理28 d,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NF-κB p65的表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗总Col2抗体及亚型(Col2-IgG、Col2-IgG1、Col2-IgG2a)水平,Western blot法检测滑膜组织RANKL、RANK、护骨因子(OPG)蛋白表达。结果与CIA模型组相比,2 g/kg BSTL处理28 d的大鼠足容积、AI值降低,血清IL-1β、IL-18、TNF-α、Col2-IgG、Col2-IgG2a以及RANK和RANKL水平均降低,OPG水平升高;大鼠滑膜组织中NF-κB p65、RANK和RANKL蛋白表达均降低,OPG蛋白表达增加。结论BSTL可通过抑制全身炎症反应,降低滑膜组织中NF-κB p65、RANK、RANKL蛋白的表达,上调OPG蛋白表达,缓解CIA模型大鼠关节炎症和肿胀。

转化生长因子β1/Smad信号通路在破骨细胞分化发育中的研究进展

破骨细胞是来源于单核造血髓系细胞的多核巨细胞,它的激活在炎症性骨破坏及骨质疏松症的发生和发展中起着十分重要的作用。破骨细胞的分化和功能受到多种细胞因子和生长因子的调节,已有研究表明,TGF-β1与其下游信号转导蛋白Smad2/3、Smad1/5可促进或抑制破骨细胞分化、发育和成熟,其机制与调节核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)/核因子κB受体激活蛋白(RANK)信号通路及其下游介质有关。本文主要针对TGF-β1/Smad信号通路在破骨细胞分化和发育中的作用进行综述。

破骨细胞生成中RANKL依赖性机制的研究进展

破骨细胞在体内执行骨吸收功能,异常分化会影响骨稳态,导致众多骨相关疾病。核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)在破骨细胞分化中具有重要意义,它是由成骨细胞和骨细胞分泌的促进破骨细胞分化的因子,尚未发现经过充分证明的、不依赖于RANKL独立驱动破骨细胞分化的分子,理解破骨细胞分化对RANKL的依赖性有助于为破骨细胞过度分化相关疾病开发更精细的治疗方案。本研究回顾文献,从RANKL对破骨细胞分化关键转录因子活化T细胞核因子1的调控和RANKL对破骨细胞分化阻遏的解除等方面讨论破骨细胞生成过程中RANKL依赖性的机制。

右美托咪定对结肠癌细胞p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨右美托咪定(Dex)对结肠癌细胞增殖、凋亡及p38有丝分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将人结肠癌细胞Caco2随机分为对照组(常规培养)、Dex低剂量组(1μmol/L Dex培养液)、Dex高剂量组(3μmol/L Dex培养液)、激活剂组(5μg/mL p38MAPK/NF-κB信号激活剂LPS)、Dex高剂量+激活剂组(3μmol/L Dex培养液与5μg/mL LPS)。CCK-8法测定Caco2细胞增殖率,流式细胞仪检测Caco2细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法测定Caco2细胞中增殖相关蛋白(p53、ki-67),凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及p38MAPK/NF-κB通路蛋白的表达情况。结果与对照组相比,Dex低、高剂量组Caco2细胞凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2水平显著降低(P<0.05),激活剂组Caco2凋亡率、Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。与Dex高剂量组相比,Dex低剂量组、Dex高剂量+激活剂组Caco2细胞凋亡率、Bax水平及Bax/Bcl-2均显著降低(P<0.05),增殖率、p-p38MAPK、p-NF-κB、p53、ki-67、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论Dex可显著抑制人CRC细胞Caco2的增殖,并促进其凋亡,可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。

白细胞介素17通过激活p38MAPK信号通路调控人牙周膜成纤维细胞RANKL和OPG的表达

目的使用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂确定白细胞介素17(IL-17)是否通过该通路参与调控人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)和护骨因子(OPG)的表达。方法组织块法分离培养HPDLF,20 ng/mL IL-17分别刺激0、20、40、60、80 min,Western blot法检测HPDLF磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。HPDLF随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、p38MAPK抑制剂SB203580组、IL-17组、IL-17联合DMSO组、IL-17联合SB203580组。IL-17及联合处理组,分别添加10μmol/L SB203580、20 ng/mL IL-17。实时定量PCR检测HPDLF的RANKL、OPG mRNA水平,Western blot法检测RANKL蛋白水平、ELISA检测OPG蛋白含量。结果p-p38MAPK蛋白水平在IL-17刺激后的0~60 min内随时间增加,在60 min时达到最高,在80 min时下降。IL-17可上调HPDLF中RANKL mRNA及蛋白表达,下调OPG mRNA和蛋白表达。较单纯使用IL-17刺激,添加SB203580通路抑制剂后,RANKL mRNA和蛋白水平均降低,OPG的mRNA水平升高。结论IL-17通过激活p38MAPK信号通路,上调HPDLF的RANKL表达,抑制OPG mRNA表达。

三七总皂甙对骨髓基质细胞成骨分化及成骨作用的调节

目的探讨三七总皂甙对骨髓基质细胞体外成骨分化及成骨作用的影响。方法分离、纯化大鼠骨髓基质细胞（bone marrow strowal cells,BMSCs）,采用常规培养液、成骨诱导液及含100 mg/L PNS的成骨诱导液培养,对各组细胞进行形态学观察,采用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法及ELISA法观察各组细胞增殖、ALP活性、矿化结节的形成及RANKL的表达。结果骨诱导组、PNS组较培养液组细胞增殖明显（P〈0.05）,而PNS组高于骨诱导组（P〈0.05）;骨诱导组、PNS组ALP活性、钙结节形成高于培养液组（P〈0.01）,PNS组高于骨诱导组（P〈0.05）;骨诱导组、PNS组RANKL表达低于培养液组（P〈0.05）,PNS组低于骨诱导组（P〈0.05）。结论BMSCs成骨诱导过程中,PNS可促进其成骨分化、下调其RANKL表达从而具有抑制破骨细胞生成的潜能。

类风湿性关节炎患者外周血T细胞RANKL增加且血清Dickkopf1降低

目的探讨骨代谢相关分子在类风湿性关节炎(RA)患者骨代谢异常和疾病进展过程中的作用。方法纳入RA患者66例及健康对照20例,搜集相关临床信息。利用电化学发光免疫分析法检测受试者血清中骨钙素N端中段(OC-N-MID)和1型胶原蛋白交联羧基末端肽(CTX)水平。采用液相悬浮芯片法检测Wnt抑制因子Dickkopf1(DKK1)、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)含量。利用流式细胞术检测外周血T细胞上RANKL的水平。结果与健康对照组相比,RA患者血清中OC-N-MID、CTX含量无显著性差异,RANKL水平升高,DKK1水平降低。RA患者外周血T细胞上RANKL水平增加,尤其CD3+T细胞亚群上RANKL增加显著。结论 RA患者T细胞上RANKL水平增加,血清中RANKL含量升高,DKK1水平降低。

五味子乙素调节MAPK/NF-κB/AP-1信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元损伤的影响

目的探究五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)调节丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)/核转录因子-κB(Nuclear factor-kappa beta,NF-κB)/激活蛋白-1(Activator protein-1,AP-1)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元损伤的影响。方法选用SD大鼠144只,随机分为6组(24只/组):Sham组、Model组、Sch B低剂量组(10 mg/kg Sch B)、Sch B中剂量组(20 mg/kg Sch B)、Sch B高剂量组(40 mg/kg Sch B)、激活剂组[40 mg/kg Sch B+2 mg/kg茴香霉素(Anisomycin)];采用改良线栓法致大鼠大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),建立缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)模型;对各组大鼠进行Loeffler神经学评分以评估大鼠神经功能缺损程度;氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定大鼠脑梗死面积;称重法检测大鼠脑组织含水量;苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE)观察大鼠脑组织损伤;原位末端标记染色法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)观察大鼠神经细胞凋亡情况;二氯荧光素双醋酸盐(2',7'-Dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测大鼠脑组织活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;分别使用超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)试剂盒检测脑组织SOD活性与MDA水平;western blot检测脑组织中增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、凋亡相关蛋白[BCL-2关联X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Cysteine proteinase3,Caspase-3)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3Ⅱ)、卷曲螺旋肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Coiled-coil myosin-like BCL2 interacting protein,Beclin-1)]和MAPK/NF-κB/AP-1通路蛋白的表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠脑组织中SOD活性减弱、神经学评分、PCNA蛋白表达水平降低,病理损伤加重、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1、磷酸化-P38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 Mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、磷酸化-核转录因子-κB p65(p-Nuclear transcription factor kappa-B p65,p-NF-κB p65)/核转录因子-κB p65(Nuclear transcription factor kappa-B p65,NF-κB p65)、AP-1蛋白表达水平升高(P<0.05);与Model组比较,Sch B低、中、高剂量组大鼠SOD活性增强、神经学评分、PCNA蛋白表达水平升高,病理损伤减轻、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-p38MAPK/p38MAPK,p-NF-κB p65/NF-κB p65,AP-1蛋白表达水平降低(P<0.05);与Sch B高剂量组比较,激活剂组大鼠脑组织中SOD活性减弱、神经学评分、PCNA蛋白表达水平降低,病理损伤加重、脑梗死面积百分比、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、ROS,MDA水平、Bax,Caspase-3,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ,Beclin-1,p-p38MAPK/p38MAPK,p-NF-κB p65/NF-κB p65,AP-1蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论Sch B通过抑制MAPK/NF-κB/AP-1信号通路,从而减轻缺血性脑卒中大鼠的神经元损伤。

利伐沙班对脑缺血再灌注大鼠内皮功能的影响

目的 探究利伐沙班对脑缺血再灌注大鼠内皮功能的影响。方法 将40只大鼠随机分为假手术组、模型组和低、高剂量实验组,每组10只。假手术组仅暴露血管,不作插线处理;其余3组用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型。低、高剂量实验组分别于手术前7 d灌胃给予10、30 mg·kg^(-1)利伐沙班,每天1次,第7天给药1 h后建立脑缺血再灌注模型,24 h后再分别灌胃给予10、30 mg·kg^(-1)利伐沙班,每天1次,持续3 d。模型组和假手术组均在同一时间灌胃给予等量0.9%NaCl。用酶联免疫吸附试验法检测大鼠脑组织中内皮素-1(ET-1)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,用蛋白质印迹法检测大鼠脑组织中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)和核转录因子κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达水平。结果 低、高剂量实验组和模型组、假手术组的ET-1水平分别为(197.53±29.63)、(155.66±23.35)、(270.16±40.53)和(123.57±18.53)ng·L^(-1),IL-8水平分别为(1.51±0.23)、(0.98±0.15)、(1.96±0.29)和(0.53±0.08)ng·L^(-1),TNF-α水平分别为(0.81±0.13)、(0.57±0.09)、(1.06±0.16)和(0.25±0.04)ng·L^(-1),p-p38MAPK/p38MAPK分别为0.75±0.08、0.57±0.07、0.92±0.09和0.45±0.06,NF-κB p65蛋白相对表达水平分别为0.87±0.09、0.73±0.08、0.99±0.09和0.61±0.06。模型组的上述指标与低、高剂量实验组和假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 利伐沙班可能通过抑制p38MAPK/NF-κB通路活化,进而抑制炎症因子释放,从而对脑缺血再灌注大鼠内皮功能发挥保护作用。

益肾蠲痹法含药血清对大鼠成骨和破骨细胞OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

目的探讨益肾蠲痹法含药血清对骨代谢信号通路的影响。方法正常SD大鼠随机分为对照组和益肾蠲痹组,分别经生理盐水和益肾蠲痹汤灌胃给药,获取含药血清;分离大鼠成骨细胞和破骨细胞,利用碱性磷酸酶和Van kossa染色鉴定成骨细胞,TRAP和甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞;将成骨和破骨细胞各分为4组:对照组、益肾蠲痹法含药血清低、中和高浓度组;通过免疫印迹检测成骨细胞骨保护蛋白(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和破骨细胞核因子κB受体活化因子(RANK)的表达。结果低、中、高浓度含药血清诱导成骨细胞OPG的表达分别为对照组的97%(P=0.710)、122%(P=0.005)和155%(P<0.001),RANKL表达分别为对照组的81%(P<0.001)、63%(P<0.001)和53%(P<0.001),表明OPG和RANKL表达与含药血清浓度分别呈正、负相关;含药血清使破骨细胞RANK表达分别调节对照组的75%(P<0.001)、50%(P<0.001)和46%(P<0.001),表明RANK表达与含药血清剂量呈负相关。结论益肾蠲痹法含药血清通过调节OPG/RANKL/RANK信号轴可能在抗骨丢失过程中发挥作用。

严重烧伤大鼠骨形成与骨吸收相关指标的变化

目的研究严重烧伤大鼠骨形成及骨吸收相关指标的变化。方法采用实验研究方法。将30只6~8周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为假伤组、12%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组,每组10只。于各组大鼠背部进行相应处理,之后仅烧伤大鼠按Parkland公式经腹腔注射补液,创面外涂20 g/L碘伏,直至创面愈合。伤后28 d,取各组大鼠胫骨组织,分别行Masson、抗酒石酸酸性磷酸酶染色,观察新生骨组织、破骨细胞数量;取各组大鼠腹主动脉血制备血清,分别采用甲基百里酚蓝比色法、磷钼酸法测定骨代谢指标血清钙离子、磷离子浓度,采用酶联免疫吸附测定法检测血清中骨形成标志物Ⅰ型前胶原氨基端前肽(P1NP)和骨吸收标志物β-Ⅰ型胶原羧基端肽(β-CTX)水平;取各组大鼠第1腰椎组织,采用实时荧光定量反转录PCR法检测护骨因子、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)、活化T细胞核因子1(NFATC1)、c-Fos、c-Src的mRNA表达水平。数据处理采用单因素方差分析、Bonferroni法、Welch检验、Games-Howell检验、Kruskal-Wallis检验、Mann-Whitney U检验及Bonferroni校正。结果伤后28 d,与假伤组比较,2个烧伤组大鼠胫骨组织中新生骨组织生成均减少,烧伤面积越大减少越明显;2个烧伤组大鼠胫骨组织中破骨细胞数量相近,均较假伤组明显增多。伤后28 d,3组大鼠血清钙离子浓度、血清中β-CTX水平相近(P>0.05);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清磷离子浓度明显高于12%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.05),且2个烧伤组大鼠血清磷离子浓度均显著高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠血清中P1NP水平明显低于假伤组(P<0.01)。伤后28 d,假伤组、12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中护骨因子mRNA表达水平分别为1.01±0.20、1.71±0.83、2.24±0.51,其中24%TBSAⅢ度烧伤组明显高于假伤组(P<0.01);24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中RANKL mRNA表达水平为1.31±0.17,明显高于假伤组的1.00±0.14与12%TBSAⅢ度烧伤组的0.97±0.10(P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组、24%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中TRAF-6、NFATC1(Z=3.141、3.782)、c-Src mRNA表达水平及12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos mRNA表达水平均明显高于假伤组(P<0.05或P<0.01);12%TBSAⅢ度烧伤组大鼠第1腰椎组织中c-Fos、c-Src mRNA表达水平均明显高于24%TBSAⅢ度烧伤组(P<0.01)。结论严重烧伤可引起大鼠新生骨组织生成减少及破骨细胞数量增多,血清磷离子浓度升高与血清中P1NP水平下降,骨组织中护骨因子、RANKL、TRAF-6、NFATC1、c-Fos、c-Src呈升高趋势,且NFATC1、c-Fos、c-Src随烧伤总面积增加呈下降趋势。