小干扰RNA抑制核因子-κB增强^131I治疗甲状腺癌疗效的研究

目的探讨小干扰RNA（siRNA）抑制核因子-κB（NF—KB）对^131I致DTC细胞凋亡能否产生协同作用。方法2×10^4 MBq／L^131I作用人甲状腺乳头状癌细胞株KTC-124h后做DNA结合实验，48h后做细胞存活分析。Westernblot鉴定^131I作用6h后细胞NF—KBp65的变化，24h后凋亡抑制因子[X-染色体相关凋亡抑制蛋白（XIAP）、细胞凋亡抑制因子1（eIAPl）、B细胞淋巴瘤因子大亚基（Bel—xL）]、凋亡关键因子[半胱氨酸蛋白酶（caspase3）和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）]的变化。p65和凋亡抑制因子的Westernblot检测分4组：未转染（A）组、未转染＋^131I（B）组、转染对照siRNA＋^131I（c）组和转染p65siRNA＋^131I（D）组；其余实验分为6组：未转染（1）组、转染对照siRNA（2）组、转染p65siRNA（3）组、未转染＋^131I（4）组、转染对照siRNA＋^131I（5）组和转染p65siRNA＋^131I（6）组。多组间均数比较采用单因素方差分析，均数两两比较采用q检验。结果1至6组DNA结合率分别为（100．00±11．65）％、（96．00±17．98）％、（9．28-I-5．01）％、（322．72±50．81）％、（311．36±44．81）％和（36．96±15．66）％，差异有统计学意义（F=137．74，P〈0．01）；^131I作用后KTC-1细胞NF—KB活性均增强（q4：1自=10．90，q5：2g=11．38，均P〈0．01）；p65siRNA可抑制NF—KB功能（q㈦目=18．25，q46目=13．71，均P〈0．01）。6组细胞存活率分别为（100．00±11．65）％、（96．32±9．44）％、（70．88±7．41）％、（64．16±9．50）％、（62．24±9．37）％和（28．64±6．74）％（F=52．76，P〈0．01）；3、4和6组比，q=10．76和7．79，均P〈0．Ol。Westernblot结果显示A、B、C和D组p65相对表达水平分别为（56．60±7．37）％、（111．07±13．31）％、（113．16±15．04）％和（12．46±2．74）％，差异有统计学意义（F=60．17，P〈0．01）；^131I作用后p65浓度增高（qB：A组=6．20，qC：A组=5．85，均P〈0．01）；p65siRNA可抑制其浓度增高（q帅自=12．57，qC：D组=11．41，均P〈0．01）。4组XIAP、cIAPl和Bel—xL分别为（17．59±1．96）％、（16．45±1．85）％和（19．92-4-2．22）％，（98．37±17．92）％、（109．81±19．16）％和（95．59±22．20）％，（98．43±18．71）％、（98．86±15．88）％和（100．99±21．70）％，（7．00±0．95）％、（5．86±0．35）％和（9．52±0．90）％，差异均有统计学意义（F=44．22、56．51和29．11，均P〈0．01）；^131I作用后三者表达增加（qB：A组=Ⅷ=7．76、8．40和5．88，均P〈0．01）；055siRNA可抑制三者表达（qBD自=8．82、9．40和6．71，均P〈0．01）。6组caspase3亚基p19和p17、PARP活性蛋白p116和失活产物p89差异均有统计学意义（F=39．03、48．45、32．56和52．20，均P〈0．01）；3、4和6组比q=3．18～9．98，均P〈0．05。结论^131I通过活化NF—KB导致甲状腺癌细胞内凋亡抑制因子表达升高，p65siRNA可抑制这种变化；联合使用p65siRNA对^131I致DTC细胞凋亡产生协同效应。