STAT1对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的机制研究

目的探讨信号转导和转录激活因子1(STAT1)对肺结核大鼠巨噬细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法将40只大鼠按照随机数字表达分为4组,即Control组、PTB组、STAT1-ASO组和STAT1-ASO+Anisomycin组,每组10只。计数肺组织结核分枝杆菌菌落;收集支气管肺泡巨噬细胞收集,流式细胞仪检测肺组织巨噬细胞细胞凋亡;HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平比较;检测肺组织中SOD、MDA水平;蛋白质印迹法检测创面组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、p65 NF-κB、p-p65 NF-κB蛋白表达。结果与Control组比较,PTB组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(9.12±0.81)、巨噬细胞凋亡率[(51.27±4.16)%]、血清中IL-6(215.42±15.33)、IL-1β(73.62±6.04)、TNF-α(81.24±5.79)水平、肺组织中MDA含量(9.54±1.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.92±0.12)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.87±0.10)均明显增加,肺组织中SOD活性(31.27±2.85)明显降低(P<0.05);与PTB组比较,STAT1-ASO组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(3.87±0.40)、巨噬细胞凋亡率(8.91±0.43)、血清中IL-6(40.91±3.46)、IL-1β(21.54±1.79)、TNF-α水平(20.35±1.87)、肺组织中MDA含量(2.69±0.72)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.45±0.07)、p-p65 NF-κB/p65 NF-κB比值(0.39±0.06)明显减少,肺组织中SOD活性(72.15±6.81)明显升高(P<0.05);与STAT1-ASO组比较,STAT1-ASO+Anisomycin组大鼠肺组织结核分枝杆菌菌落数(8.75±0.74)、巨噬细胞凋亡率(42.86±3.75)、血清中IL-6(192.11±13.61)、IL-1β(67.33±5.24)、TNF-α水平(75.26±5.11)、肺组织中MDA含量(9.01±1.65)及p-p38 MAPK/p38 MAPK(0.87±0.10)、p-p65 NF-κB/p65NF-κB比值(0.80±0.09)均明显增加,肺组织中SOD活性(36.49±3.01)明显降低(P<0.05)。结论抑制STAT1活化可抑制肺结核大鼠巨噬细胞凋亡,其作用机制可能和抑制MAPK/NF-κB信号通路活化有关。

血小板活化因子对气道平滑肌细胞的增殖及核因子NF-κB表达的影响

目的 :观察血小板活化因子 (PAF)对离体培养的大鼠气道平滑肌细胞 (ASMCs)的增殖及其核转录因子NF κB蛋白表达的影响 .方法 :MTT法及流式细胞仪检测细胞周期 ,EMSA法检测PAF刺激后ASMCs中NF κB的活性改变 ;观察N 乙酰半胱氨酸 (NAC)干预对PAF作用的影响 .结果 :PAF在 1× 1 0 -6～ 1× 1 0 -9mol/L范围内均能促进ASMCs的增殖 (P <0 .0 1 ) ,且 1× 1 0 -7mol/L时增殖作用最强 ,ASMCs细胞增殖指数明显增高 (P <0 .0 5 ) ,同时ASMCs细胞核内NF κB活性明显增加 (P <0 .0 1 ) .预先用 2 0mmol/LNAC干预后 ,PAF的促增殖作用及核内NF κB活性均被明显抑制 ,但该抑制作用呈不完全抑制 (P <0 .0 5 ) .结论 :PAF能促进ASMCs的增殖 ,这一作用部分是通过激活NF κB通路而发挥的 .

雷公藤内酯醇对Aβ1-40诱导的小胶质细胞核因子-kappa B活化的影响

阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是以进行认知障碍和记忆能力损害为主要临床表现的大脑退变性疾病，多数学者认为其病因与β-淀粉样蛋白（beta-amyloid protein，Aβ）沉积激活小胶质细胞引起的炎症反应和神经毒性作用有关，其中核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）在这一过程起关键作用。雷公藤内酯醇是雷公藤中主要有效成分之一，具有显著的抗炎免疫调节作用，可通过抑制免疫细胞中的NF-κB活性发挥其药理作用。故本实验拟用Aβ1-40诱导体外培养的原代小胶质细胞，建立AD体外细胞模型，并给予不同剂量雷公藤内酯醇进行干预，

白鹤冲剂对肿瘤坏死因子-α刺激的血管内皮细胞核因子-kB激活的影响

目的:研究白鹤冲剂对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中核因子-κB(NF-κB)活化、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,以探讨白鹤冲剂治疗血管炎的机制。方法:以细胞 ELISA 法、间接免疫荧光法分别观察白鹤冲剂对 HUVEC 中 NF-κB活化以及 ICAM-1表达的影响。结果:白鹤冲剂能抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激的 HUVEC 的 NF-κB的活化及 ICAM-1表达。结论:白鹤冲剂可能通过抑制 NF-κB活化从而有效地调控与炎症过程密切相关的黏附分子的基因表达,发挥治疗血管炎的重要作用。

miR-338-5p通过靶向核因子κB1调控B细胞生物学功能

目的验证miR-338-5p对核因子κB1(NF-κB1)水平的影响,研究其对B细胞生物学功能的调控作用。方法利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p靶基因的验证;采用抗Ig M抗体和/或重组人B细胞活化因子(rh BAFF)蛋白刺激的B细胞培养体系,将miR-338-5p激动剂、miR-338-5p拮抗剂、NF-κB1小干扰RNA(si NF-κB1)及其对应的阴性对照制剂转染CD20+B淋巴细胞,利用实时定量PCR法检测各转染组NF-κB1 mRNA水平,Western blot法检测NF-κB1蛋白(p105、p50)的水平,ELISA检测培养上清中Ig G含量。结果靶基因验证实验显示,miR-338-5p模拟物与报告载体共转染组的hRluc/h Luc萤光素酶活力比值显著升高;体外培养实验结果显示,在抗Ig M抗体与rh BAFF蛋白共培养体系,miR-338-5p激动剂转染组NF-κB1 mRNA、p105蛋白、p50蛋白、Ig G水平均显著升高,si NF-κB1的作用与miR-338-5p激动剂相反;miR-338-5p拮抗剂转染组NF-κB1 mRNA、Ig G水平均显著降低;相关性分析结果表明,NF-κB1 mRNA水平与Ig G水平呈显著正相关。结论 miR-338-5p靶向正调控NF-κB1、间接作用于BAFF信号参与调控B细胞生物学功能。

间歇力引起人体牙周膜细胞核因子κB受体活化因子配体高表达

正畸治疗中，间歇力因提供了牙周组织重建的调整时间而有利于牙齿的移动。为了明确间断力的作用机制，本研究观察了牙周膜细胞在间歇力和持续力作用下核因子κB受体活化因子配体（receptor activatator of NF-κB ligand，RANKD、骨保护因子和IL-1β mRNA的表达，并通过IL-1β信号传导途径研究了压力大小与RANKL表达之间的联系。

NF-κB亚单位p50/p65激活促进肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药

目的探究NF-κB经典通路激活与人肺腺癌H1650细胞吉非替尼耐药的内在联系。方法选择肺腺癌HCC827和H1650亲代细胞株,吉非替尼连续处理60 d,检测细胞株生长情况和各细胞株595nm吸光度,确定各细胞株细胞存活率和H1650亲代细胞被诱导成H1650耐药细胞株。Western blot检测各细胞株P-IκBα、NF-κB P-p50和P-p65表达量,Image J灰度仪计算出胞浆和胞核P-p50和P-p65与内参蛋白灰度比值,比较吉非替尼和吉非替尼加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合用药状态下,各细胞株细胞存活率和P-IκB、P-p50和P-p65的表达。结果在无吉非替尼和吉非替尼加PDTC药物干预下,H1650耐药细胞PIκBα表达增加,胞浆和胞核P-p50和P-p65表达,H1650耐药细胞株>H1650亲本细胞株>吉非替尼敏感HCC827细胞株(P<0.05,P<0.01);单独使用吉非替尼干预,H1650耐药细胞株细胞抑制率较H1650亲本细胞株和HCC827细胞株降低(P<0.05,P<0.01),H1650耐药细胞株P-p50和P-p65表达较其他两类细胞株升高(P<0.05);与无吉非替尼干预比较,H1650亲代和耐药细胞P-p50和P-p65均有显著降低(P<0.05,P<0.01);吉非替尼联合PDTC干预,显示H1650亲代和耐药细胞存活率、胞浆和胞核Pp50和P-p65表达均较吉非替尼组降低(P<0.01,P<0.01)。结论 NF-κB经典传导通路激活是H1650亲代细胞残存和转化为吉非替尼耐药细胞的主要因素之一,吉非替尼联合PDTC用药可抑制P-IκBα生成和P-p50、P-p65的激活,从而降低H1650残存细胞生存率和耐药细胞的产生。

C/EBPβ促进NF-κB介导的786-O人肾癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在786-O人肾癌细胞的侵袭和迁移过程中的调控作用。方法构建C/EBPβ腺病毒过表达载体,在786-O人肾癌细胞中转染C/EBPβ腺病毒过表达载体或C/EBPβsiRNA腺病毒过表达载体后,运用细胞划痕法检测细胞迁移能力,运用TranswellTM侵袭实验检测细胞的侵袭能力,运用激光共聚焦显微镜法检测上皮间质转化(EMT)核心调控因子核因子κB(NF-κB)的核转位情况,运用Western blot法检测EMT关键标志分子上皮型钙黏素、波形蛋白和生腱蛋白的水平。结果过表达C/EBPβ促进786-O细胞的侵袭和迁移,NF-κB的核转位增加,上皮型钙黏素水平下调,波形蛋白和生腱蛋白水平增加;干扰C/EBPβ则抑制786-O细胞的侵袭和迁移,NF-κB的核转位减少,以上标志分子水平变化与过表达C/EBPβ时相反;同时干扰和过表达C/EBPβ则无明显变化。结论 C/EBPβ促进786-O人肾癌细胞的侵袭和迁移;C/EBPβ促进786-O细胞中NF-κB的核转位。

山莨菪碱联合碘解磷定对急性有机磷农药中毒患者乳酸、NF-κB及内皮功能的影响

目的观察山莨菪碱联合碘解磷定对急性有机磷农药中毒患者乳酸、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)的影响。方法选择2009年2月—2017年3月新疆医科大学第一附属医院急救·创伤中心急诊内科收治的急性有机磷农药中毒患者128例作为研究对象,随机数字表法分为对照组和观察组各64例。2组患者均给予常规治疗,对照组患者另予碘解磷定治疗,观察组另加山莨菪碱联合碘解磷定治疗。比较2组患者临床疗效,检测治疗前后血清乳酸、NF-κB、内皮功能指标及血清胆碱酯酶水平变化,比较不良反应发生率。结果观察组患者临床治疗总有效率明显高于对照组(96.88%vs.81.25%,χ^2/P=8.020/0.005)。与治疗前比较,2组患者血清NO明显升高,乳酸、NF-κB及ET-1明显降低,且观察组改善程度较对照组更显著(t/P=12.546/0.000,10.710/0.000,14.409/0.000,22.916/0.000)。治疗后,2组血清胆碱酯酶水平逐渐升高,且观察组患者在各个时间点均高于对照组(t/P=15.760/0.000,13.061/0.000,5.637/0.000)。结论山莨菪碱联合碘解磷定治疗急性有机磷农药中毒患者,可以有效降低其血清乳酸、NF-κB水平,升高胆碱酯酶水平,改善机体内皮功能,疗效显著。

经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达及凋亡的调控机制

【目的】观察益气血法经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢颗粒细胞生长分化因子9(GDF9)表达及凋亡的调控机制。【方法】制备超排卵大鼠血清(空白血清)和经后增殖方灌胃的超排卵大鼠血清(含药血清)。建立控制性超排卵(COH)大鼠模型,收集卵巢颗粒细胞。实验分为5组:空白血清组,含药血清组,含药血清+SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂]组,含药血清+PDTC[核转录因子κB(NF-κB)抑制剂]组,含药血清+SB203580+PDTC组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测p38MAPK、酪蛋白激酶2(CK2)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB、GDF9 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测GDF9蛋白表达水平,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测卵巢颗粒细胞凋亡。【结果】经后增殖方含药血清降低COH大鼠卵巢颗粒细胞的p38MAPK和NF-κB mRNA表达,升高CK2和IκBαmRNA表达,提高GDF9 mRNA和蛋白的表达水平,降低卵巢颗粒细胞的凋亡率。单独添加p38MAPK抑制剂SB203580与单独添加NF-κB抑制剂PDTC均能促进GDF9 mRNA和蛋白表达、降低卵巢颗粒细胞凋亡率。【结论】益气血法经后增殖方含药血清可促进超排卵大鼠卵巢颗粒细胞GDF9表达,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与调控p38MAPK和NF-κB双信号通路基因表达有关。

NF-κB上调VEGF表达影响胃癌预后

目的:探讨胃癌内核转录因子κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活化对血管内皮生长因子(vascularendothelialRrowthfactor,VEGF)表达的影响及对预后的影响.方法:选择胃癌根治术切除标本41例,应用免疫组织化学方法测定NK-κB,VEGF及CD34的表达,检测结果与胃癌临床病理学多参数进行经统计分析.结果:NF-κB呈活化型型表达者占受检病例的68.3%,VEGF呈强阳性表达者占受检病例的70.73%.NF-κB活化型表达组与VEGF高表达组有较高一致性(κ=0.393,P=0.012).NF-κB与VEGF同时表达组微血管密度明显较NF-κB与VEGF同时阴性组高(P=0.000),NF-κB与VEGF同时表达组生存期明显短于NF-κB与VEGF同时阴性组(P=0.035).结论:胃癌细胞通过活化NF-κB信号通道促进VEGF高表达,从而影响肿瘤内微血管密度及预后.

基于p38MAPK/NF-kB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组,剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠,造模14 d后进行旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(PMT)检测各组大鼠焦虑样行为,筛选造模成功的大鼠60只,随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(6、12、24 g·kg^(-1))和地西泮组(1 mg·kg^(-1)),每组12只,连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮,给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、钙结合蛋白(Iba-1)mRNA的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平;免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏,OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加(P<0.01),PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少(P<0.01),下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高(P<0.01),血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达显著减低(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常,OFT边缘运动距离和时间明显减少(P<0.05,P<0.01),PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加(P<0.05,P<0.01),下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平,发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。