核因子E2相关性因子2、血红加氧酶-1蛋白在6-羟基多巴胺诱导帕金森病模型大鼠脑黑质的动态表达

目的观察帕金森病(PD)模型大鼠脑黑质组织核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红加氧酶1(HO-1)蛋白的表达。方法雄性SD大鼠,随机分为假手术组和模型组,每组按时间分为术后6、24、48 h、1、2、4、8 w 7个亚组。采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,假手术组注射0.02%抗坏血酸溶液。Western印迹法检测术后各个时间点Nrf2核蛋白、HO-1蛋白动态表达。结果假手术组术后各时间点Nrf2核蛋白、HO-1蛋白低表达,各个时间点相比差异无统计学意义(P>0.05)。模型组术后各时间点相比,6 h组Nrf2核蛋白表达升高,24 h组HO-1蛋白表达升高,Nrf2核蛋白与HO-1蛋白于均术后1 w达高峰,2、4、8 w有所回落,与假手术组相应时间点比较仍表达较高(P<0.01)。结论6-OHDA造模后可以激活Nrf2核蛋白,进而上调下游靶基因HO-1蛋白的表达,体内内源性抗氧化系统被激活。

Nrf2 mRNA表达水平与2型糖尿病患者微血管病变发生风险的相关性

目的探究核因子E2相关性因子2(Nrf2) mRNA的表达水平与2型糖尿病患者微血管病变发生风险的相关性。方法选取我院2015年4月至2017年3月2型糖尿病患者188例,随访2年,根据微血管病变发生与否将其分为对照组和病变组。比较两组患者治疗前的基线资料,血糖、血脂、肾功水平、超敏C反应蛋白和Nrf2的表达情况;应用Cox回归分析2型糖尿病患者微血管病变的独立危险因素。结果本研究中,共发生微血管病变50例(26.60%),两组患者在病程、收缩压、空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、Nrf2 mRNA表达水平上存在明显差异(P<0.05)。Cox回归分析结果表明收缩压(HR=1.054,P=0.020),病程(HR=20.413,P=0.001),HbA1c(HR=3.168,P=0.001),hs-CRP(HR=3.131,P=0.020),Nrf2 mRNA表达(HR=20.413,P=0.000)是2型糖尿病微血管病变的独立危险因素,差异有统计学意义。结论 Nrf2 mRNA参与了2型糖尿病微血管病变进展的过程,Nrf2 mRNA表达水平与2型糖尿病微血管病变发生风险呈正相关。

黄芩苷减轻大鼠肠缺血再灌注损伤及对Nrf2、HO-1表达的影响

目的:研究黄芩苷对大鼠肠缺血再灌注(intestinal ischemia-reperfusion,IIR)损伤的保护作用及机制.方法:♂Wistar大鼠32只,随机分为假手术(sham-operated,SO)组、黄芩苷(baicalin,BA)组、肠缺血再灌注(IIR)组、黄芩苷+肠缺血再灌注(BA+IIR)组.BA组和BA+IIR组于造模前30 min腹腔注射黄芩苷100 mg/kg体质量,SO组和IIR组注射等量生理盐水.再灌注2 h后取材,HE染色观察小肠组织损伤程度,水溶性四唑盐1(water soluble tetrazolium s a l t 1,W S T-1)法测定血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,ELISA法检测血浆D-乳酸含量,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和Western blot法检测核因子相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达.结果:IIR组与SO组比较,小肠黏膜损伤Chiu氏评分升高(3.99±0.24 vs 0.30±0.08,P<0.01),血清S O D活性降低(100.08 U/m L±3.20 U/mL vs 136.88 U/mL±5.93 U/mL,P<0.01),MDA含量增加(3.41 nmol/mL±0.23nmol/mL vs 1.59 nmol/mL±0.25 nmol/mL,P<0.01),血浆D-乳酸含量增多(174.27 ng/mL±33.84 ng/mL vs 52.40 ng/mL±12.12 ng/mL,P<0.01),小肠组织中N r f2、H O-1表达增加(IHC:0.326±0.024 vs 0.289±0.041,0.298±0.025 vs 0.258±0.027,P<0.05;WB:1.062±0.056 vs 0.584±0.048,1.019±0.041 vs 0.592±0.037,P<0.01).BA组小肠组织Nrf2、HO-1表达比SO组显著增加(IHC:0.322±0.028vs 0.289±0.041,0.284±0.009 vs 0.258±0.027,P<0.05;WB:1.077±0.038 vs 0.584±0.048,1.027±0.042 vs 0.592±0.037,P<0.01).BA+IIR组与IIR组相比,小肠黏膜损伤Chiu氏评分降低(2.95±0.26 vs 3.99±0.24,P<0.01),血清SOD活性升高(116.11 U/mL±4.12 U/mL vs 100.08 U/mL±3.20 U/mL,P<0.01),MDA含量减少(3.09 nmol/mL±0.15 nmol/mL vs 3.41nmol/mL±0.23 nmol/mL,P<0.01),血浆D-乳酸含量减少(108.04 ng/mL±20.19 ng/mL vs174.27 ng/mL±33.84 ng/mL,P<0.01),小肠组织Nrf2、HO-1表达增加(IHC:0.371±0.024 vs0.326±0.024,0.336±0.031 vs 0.298±0.025,P<0.01;WB:1.541±0.100 vs 1.062±0.056,1.458±0.071 vs 1.019±0.041,P<0.01).结论:黄芩苷对大鼠肠缺血再灌注损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过激活核因子相关因子2-抗氧化反应元件(NF-E2-related factor 2-antioxidant response element,Nrf2-ARE)通路进而增加抗氧化酶SOD、HO-1表达实现的.

苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路的影响

[目的]探讨苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]45只雄性SD大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余35只经尾静脉注射氯化钡溶液制备慢性心律失常模型,将30只建模成功的大鼠随机分为苓桂术甘汤组、阳性对照组、模型对照组,每组各10只。苓桂术甘汤组大鼠采用苓桂术甘汤灌胃,阳性对照组采用酒石酸美托洛尔灌胃,模型对照组和正常对照组接受等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,2次/d,均干预4周。采用心电图检验大鼠造模成功情况,以酶联免疫吸附法检验大鼠血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽硫基转移酶(glutathione S-transferase,GST)含量,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化,DNA缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)与Western blot检测心肌组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,模型对照组、阳性对照组、苓桂术甘汤组GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白相对表达量较高(P<0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较高,心肌细胞凋亡率较低(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高(P<0.05)。模型对照组心肌组织水肿、充血严重,肌束紊乱,心肌细胞间隙增宽;阳性对照组、苓桂术甘汤组心肌组织水肿、肌束及心肌细胞间隙明显改善。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较高(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较低(P<0.05)。[结论]苓桂术甘汤可能通过激活Nrf2/HO-1通路,发挥对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用。

脂氧素A_4通过激活PPARγ/Nrf2/HO-1途径保护HK-2细胞缺氧/复氧损伤

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)在人肾脏近曲小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤中的保护作用及可能机制。方法:LXA4预处理HK-2细胞后进行缺氧/复氧处理,CCK-8法检测细胞活性水平,ELISA法检测细胞上清液γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、氨基葡萄糖苷酶(NAG)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞丙二醛(MDA)水平,实时定量PCR和Western blot法分别检测HK-2细胞的过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ)和血红素加氧酶-1(HO-1)的m RNA和蛋白表达的变化,利用RNA干扰技术干扰PPARγ表达后检测HO-1和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达。结果:LXA4预处理的缺氧/复氧组细胞活性和SOD活性明显升高,细胞中γ-GT、NAG、LAP和MDA水平降低,而加入HO-1抑制剂锌原卟啉(Zn PP)和转染PPARγ的si RNA后,LXA4对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用被阻断;此外,LXA4预处理的缺氧/复氧组HO-1、PPARγ和Nrf2表达均明显升高,并且LXA4预处理诱导的HO-1和Nrf2过表达能够被PPARγsi RNA所抑制。结论 :Lx A4预处理能够通过诱导HK-2细胞的HO-1高表达对抗HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制与激活PPARγ/Nrf2有关。

补中益气汤通过调节Nrf2/PPARγ/GPX4通路抑制铁死亡改善自身免疫性甲状腺炎小鼠甲状腺损伤

目的:基于核因子E2相关性因子2(Nrf2)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)/谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)通路探讨补中益气汤改善自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠铁死亡的作用机制。方法:将120只SPF级8周龄NOD.H-2h4小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组及西药组,各20只,除空白组外,采用经典的高碘水(0.05%碘化钠)喂养,8周后制成AIT模型。补中益气汤低、中、高剂量组分别予4.78、9.56、19.12 g·kg^(-1)补中益气汤灌胃,西药组给予3.033×10^(-5) g·kg^(-1)硒酵母片混悬液灌胃,空白组及模型组给予等体积蒸馏水灌胃,连续8周后实施取材。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠甲状腺组织病理形态;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)含量;试剂盒检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用免疫荧光检测甲状腺组织中GPX4定位表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)检测甲状腺组织Nrf2、PPARγ、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、溶质载体家族3成员2(SLC3A2)、溶血卵磷脂酰基转移酶3(LPCAT3)、GPX4 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺组织Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、LPCAT3、GPX4蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠光镜下可见甲状腺组织内明显的淋巴细胞浸润现象,血清中TGAb、TPOAb含量显著升高(P<0.01),MDA水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.01);甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4表达显著降低(P<0.01),LPCAT3的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,补中益气汤各剂量组及西药组小鼠光镜下甲状腺组织内的淋巴细胞浸润程度减轻,血清中TPOAb、TGAb含量明显降低(P<0.05,P<0.01),MDA水平明显降低、SOD水平明显升高(P<0.05,P<0.01);甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4表达明显升高、LPCAT3的表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与西药组比较,补中益气汤各剂量组甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4、LPCAT3表达总体趋势差异明显(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可有效改善AIT的炎症损伤,其作用机制可能与调控Nrf2/PPARγ/GPX4抑制铁死亡进程有关。

帕病2号方对帕金森病模型大鼠中脑黑质Nrf2,HO-1表达的影响

目的:观察帕病2号方对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致帕金森病(PD)大鼠中脑黑质组织内核因子E2相关性因子2(Nrf2)以及下游靶基因血红加氧酶1(HO-1)的表达。方法:采用6-OHDA左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,经阿卟吗啡(APO)诱导表现为恒定右侧旋转且旋转圈数大于210 r·30 min-1视为成功PD大鼠模型。24只造模成功大鼠随机分为模型组,帕病2号方低、中、高剂量组(8.0,16.0,32.0 g·kg-1),同时设立正常组,假手术组。正常组,假手术组,模型组给予等容积蒸馏水,连续灌胃给药4周。Western blot法检测中脑黑质Nrf2细胞核蛋白及HO-1蛋白表达。RT-PCR法检测中脑黑质Nrf2,HO-1mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达上调(P<0.01),Nrf2,HO-1mRNA水平上调(P<0.01);与模型组比较,帕病2号方低、中、高剂量组大鼠中脑黑质组织Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达明显上调(P<0.01),Nrf2,HO-1mRNA水平上调(P<0.01),帕病2号方高剂量组与中、低剂量组比较有明显差异(P<0.01)。结论:6-OHDA造模后可以激活Nrf2/HO-1信号通路;帕病2号方治疗后进一步提高Nrf2细胞核蛋白和Nrf2mRNA表达,进而上调下游靶基因HO-1蛋白及HO-1mRNA的表达,且帕病2号方高剂量组作用更为明显。

重组人促红细胞生成素对急性脑缺血大鼠Nrf2及HO-1表达的影响

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）对急性脑缺血大鼠脑组织中核因子E2相关性因子2（Nff2）及血红素加氧酶1（HO-11表达的影响，探讨rhEP0的抗氧化作用机制。方法将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、rhEPO组，后两组采用线栓法制备大鼠永久性局灶性脑缺血模型。rhEP0组在造模成功2h后腹腔注射rhEPO50001U／kg．假手术组和模型组给予等量生理盐水。缺血24h后处死大鼠取脑，采用免疫组化染色和Westernblotting检测脑组织中Nrf2及H0-1的表达。结果免疫组化染色结果显示，假手术组Nrf2及H0-l均只有少量阳性表达，模型组和rhEPO组Nrf2及HO-1阳性表达细胞数均较假手术组明显增多，且rhEPO组阳性表达细胞数亦明显多于模型组，差异均有统计学意义（P＜0．05）；阳性表达细胞主要为缺血区的神经元和星形胶质细胞。Westemblotting结果也显示Nrf2及HO-1表达按假手术组、模型组、rhEPO组顺序依次增强，组间两两比较差异均有统计学意义（P＜O．05）。结论急性脑缺血后脑组织中Keapl-Nrf2／ARE抗氧化系统可被激活，rhEPO通过激活该抗氧化系统从而发挥脑保护作用。

葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠认知功能及海马ERK/Nrf2/HO-1通路影响的研究

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对糖尿病大鼠认知功能及海马细胞外信号调节激酶(ERK)/核因子E2相关性因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法90只雄性大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病模型组(DM)、α-硫辛酸灌胃的阳性对照组(Con)、低剂量GSP组(L-GSP)、中剂量GSP组(M-GSP)和高剂量GSP组(H-GSP),每组各15只。采用腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型。Morris水迷宫实验观察大鼠学习和记忆能力,Western blot法测定海马组织p-ERK、Nrf2、HO-1蛋白表达。结果与DM组比较,M-GSP、H-GSP组平均逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05),海马组织p-ERK、Nrf2、HO-1蛋白升高[(0.54±0.06)vs(0.22±0.05),(0.61±0.07)vs(0.11±0.01),(0.58±0.06)vs(0.13±0.02);(0.76±0.08)vs(0.22±0.05),(0.96±0.10)vs(0.11±0.01),(0.63±0.08)vs(0.13±0.02);P<0.05]。结论GSP可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1通路提高糖尿病大鼠学习和记忆能力,改善大鼠认知功能。

TLR4对大鼠急性脑梗死体积与Nrf2、HO-1表达水平的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)对大鼠急性脑梗死体积与核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)表达水平的影响。方法制备大鼠急性脑缺血模型后,比较模型组与TLR4特异性抑制剂-TAK-242组行为学及脑梗死体积、Nrf2、HO-1表达水平改变;通过Morris水迷宫实验比较不同组小鼠脑梗死后学习功能的恢复;TTC染色比较不同组脑梗死体积变化;免疫组织化学染色及Western Blot比较各组Nrf2、HO-1表达水平变化。结果与假手术组比较,模型组与TAK-242组潜伏期延长,穿越平台次数减少,同时TAK-242组潜伏期明显短于模型组(P<0.05);TAK-242组穿越平台的次数明显多于模型组(P<0.05)。TAK-242组脑梗死体积明显小于模型组(P<0.05)。Nrf2、HO-1主要表达在神经元与星形胶质细胞中。另外,假手术组Nrf2、HO-1的表达水平明显低于模型组与TAK-242组,同时TAK-242组Nrf2、HO-1的表达水平明显高于模型组。3组大鼠Nrf2、HO-1表达水平有明显差异(P<0.05),且TAK-242组Nrf2、HO-1的表达水平显著高于模型组(P<0.05)。结论通过TLR4特异性抑制剂-TAK-242干预可以显著改善大鼠急性脑缺血的神经功能,减小脑梗死体积,促进神经元与星形胶质细胞Nrf2、HO-1的表达。