泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响

目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子-κB信号通路的影响并探讨其作用机制。方法:实验设正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组,除正常组外采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型,灌服相应药物后后观察各组大鼠结肠组织Toll样受体4及核因子-κB表达。结果:泄浊解毒方各剂量组大鼠Toll样受体4及核因子-κB表达均明显低于模型组;泄浊解毒方大剂量组Toll样受体4及核因子-κB表达明显低于柳氮磺胺吡啶组。结论:泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与调节Toll样受体4/核因子-κB信号通路有关。

Toll样受体4/核因子-кB信号通路在人颅内动脉瘤形成和破裂过程中的激活

颅内动脉瘤病理过程与免疫炎症反应密不可分,但炎症反应的起源或机制仍不太清楚。核转录因子κB（NF-κB）是炎症细胞因子[如白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和IL-8]、趋化因子[单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）]、黏附分子[细胞间黏附分子（ICAM）-1和血管细胞黏附分子（VCAM）-1]的主要调节子。

梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制

目的:探讨梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NK-κB)信号通路调节退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制。方法:体外培养大鼠软骨细胞并鉴定,采用CCK-8法检测梅花入骨丹水提物(BCAE)对体外软骨细胞的增殖-毒性,筛选药物作用的最佳浓度和时间。采用10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症退变模型,将软骨细胞分为空白对照组、模型对照组、BCAE组、抑制剂TAK-242组和抑制剂PDTC组,分别进行相应干预后,qRT-PCR及Western blot法检测各组基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、IκBα、p-p65、ColⅡ的mRNA、蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,模型对照组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达下降(P<0.01);与模型对照组比较,TAK-242组、PDTC组、BCAE组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显减少(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达升高(P<0.01)。结论:梅花入骨丹通过TLR4/NK-κB信号通路抑制MMPs的关键调控因子表达,从而抑制IL-1β介导的退变软骨细胞外基质代谢紊乱,发挥抗炎和保护软骨细胞的作用。

黄芩苷调控活化Toll样受体4/核因子-κB信号通路对复发性流产小鼠的影响

目的:探讨黄芩苷对复发性流产小鼠的影响及作用机制。方法:参照Clark经典模型构建复发性流产小鼠,并将成功构建好的小鼠随机分为模型组和实验组,每组10只;同时建立正常妊娠小鼠模型10只作为对照组。于妊娠第2天,实验组灌胃0.4 mL/mg黄芩苷,模型组和对照组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,1次/d,连续干预7 d。酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中激素水平及母胎界面中炎性反应递质水平;免疫组织化学检测小鼠子宫组织巨噬细胞分布情况;蛋白免疫印迹法检测各组小鼠子宫组织活化Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB、髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达情况。结果:对照组、模型组和实验组小鼠母胎界面中TNF-α/IL-4为(2.78±0.36),(4.89±0.58)和(3.39±0.34),血清中E 2为(25.16±3.69),(17.56±4.52),(22.36±4.16)ng/L。小鼠子宫组织中分化抗原14(CD14)蛋白相对表达量分别为(9.36±2.34),(68.12±13.52),(33.46±2.85)%,子宫组织中TLR4蛋白表达量为(0.23±0.02),(1.25±0.33),(0.45±0.12),核因子-κB蛋白表达量为(0.59±0.14),(1.52±0.36),(0.78±0.25),MyD88蛋白表达量为(0.63±0.24),(2.34±0.22),(1.26±0.31),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩苷可提高复发性流产小鼠雌激素水平,降低母胎界面中炎性状态,与抑制子宫内膜巨噬细胞浸润,调控TLR4-核因子-κB信号通路活性有关。

基于Toll样受体4/核因子-κB信号通路中医药干预溃疡性结肠炎作用机制的研究进展

随着现代研究对结肠炎生物学领域的不断深入研究发现,中医药在调节免疫炎症反应中发挥重要的作用。本文通过文献搜索发现,由Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)组成的TLR4/NF-κB信号通路在调节炎症因子、调控巨噬细胞移动抑制因子、抗氧化、下调环氧化酶-2、修复肠黏膜屏障中发挥显著作用。近年来,中医药领域以TLR4/NF-κB信号通路为切入点,发挥辨病与辨证相结合的优势进行了大量中药单体及有效成分、复方干预溃疡性结肠炎中TLR4/NF-κB信号通路的临床研究,并将中医药治疗溃疡性结肠炎的作用机制归纳为5类:(1)调节炎症因子在机体内的平衡以减轻肠道炎症反应;(2)抑制巨噬细胞移动抑制因子以减少炎症因子释放;(3)调节抗脂质氧化及氧化应激损伤;(4)下调环氧合酶进而促进肠上皮细胞的修复;(5)修复肠黏膜屏障以恢复肠黏膜结构。此外,针对目前研究领域的现状进行分析与评价,旨在为研究提供一定的参考。

金丝桃苷抑制Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB 信号通路减轻牙周炎大鼠牙周组织损伤实验研究

目的:探究金丝桃苷调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对牙周炎大鼠牙周组织损伤的影响。方法:构建牙周炎大鼠模型,建模成功大鼠随机分为模型组、金丝桃苷(30 mg/kg)组、金丝桃苷(30 mg/kg)+TLR4激活剂(脂多糖,0.4 mg/kg)组,每组15只,另取15只健康大鼠作为对照组,建模结束后,各组大鼠按对应方式给药,1次/d,连续4周。HE染色及抗酒石酸酸性磷酸酶染色分别观察各组大鼠牙周组织病理变化及破骨细胞数量;ELISA法检测各组大鼠血清骨保护素(OPG)、NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;荧光定量PCR法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平;蛋白印迹法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果:对照组大鼠牙周组织结构正常;与对照组相比,模型组大鼠牙周组织炎性细胞浸润明显,伴随骨吸收陷窝数量增多,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,金丝桃苷组大鼠牙龈上皮较完整,炎性细胞浸润程度较轻,骨吸收陷窝减少,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著降低(均P<0.05),血清OPG水平显著升高(P<0.05);与金丝桃苷组相比,金丝桃苷+TLR4激活剂组大鼠牙周组织炎性细胞浸润程度加深,骨吸收陷窝增多,牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05)。结论:金丝桃苷可缓解牙周炎大鼠牙周组织损伤,抑制大鼠炎性反应,其机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

原花青素通过抑制Toll样受体4/核因子-κB信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探究原花青素通过抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠脑缺血再灌注(ischemia-reper⁃fusion,I/R)损伤的保护作用。方法选取60只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为对照组、模型组、原花青素低剂量组(80 mg/kg)和原花青素高剂量组(160 mg/kg),每组15只;除对照组外,其他各组大鼠使用改良线栓法制成I/R模型,原花青素低剂量组和原花青素高剂量组分别使用80 mg/kg和160 mg/kg的原花青素灌胃处理,连续处理1周。比较各组大鼠脑含水量;采用神经行为学评估比较各组大鼠神经功能缺损评分;使用试剂盒检测各组大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平;采用蛋白质印迹法检测TLR4/NF-κB信号通路和凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)表达水平;采用苏木素染色观察神经细胞凋亡率。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率升高,SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白降低(P<0.05),其中TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(1.80±0.20)和(1.85±0.21),显著低于对照组的(0.45±0.04)和(0.51±0.04);相比模型组,使用原花青素处理各组大鼠神经功能评分、脑含水量、活性氧含量水平、TLR4蛋白、NF-κB蛋白、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达、神经细胞凋亡率降低,且原花青素高剂量组低于原花青素低剂量组(P<0.05),其中原花青素高剂量组TLR4蛋白和NF-κB蛋白分别为(0.59±0.06)和(0.64±0.06),显著低于原花青素低剂量组的(1.00±0.10)和(0.98±0.09);与模型组比较,使用原花青素处理各组大鼠SOD含量水平、GPX含量水平、Bcl-2蛋白升高,且原花青素高剂量组高于原花青素低剂量组(P<0.05)。结论原花青素过抑制TLR4/NF-κB信号通路调控下游凋亡蛋白的表达抑制I/R后大鼠脑细胞的凋亡,缓解脑组织损伤。

基于TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨热毒宁注射液抑制脂多糖刺激的BEAS-2B细胞炎症因子表达的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究热毒宁注射液(RDN)对脂多糖(LPS)刺激的人支气管上皮细胞BEAS-2B炎症因子表达的影响及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸含量;采用分子对接技术评估栀子苷和绿原酸与TLR4的结合能力。通过体外实验构建LPS(1μg·mL^(–1))刺激的BEAS-2B细胞气道炎症模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞活力;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达;通过免疫印迹法(WB)检测LPS诱导的BEAS-2B细胞TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质的表达;采用免疫荧光法(IF)检测转录因子c-Jun和p65的入核情况。结果:RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸的质量分数分别为127.00、70.26 mg·g^(–1);栀子苷和绿原酸均能与TLR4结合,结合能分别为–7.0、–7.9 kcal·mol^(–1)。质量浓度为12.5~400.0μg·mL^(–1)时,RDN对LPS刺激的BEAS-2B细胞活力无显著的抑制作用;质量浓度为200.0~400.0μg·mL^(–1)时,RDN能明显下调白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、趋化因子CXC配体2(CXCL2)、CXCL5、趋化因子配体5(CCL5)、CCL20 mRNA的表达。此外,RDN能降低TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质PI3K、Akt、TANK结合激酶1(TBK1)、IκB激酶(IKK)α/β、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p65、p38、c-Jun N-末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS激活的BEAS-2B细胞p65和c-Jun的入核。结论:RDN能下调LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达,其机制与RDN阻断TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

芳香新塔花对动脉粥样硬化模型小鼠Tol样受体-4/核因子-κB信号通路的影响

目的:通过研究芳香新塔花(新塔花)对动脉粥样硬化模型载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉Toll样受体-4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨新塔花防治动脉粥样硬化的作用机制。方法:选取40只8周龄ApoE-/-小鼠和10只同品系C57小鼠,适应性喂养1周后予以高脂饲料喂养12周。同时在适应性喂养后,将C57小鼠设为空白对照组;ApoE-/-小鼠随机分为模型组、他汀组、新塔花高剂量组和新塔花低剂量组,每组10只。5组小鼠每天灌胃1次,持续12周:空白对照组和模型组均给予蒸馏水(0.4 ml/10 g),他汀组给予阿托伐他汀[3.0 mg/(kg·d)],新塔花高剂量组给予新塔花水提物[1.8 g/(kg·d)],新塔花低剂量组给予新塔花水提物[0.9 g/(kg·d)]。每周记录小鼠体质量变化,并调整用药量。灌胃12周后处理小鼠,采集主动脉。胸主动脉用于苏木精-伊红(HE)染色观察病理变化。腹主动脉采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TLR4、NF-κB的信使RNA(mRNA)相对表达水平;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、NF-κB蛋白表达水平。结果:qRT-PCR结果显示,与空白对照组比较,模型组TLR4、NF-κB的m RNA相对表达水平升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与模型组比较,他汀组、新塔花高剂量组和低剂量组TLR4、NF-κB的m RNA相对表达水平降低,差异有统计学意义(P均<0.05)。Western Blot结果显示,与空白对照组比较,模型组TLR4、磷酸化NF-κB p65蛋白水平上调,他汀组、新塔花高剂量组和低剂量组TLR4、磷酸化NF-κB p65蛋白水平下调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:新塔花具有防治动脉粥样硬化的作用,其机制可能与调控TLR4/NF-κB信号通路、改善内皮功能、抑制炎症反应有关,需进一步深入研究证实。

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子通过Toll样受体-4信号通路调节巨噬细胞自噬水平

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)是否通过Toll样受体-4(TLR4)通路调节巨噬细胞自噬水平。方法用终浓度为5ng/ml的佛波酯(PMA)诱导人单核细胞白血病细胞系(THP-1)THP-1单核细胞48h,采用分化成功的巨噬细胞进行实验。实验分为空白对照组、EMMPRIN组和TAK-242组。蛋白印迹法检测各组TLR4、核因子-κB(NF-κB)、LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达水平;免疫荧光检测各组LC3-Ⅱ、Beclin1及P62蛋白荧光表达情况。采用SPSS 22.0软件对数据进行处理。结果Western blot检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,TLR4、NF-κB蛋白表达水平均升高(均P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达水平均升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达水平也升高[EMMPRIN组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但仍较对照组升高;EMMPRIN组与TAK-242组比较,差异有统计学意义(P<0.05)],P62蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。免疫荧光检测发现,EMMPRIN组与对照组及TAK-242组相比,LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白荧光表达水平明显升高(均P<0.05),P62蛋白表达水平无差异统计学意义(P>0.05)。结论EMMPRI可能通过TLR4信号通路调节人THP-1巨噬细胞过度自噬。

地塞米松对脂多糖激活的核因子-κB信号通路作用机制研究进展

脂多糖(LPS)是重要的炎症诱导因子,可通过与炎症相关细胞膜表面的Toll样受体4(TLR4)结合入胞并激活下游信号通路,促使核因子(NF)-κB进行核转位从而启动目标基因的转录,合成促炎因子推动炎症反应的进行。地塞米松作为强效的糖皮质激素可通过一系列“基因组效应”调控LPS-TLR4/NF-κB信号通路中的多个组分,影响炎症因子的合成,改变炎症转归。文章综述了LPS通过TLR4激活NF-κB通路的机制以及地塞米松对LPS-TLR4/NF-κB通路的作用机制相关研究进展,并列举了影响地塞米松对该通路作用的因素。该方面研究的深入可能有望指导地塞米松临床应用的安全剂量范围并为脓毒症等疾病提供新的治疗思路。

电针联合康复运动训练对膝骨关节炎患者血液流变学和外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨电针联合康复运动训练对膝骨关节炎(KOA)患者血液流变学和外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 90例KOA患者,按照入院先后顺序将患者分为对照组和研究组,各45例。对照组接受康复运动训练,研究组在对照组基础上联合电针治疗。比较两组临床症状相关评分、血液流变学指标和外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关指标。结果 两组治疗1个月后视觉模拟评分法(VAS)、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、Lysholm膝关节功能评分均较治疗前改善,且研究组VAS评分(1.93±0.41)分、WOMAC评分(17.34±2.28)分低于对照组的(2.82±0.39)、(34.39±3.17)分, Lysholm膝关节功能评分(84.73±6.34)分高于对照组的(72.69±5.22)分(P<0.05)。两组治疗1个月后全血高切粘度、全血低切粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数均较治疗前降低,且研究组全血高切粘度(3.14±0.28)mPa·s、全血低切粘度(6.21±0.75)mPa·s、血浆粘度(1.35±0.21)mPa·s、红细胞聚集指数(2.73±0.31)低于对照组的(4.26±0.32)mPa·s、(8.24±1.21)mPa·s、(2.07±0.23)mPa·s、(4.21±0.42)(P<0.05)。两组治疗1个月后TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA均较治疗前降低,且研究组TLR4 mRNA(2.16±0.19)、MyD88 mRNA(2.21±0.73)、NF-κB mRNA(2.36±0.47)低于对照组的(3.08±0.23)、(3.67±0.84)、(3.42±0.53)(P<0.05)。结论 电针联合康复运动训练可改善KOA患者的临床症状和血液流变学等指标,其作用机制通过与调控外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥作用。

SGLT2抑制剂联合新活素治疗高血压伴心力衰竭的疗效及对患者TLR4/NF-κB信号通路指标的影响

目的研究钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(达格列净)联合新活素治疗高血压伴心力衰竭(心衰)的临床效果及对患者外周血单核细胞Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路指标的影响。方法前瞻性选取2021年5月至2023年6月郑州大学第一附属医院收治的138例高血压伴心衰患者作为研究对象,采用随机数表法分为对照组、单一组和联合组各46例。对照组接受常规基础治疗,单一组在此基础上接受新活素治疗,联合组在此基础上接受达格列净联合新活素治疗。治疗7 d后比较三组患者的临床疗效,以及治疗前后的心功能[左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)、心率(HR)]、运动耐力[6 min步行试验距离(6 MWT)]、血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]和TLR4/NF-κB信号通路相关指标[TLR4、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],同时比较三组患者的不良反应发生情况。结果联合组患者的治疗总有效率为95.65%,明显高于单一组的86.96%和对照组的73.91%,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的LVEF、6 MWT分别为(43.28±3.16)%、(336.48±32.49)m,明显高于单一组的(40.54±2.68)%、(306.45±40.26)m和对照组的(38.07±2.89)%、(280.69±36.98)m,LVESD、HR分别为(35.29±4.26)mm、(71.34±3.62)次/min,明显低于单一组的(38.75±3.64)mm、(74.25±3.59)次/min和对照组的(42.36±4.05)mm、(76.46±3.98)次/min,且单一组变化幅度大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的SBP、DBP分别为(110.36±5.02)mmHg、(81.42±2.56)mmHg,明显低于单一组的(114.83±4.76)mmHg、(84.39±2.88)mmHg和对照组的(117.25±5.18)mmHg、(86.05±2.62)mmHg,且单一组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的GSH-Px、CAT分别为(105.24±20.29)U/g·Hb、(148.35±32.46)U/mL,明显高于单一组的(90.35±19.45)U/g·Hb、(125.64±26.49)U/mL和对照组的(84.49±17.32)U/g·Hb、(103.29±25.38)U/mL,MDA为(7.39±2.56)mmol/L,明显低于单一组的(11.35±2.95)mmol/L和对照组的(13.08±2.72)mmol/L,且单一组变化幅度大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA明显低于单一组和对照组,且单一组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);三组患者的不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论SGLT2抑制剂联合新活素治疗高血压伴心衰能有效改善患者的氧化应激水平,调节TLR4/NF-κB信号通路,恢复患者血压与心功能,临床应用效果显著,且安全性较高。

芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过TLR-4/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8实验检测人卵巢癌细胞A2780、SK-OV-3、HO8910及正常卵巢细胞HOSEpiC的活性。A2780细胞分为对照组(0.01%二甲基亚砜)、CP-25低(0.5 mg/ml CP-25)、中(1 mg/ml CP-25)、高(2 mg/ml CP-25)浓度组和CP-25高浓度+LPS组(2 mg/ml CP-25和0.1μg/ml TLR-4激活剂LPS)。CCK-8和克隆形成实验评估细胞增殖能力;流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡情况;Western blot分析增殖蛋白Ki67、凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Caspase-3、Bax、Bcl-2)、TLR-4、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光染色观察TLR-4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与HOSEpiC细胞相比,A2780、SK-OV-3、HO8910细胞活性随CP-25浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),且CP-25在低、中、高浓度下对A2780细胞的生长有50%左右的抑制作用,故采用A2780细胞进行实验。与对照组相比,CP-25低、中、高浓度组A2780细胞克隆形成率显著下降,细胞凋亡率和凋亡指数明显上升,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平显著降低,Cleaved caspase-3/Caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。与CP-25高浓度组相比,CP-25高浓度+LPS组细胞活性、克隆形成率明显升高,细胞凋亡率和凋亡指数明显降低,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平明显升高,Cleaved caspase-3/Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0.05)。结论:CP-25通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路观察白藜芦醇对炎症相关性结直肠癌的影响

目的基于Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路探究白藜芦醇(Res)对炎症相关性结直肠癌(CAC)的影响。方法小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(Vehicle)、低浓度Res组(Res low)、高浓度Res组(Res high)。利用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)构建小鼠CAC模型,并分别给予Res和蒸馏水灌胃治疗。比较各组小鼠结直肠肿瘤数目和结直肠状态;ELISA检测血清白介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化染色检测结直肠组织环氧化酶2(COX-2)、Ki-67、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白水平;qRT-PCR和Western blotting法检测结直肠组织TLR4、MyD88、NF-κB水平。结果与Control组比较,Vehicle组小鼠结直肠肿瘤增多、结肠组织损伤严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05),结直肠组织COX-2、Ki-67、TLR4、MyD88、NF-κB表达水平升高(P<0.05),IL-10、E-cadherin表达水平降低(P<0.05)。与Vehicle组比较,Res low组、Res high组上述指标均有所缓解,具有明显的Res剂量依赖性(P<0.05)。结论Res可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路,降低结直肠炎症反应,抑制结直肠癌的恶性增殖和转移,从而减轻CAC小鼠肠道损伤。

外周血NF-κB信号通路相关因子水平与带状疱疹患者病情程度的相关性

目的:分析外周血NF-κB信号通路相关因子水平与带状疱疹患者病情程度的相关性。方法:选取2018年2月至2020年12月安阳市肿瘤医院收治的86例带状疱疹患者进行前瞻性研究,设为研究组,依据病情程度分为轻度组23例、中度组43例、重度组20例,另选取同期60名健康体检者作为对照组。比较两组、不同病情程度带状疱疹患者趋化因子10(CXCL10)、白细胞介素-6(IL-6)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和Toll样受体4(TLR4)mRNA水平,采用Pearson相关分析CXCL10、IL-6、NF-κB mRNA和TLR4 mRNA水平与带状疱疹患者病情程度的相关性。结果:研究组CXCL10、IL-6、NF-κB mRNA和TLR4 mRNA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组CXCL10、IL-6、NF-κB mRNA和TLR4 mRNA水平均高于中度组、轻度组,且中度组高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,CXCL10、IL-6、NF-κB mRNA和TLR4 mRNA水平与带状疱疹患者病情程度均呈正相关(r>0,P<0.05)。结论:外周血NF-κB信号通路相关因子水平与带状疱疹患者病情程度均呈正相关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠炎症因子及TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

【目的】观察和厚朴酚对铜绿假单胞菌肺炎小鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只小鼠随机分为正常组,模型组,和厚朴酚低、中、高剂量组(剂量分别为96、192、384 mg·kg-1·d-1),每组10只。除正常组,其余各组小鼠通过气管滴注铜绿假单胞菌液建立肺炎模型。连续给药4周后,计算小鼠肺指数,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清白细胞介素6(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理损伤情况,实时定量聚合酶链反应(qRTPCR)法和Western Blot法分别检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达量。【结果】正常组小鼠肺组织未见明显异常改变;模型组小鼠肺组织可见严重的炎症细胞浸润、水肿、间质充血和肺泡壁增厚;和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺组织病理损伤得到不同程度的减轻。与正常组比较,模型组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,和厚朴酚低、中、高剂量组小鼠肺指数,血清IL-6、IL-1β和TNF-α水平以及肺组织TLR4、MyD88和NF-κB mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),表现为和厚朴酚高剂量组<和厚朴酚中剂量组<和厚朴酚低剂量组。【结论】和厚朴酚可减轻铜绿假单胞菌肺炎小鼠肺组织损伤,降低炎症反应,其可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥作用。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。