核因子-κB诱骗剂局部应用对胶原诱导性关节炎大鼠治疗作用的研究

探讨核因子-κB诱骗剂(NF-κB decoy)局部应用对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其对滑膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、IL-17、TGF-β表达的影响。建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,用NF-κB诱骗剂注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、CIA模型组和实验组。42d后观察各组关节炎指数、病理指标,采用ELISA法检测各组大鼠关节液中IL-17、IL-12和TGF-β的水平,免疫组织化学方法检测关节组织MMP-3、TGF-β和IL-17表达。与对照组比较,CIA模型组大鼠关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显升高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的积分光密度(IOD)值明显增加;实验组经NF-κB诱骗剂注射后,与CIA模型组比较,关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显降低,而TGF-β的含量显著增高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的IOD值明显降低,TGF-β阳性表达的IOD值显著增高。NF-κB诱骗明显减轻CIA大鼠的关节炎症状,延缓关节破坏的进展,对CIA有较好的治疗作用。

核因子-κB寡聚脱氧核苷酸诱骗剂处理树突状细胞对大鼠胶原诱导性关节炎治疗作用研究

目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)寡聚脱氧核苷酸(ODN)诱骗剂处理的树突状细胞(dendritic cells,DC)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠的治疗作用及机制。方法:建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,NF-κB诱骗剂处理SD大鼠脾脏来源的DC,在初次免疫第5天经尾静脉注射到CIA大鼠体内,并设空白对照组、CIA模型组和Decoy-DC组。42 d后观察各组关节肿胀程度、关节炎指数和病理指标。结果:经rr GM-CSF和rr IL-4刺激后诱导的各组DC表面OX62的表达在70%以上,差异无统计学意义(P>0.05);Decoy-DC组与LPS-DC组的CD80阳性细胞百分率差异有统计学意义(P<0.05),在Decoy-DC组的CD80荧光强度明显低于LPS-DC组(P<0.01);Decoy-DC组的CD86荧光强度亦均明显低于LPS-DC组(P<0.01),初次免疫第7天后,Decoy-DC组和CIA模型组的关节炎指数开始增高;从第21天后开始,Decoy-DC组的关节指数均明显低于CIA模型组(P<0.01)。结论:NF-κB诱骗剂处理的DC有效地减轻CIA大鼠关节炎症状及组织病理损害,对类风湿性关节炎有较好的治疗作用。

大鼠骨髓源性耐受性树突状细胞的诱导培养

目的探讨使用核因子-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)诱导培养大鼠骨髓来源的耐受性树突状细胞(tol DC)的方法。方法取雄性Sprague Dawley(SD)和Wistar大鼠各10只,麻醉处死SD大鼠取胫骨制备骨髓细胞悬液、培养8 d获得树突状细胞(DC),分为Control-DC组[添加白细胞介素4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化培养]、Decoy-DC组(Control-DC组基础上加5μmol/L NF-κB ODN Decoy)、脂多糖(LPS)-DC组(培养初加GM-CSF和IL-4诱导分化培养,第7天加LPS 10μg/L刺激)及LPS-Decoy-DC组(Decoy-DC组细胞培养至第7天加10μg/L LPS),采用倒置显微镜分别观察Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第4~8天、LPS-DC组和LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞培养第8天DC的细胞形状、表面突起及集落等特征,采用吉姆萨染色评价培养第8天Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性DC的形态特征,采用台盼蓝染色法检测Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第8天DC的活细胞比率,采用流式细胞术检测各组SD大鼠培养第8天时骨髓源性DC的免疫表型;麻醉处死Wistar大鼠后取脾脏淋巴细胞制备反应细胞,同时将培养第8天的Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC中加丝裂霉素C制备刺激细胞,调整刺激细胞与反应细胞比例为1∶5得混合淋巴细胞,分为空白对照组(单独加混合淋巴细胞)、Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组混合淋巴细胞于490 nm处的光密度(OD490)值。结果镜下Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC集落较Control-DC组少且表面突起少见,LPS-DC组SD大鼠骨髓源性的DC形态较LPS-Decoy-DC组多样;台盼蓝染色显示提取当天和培养第8天Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC活细胞率均> 95%(P>0.05);流式细胞术显示各组SD大鼠骨髓源性DC的OX-62阳性表达率均> 95%(P>0.05),Decoy-DC组CD80、CD86的表达较Control-DC组下调、OD490降低(P<0.05),LPS-Decoy-DC组CD80、CD86的表达较LPS-DC组下调、OD490降低(P<0.05)。结论 NF-κB ODN Decoy可成功诱导培养出SD大鼠骨髓源性的高活力、高纯度的稳定的tol DC。