眼睑再造术治疗眼睑基底细胞癌的疗效及术后整合素αvβ3、核因子-κB65和E-cadherin的表达情况

目的探究眼睑再造术治疗眼睑基底细胞癌的疗效及术后整合素αvβ3、核因子-κB65(NF-κBP65)和E-cadherin的表达情况。方法将75例眼睑基底细胞癌患者按治疗方法不同分为对照组(n=35)和观察组(n=40),对照组患者实施标准化肿瘤切除术治疗,观察组在对照组基础上实施眼睑再造术,比较两组患者的视力情况,整合素αvβ3、NF-κBP65、E-cadherin阳性表达情况,治疗满意度和生活质量。结果术后2周,观察组患者视力情况优于对照组(P﹤0.05);两组患者肿瘤组织中整合素αvβ3、NF-κBP65和E-cadherin阳性表达率均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同肿瘤体积、脉管侵犯情况、脉管转移情况眼睑基底细胞癌患者肿瘤组织中整合素αvβ3、NF-κBP65和E-cadherin阳性表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。观察组患者满意度明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01)。术后,两组患者健康状况调查简表(SF-36)各维度评分均升高,且观察组均高于对照组(P﹤0.05)。结论眼睑再造术应用于眼睑基底细胞癌,可改善患者的视力水平,提高患者的治疗满意度和生活质量,整合素αvβ3、NF-κBP65和E-cadherin阳性表达可能与眼睑基底细胞癌发生发展有关。

腹主动脉瘤患者血清转胶蛋白、基质金属蛋白酶9和核因子-κB p65水平检测及意义

目的:检测腹主动脉瘤(AAA)患者血清转胶蛋白(TAGLN)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和核因子-κB(NF-κB)p65水平变化,探讨其临床意义。方法:通过酶联免疫吸附法检测肾下AAA患者80例(AAA组)及体检健康者50例(健康组)血清TAGLN、MMP-9和NF-κB p65水平并进行比较。分析三者间的相关性,分析三者对AAA的诊断价值。结果:健康组血清TAGLN水平高于AAA组,MMP-9和NF-κB p65水平低于AAA组(均P<0.05)。血清TAGLN与MMP-9和NF-κB p65呈负相关(r=-0.196、-0.364,均P<0.05),MMP-9与NF-κB p65呈正相关(r=0.213,P=0.015)。TAGLN、MMP-9和NF-κB p65联合诊断AAA的曲线下面积(AUC)高于任意单独指标,而敏感度和特异度不低于任意单独指标(均P<0.05)。结论:AAA患者血清TAGLN水平升高,MMP-9和NF-κB p65水平降低,三者联合检测对AAA的诊断具有较高价值。

超早期小骨窗微创术治疗高血压脑出血疗效及对核因子-κB p65通路的影响

目的:分析超早期小骨窗微创术治疗高血压脑出血的疗效及对核因子-κB p65(NF-κB p65)通路的影响。方法:选取高血压脑出血86例,根据手术时间不同分为观察组(46例,发病6 h内进行小骨窗微创颅内血肿清除术)和对照组(40例,发病6~24 h内进行小骨窗微创颅内血肿清除术)。比较两组临床疗效、围手术期指标、脑血流灌注指标、脑组织创伤应激指标、NF-κB p65通路相关因子以及并发症发生情况。结果:与对照组比较,观察组总有效率更高(P<0.05)。与对照组比较,观察组术中出血量更高,但意识恢复时间、下床时间、住院时间更短(均P<0.05)。与术前比较,术后7 d两组大脑中动脉舒张压末期血流速度(EDV)、收缩期峰值流速(PSV)水平以及血清脑源性神经营养因子(BDNF)水平升高,且观察组更高;两组大脑中动脉阻力指数(RI)、患侧颈总动脉外周阻力(R)降低,血清血清神经肽Y(NPY)、星形胶质源性蛋白(S100β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NF-κB p65水平降低,且观察组更低(均P<0.05)。观察组并发症总发生率低于对照组(P<0.05)。结论:相对于发病6~24 h进行手术,发病6 h内的超早期小骨窗微创术疗效更好,不但可以改善患者围手术期指标,降低创伤应激,改善脑血流灌注,还可以调控NF-κB p65通路,安全性更高。

慢性肾脏病NF-κB p65和炎性因子与动脉硬化的关系及HDF治疗对其影响

目的 探讨慢性肾脏病(CKD)患者体内核因子(NF)-κB p65和相关炎性因子水平与并发动脉硬化之间的关系及进行血液滤过透析(HDF)治疗对其产生影响。方法 随机选取肾功能正常的CKD1期患者(N组)40例N组,血液净化中心维持性血液透析(HD)CKD5D期患者80例,分别测定血清NF-κB p65和人单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时B超测定患者颈动脉内-中膜厚度(IMT),以判断是否并发动脉硬化;之后CKD5D期患者随机分为在线(OL)HDF组及HD组,分别以OL HDF及HD进行治疗,治疗3个月后两组复测以上指标进行比较并再次进行颈动脉超声检查测定IMT。结果 与N组相比,HD组、HDF组治疗前血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、MCP-1、NF-κB p65水平均明显增高(P<0.01);NF-κB p65蛋白表达明显增高,发生动脉硬化比例也明显增高(P<0.05)。经3个月治疗后,HD组血清IL-6、IL-8、TNF-α、hs-CRP、MCP-1、NF-κB水平,NF-κB p65蛋白表达均无明显变化(P>0.05),仍明显高于N组,但HDF组上述指标较治疗前相比明显改善(P<0.05),NF-κB p65蛋白表达受抑制。3个月后HD组动脉硬化发生率明显增高(P<0.05),而HDF组减少,但无统计学差异(P>0.05)。结论 HDF治疗下调NF-κB p65蛋白表达,能明显减轻慢性肾衰患者的微炎症状态,减少动脉硬化的发生率,是维持性HD患者的必要治疗。

电刺激小脑顶核对局灶脑缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65、TNF-α蛋白和基因表达的影响

目的观察电刺激小脑顶核干预对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65(NF-κB/p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白和基因表达的影响及其对中枢神经元保护的作用机制。方法 2014年9月—2015年9月在重庆医科大学神经病学实验室进行。Wistar大鼠60只随机分为假手术组(NC组)、缺血再灌注组(I/R组)、电刺激小脑顶核组(FNS组),每组20只,采用线栓法制作脑缺血再灌注动物模型,FNS组予以电刺激小脑顶核干预,造模或干预成功后处死大鼠取脑组织,分别采用免疫组织化学法和RT-PCR检测各组NF-κB/p65、TNF-α的表达。结果与NC组比较,I/R组NF-κB/p65、TNF-α蛋白表达增加(q=0.032、0.020,P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65、TNF-α的表达明显降低(q=0.182、0.013,P<0.05)。与NC组比较,L/R组NF-κB/p65mRNA和TNF-αmRNA表达量明显增高(P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65 mRNA和TNF-αmRNA表达量明显减少(P均<0.05)。结论电刺激小脑顶核抑制NF-κB/p65的活化和TNF-α的转录,NF-κB/p65的活化抑制和表达减少及所致的TNF-α表达下调可能是其发挥中枢神经源性保护作用的机制之一。

卵巢上皮性肿瘤组织中黏蛋白抗原4和核因子-κB/p65蛋白表达及临床意义

目的探讨黏蛋白抗原4(MUC4)及核因子(NF-κB/p65)在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法通过免疫组化方法,用MUC4及NF-κB/p65抗原检测正常卵巢组织和卵巢上皮性肿瘤组织中MUC4、NF-Kb/p65的表达,分析其临床意义。结果在卵巢癌中MUC4、NF-Kb/p65蛋白的阳性表达率分别为80%、92.30%,与卵巢交界性、良性及正常卵巢组织两两相比,差异均有统计学意义,且MUC4和NF-Kb/p65阳性表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论 MUC4和NF-κB/p65蛋白表达与卵巢癌分化程度、淋巴结转移关系密切,MUC4可望作为卵巢癌早期诊断的标志物,黏附分子的表达可能受核转录因子的调控。

核因子-κB传导通路与舌癌细胞平阳霉素化疗敏感性的关系

目的探讨核因子-κ(BNF-κB)/p65信号传导通路与Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性的关系。方法以脂质体为载体,转染2mg/L的p65反义寡核苷酸于Tca8113细胞后,8mg/L的平阳霉素处理细胞,3h、6h后免疫组化、Westernblot法检测细胞核内p65形态和含量变化,48h后MTT法检测细胞抑制率。结果平阳霉素能激活细胞内的NF-κB/p65信号传导通路,而p65反义寡核苷酸转染能明显抑制该信号通路,在6h时胞核内p65含量显著减少(P<0.05),48h时细胞抑制率明显提高(P<0.05)。结论抑制NF-κB/p65信号传导通路能够提高Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性。

退热六法对脂多糖致热兔toll样受体4/核转录因子-κB及炎症因子的影响

目的明确退热六法对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致热幼兔的退热效果及抗炎机制。方法选取24只新西兰幼兔随机分为正常组、模型组、推拿组,每组8只,推拿组和模型组通过耳缘静脉注射0.5μg/kg LPS建立发热模型,1小时内肛温升高0.6℃为造模成功。推拿组于造模后1小时进行手法干预,干预方法为退热六法,即开天门、推坎宫、揉太阳、揉耳后高骨、清天河水、推脊,连续监测6小时肛温变化,比较造模前、造模后1小时、造模后3小时中性粒细胞比率变化,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)含量变化,用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测肝、肺组织toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达含量。结果推拿后1小时、2小时、3小时,推拿组肛温显著低于模型组(P<0.05);造模后3小时,模型组中性粒细胞比率(neutrophil granulocyte,NEU%)高于造模前(P<0.05),推拿组NEU%显著低于模型组(P<0.05),推拿组血清中TNF-α、IL-1β含量低于模型组(P<0.05),推拿组肝、肺组织TLR4表达含量低于模型组(P<0.05),推拿组肝、肺组织NF-κB p65表达含量与模型组无明显差异(P>0.05)。结论退热六法降温作用明确,下调中性粒细胞比率、外周炎症因子TNF-α、IL-1β水平,从而影响TLR4信号通路实现调节体温作用,而这一作用不是通过NF-κB信号通路介导。

苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR模型大鼠卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路的影响

目的 探讨苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR (polycystic ovarian syndrome-insulin resistance, PCOS-IR)模型大鼠卵巢Toll受体4(TLR4)/核转录因子κB p65(NF-κB p65)信号通路的调控作用。方法 48只♀大鼠随机分为正常组8只和模型组40只。来曲唑(1 mg·kg^(-1))联合高脂饮食建立肥胖型PCOS-IR大鼠模型,快速革兰染色法观察动情周期,挑选24只模型大鼠随机分为:模型组、阳性药(二甲双胍135 mg·kg^(-1))组、苍附导痰汤高、低剂量(57.96、14.49 g·kg^(-1))组,每组各6只,药物干预21 d。观察动情周期、卵巢和子宫指数变化;血液生化仪测定空腹血糖(FBG)和血脂(甘油三酯TG和总胆固醇TC)变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定空腹胰岛素(FINS)水平;免疫组化法和荧光定量PCR法检测卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及基因的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢多囊性改变明显,FBG、TG、TC含量和FINS、HOMA-IR水平上调,卵巢中TLR4和NF-κB p65蛋白及mRNA表达均增加(P<0.05);与模型组比较,苍附导痰汤高剂量组大鼠排卵周期得到改善,卵巢多囊性改变减轻,上述指标出现明显逆转(P<0.05)。结论 苍附导痰汤能有效改善肥胖型PCOS-IR大鼠卵巢排卵和糖脂代谢功能,作用机制可能与调控卵巢TLR4/NF-κB p65信号通路有关。

热打击诱导氧化应激介导神经元凋亡过程中核因子κB的活化

背景:大量研究显示高热可诱导机体细胞发生广泛凋亡,但对于高热如何介导神经元细胞凋亡并没有深入研究报道。目的:检测热打击细胞模型中核因子κB信号通路对活性氧诱导细胞凋亡的影响。方法:使用细胞培养箱建立细胞热打击模型,热打击组分别将细胞置于39,41,43℃培养箱中进行热打击2 h,对照组(37℃组)将细胞置于标准37℃、体积分数5%CO2细胞培养箱。使用Annexin V-FITC/PI双染色方法检测不同温度热打击下神经元细胞凋亡率,Westen blot检测caspase-3及抗-核因子КB65蛋白表达,DCFH法检测细胞内活性氧含量,同时检测活性氧抑制剂MnTMPyP及核因子κB抑制剂PDTC对热打击细胞凋亡的影响。结果与结论:39℃热打击对细胞凋亡无影响,41℃热打击诱导细胞少量凋亡(10.19%),43℃热打击诱导诱导细胞大量凋亡(43.02%)。caspase-3和抗-核因子κB65蛋白的表达于热打击温度依赖的方式增加。MnTMPyP及PDTC均可有效阻断热打击引起的caspase-3、抗-核因子κB65蛋白的表达和细胞凋亡。结果证实热打击后细胞内活性氧增加诱导神经元细胞凋亡,提示核因子κB可能作为中间信号通路参与了热打击引起的细胞凋亡。

苗药五香血藤提取物对慢性非细菌性前列腺炎大鼠NF-κB P65、iNOS表达的影响

目的观察苗药五香血藤提取物对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠核因子(NF)-κB P65、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法健康雄性成年SD大鼠60只,随机分为正常组、CAP模型组、阳性药物组、苗药五香血藤提取物高(高剂量组)、中(中剂量组)、低(低剂量组)剂量组,每组10只。注射消痔灵进行大鼠造模,造模7 d,之后阳性药物组给予前列舒通胶囊水溶液灌胃治疗,苗药五香血藤提取物高、中、低剂量组分别给予252、126、63 mg/kg剂量灌胃治疗,正常组和模型组给予无菌生理盐水灌胃,每天灌胃1次,连续给药28 d;于末次给药后2 h股动脉取血处死大鼠,采用Western印迹检测前列腺组织NF-κB P65、iNOS蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8水平,观察前列腺组织病理学改变等。结果给药结束后,与CAP模型组比较,各组前列腺组织内NF-κB P65、iNOS蛋白相对表达量、血清中TNF-α、IL-6和IL-8含量均出现不同程度的降低,而高剂量组与阳性药物组的差异性不显著(P>0.05),并逐渐接近正常组水平;前列腺指数比较显示,除低剂量组外其余各组前列腺指数均明显低于模型组(P<0.05),而高剂量组与阳性药物组的差异性不显著(P>0.05);脏器指数比较显示,高剂量组和阳性药物组的肝、肾脏器指数均明显高于正常组和模型组(P<0.05);病理观察显示,高剂量组前列腺组织的腺体上皮细胞排列整齐,无明显增生,纤维组织增生及炎症细胞渗出病变明显减轻,病理改变接近阳性药物组。结论苗药五香血藤提物能够通过抑制NF-κB P65、iNOS蛋白表达,降低血清中TNF-α、IL-6和IL-8含量,对前列腺组织炎症起到缓解作用。

hBD-3和NF-κB p65在口腔潜在恶性病变和口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的检测β-防御素-3(hBD-3)和核因子-κB(NF-κB)p65在正常口腔黏膜、口腔潜在恶性病变(OPMD)及口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达并探讨相关性。方法收集中南大学湘雅医学院附属海口医院病理科2015年1月—2018年12月60例OPMD患者、40例OSCC患者及15例口腔黏膜正常者的临床资料及组织学标本,采用免疫组织化学法检测各组病理组织中hBD-3与NF-κB p65的表达,分析在不同类型组织标本中的差异,以及两种蛋白之间的相关性。结果OSCC中hBD-3、NF-κB p65的表达强度高于正常组及OPMD组(P<0.05),OPMD组高于正常组(P<0.05)。hBD-3与NF-κB p65的表达呈正相关(r=0.355,P<0.05)。hBD-3、NF-κB p65与OPMD上皮异常增生相关(P<0.05)。结论hBD-3和NF-κB p65蛋白在口腔黏膜早期癌变过程中表达增高,并有明显协同作用,两者可能参与了口腔鳞癌的发生发展。

非霍奇金淋巴瘤中PKR及NF-κB/P65表达的临床意义

目的:研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)中双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)及核因子-κB/P65(NF-κB/P65)的表达及临床意义。方法:采用免疫组化方法检测45例NHL患者、26例淋巴结反应性增生(RH)患者及15例正常者(CON)组织中PKR和NF-κB/P65的表达水平,分析其与NHL病理特征间的相关性。结果:NHL组PKR表达率为69.05%(29/42),RH组为11.54(3/26),正常组为6.67%(1/15),PKR在NHL中的表达水平较RH组及CON组增高(P<0.05)。NHL中NF-κB/P65阳性表达率为73.80%(31/42),RH组为3.85%(1/26),而CON中无NF-κB/P65阳性表达,NHL组织中NF-κB/P65表达较RH组及CON组增高(P<0.05)。PKR表达与NHL患者性别、年龄、细胞类型、恶性程度及临床分期无关;而NF-κB/P65表达与恶性程度及临床分期有关。结论:PKR在NHL中具有一定蛋白表达,NF-κB/P65异常表达与NHL的发生、发展有关。

逍遥散对雷公藤多苷致胃黏膜损伤大鼠TNF-α、IL-1β、NF-κB P65表达的影响

目的:研究逍遥散对雷公藤多苷致大鼠胃黏膜损伤的治疗效果及机制。方法:将24只SD大鼠随机分为空白对照组、雷公藤多苷组、逍遥散组,每组8只。雷公藤多苷组和逍遥散组通过灌胃雷公藤多苷混悬液(0.037 5 g·kg^(-1))制备胃黏膜损伤模型大鼠,逍遥散组在灌服雷公藤多苷混悬液1 h前灌服逍遥散水煎液(19.27 g·kg^(-1)),给药每日1次,持续5周。观测各组大鼠体质量、摄食量;采用苏木素-伊红染色法(HE)观察各组大鼠胃黏膜病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;免疫组化、实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(WB)检测胃黏膜IL-1β、TNF-α、核转录因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白和基因表达。结果:胃黏膜损伤模型大鼠体质量及摄食量明显低于正常大鼠,胃黏膜细胞排列紊乱,腺上皮萎缩呈囊状,黏膜层变薄,毛细血管充血明显,细胞发生水肿现象,肠上皮化生明显,黏膜固有层内有大量中性粒细胞浸润,核分裂多见,核大深染,异型性明显,细胞增生、细胞凋亡与坏死明显,血清中IL-1β、TNF-α含量升高(P <0.05),胃黏膜IL-1β、TNF-α、NF-κB P65蛋白与基因表达增加(P <0.05)。逍遥散干预后,大鼠体质量及摄食量增加,大鼠胃黏膜病理形态有不同程度减轻,血清中IL-1β、TNF-α含量降低(P <0.05),胃黏膜IL-1β、TNF-α、NF-κB P65蛋白与基因表达降低(P <0.05)。结论:逍遥散可在一定程度上缓解雷公藤多苷所致胃黏膜损伤,其机制可能与调节IL-1β、TNF-α、NF-κB P65的异常表达、减轻炎症级联反应有关。

调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移灶miR-34a-5p、Notch1/NF-κB表达的影响

目的探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因Notch1/核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路表达的影响。方法选取30只雄性Balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只。脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型。中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9%生理盐水灌胃。苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κB p65蛋白水平;实时荧光定量PCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κB p65 mRNA水平。结果与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移。与空白组比较,模型组肝转移灶中miR-34a-5p含量显著降低(P<0.01),Notch1、NF-κB p65蛋白表达升高(均P<0.05),Notch1、NF-κB p65的mRNA表达显著升高(均P<0.01)。与模型组比较,中药组Notch1蛋白及mRNA表达降低(P<0.05),NF-κB p65的mRNA表达显著降低(P<0.01)。miR-34a-5p与Notch1 mRNA在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r^(2)=0.8845,P<0.05),Notch1与NF-κB p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r^(2)=0.9291,P<0.01)。结论中药复方调脾安肠方能抑制裸鼠结肠癌肝转移灶形成,其机制可能与通过抑癌基因miR-34a-5p靶向负性调节Notch1/NF-κB通路表达有关。

罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠肾组织中一氧化氮及NF-κB/p65表达的影响

目的研究罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠肾组织中一氧化氮(NO)及核因子(NF)-κB/p65表达的影响。方法试验动物分为模型组、对照组和罗格列酮组,模型组和罗格列酮组构建重症急性胰腺炎大鼠模型,对照组只翻动十二指肠,罗格列酮组用罗格列酮腹腔注射。取各组大鼠肾组织,硝酸还原酶法检测NO含量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,免疫组化法检测NF-κB/p65表达,Western印迹检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和细胞间黏附分子(ICAM)-1表达。结果模型组和罗格列酮组肾组织中NO含量、iNOS活性、NF-κB/p65水平、TNF-α水平、ICAM-1水平较对照组明显升高(均P<0.05),而罗格列酮组较模型组均明显降低(均P<0.05)。结论罗格列酮能够降低重症急性胰腺炎肾组织中NO含量和NF-κB/p65、TNF-α、ICAM-1水平。

NF-κB p65调控IRF-8基因启动子活性及其启动子结合元件的初步鉴定

目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区(complete sequence coding,CDS)序列,将其插入到空载p IRES2-EGFP质粒中,构建大鼠野生型(wild type,WT)p65过表达质粒(pIRES2-p65 WT)。在此基础上,将p65第535位丝氨酸(serine,S)突变为天冬氨酸(aspartic,D)或丙氨酸(alanine,A),分别构建p65持续活化突变型质粒(pIRES2-p65 S535D)和p65显性负性突变型质粒(pIRES2-p65 S535A)。之后应用生物信息学软件预测IRF-8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF-8启动子全长(full-length,FL)和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-IRF-8-FL(-1892^+174 nt)、pGL3-IRF-8-1(-1360^+174 nt)、pGL3-IRF-8-2(-752^+174 nt)和pGL3-IRF-8-3(-68^+174 nt)。将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T(human embryonic kidney 293T,HEK-293T)细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF-8的启动子活性,并分析IRF-8启动子区可能的p65结合元件。结果:菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功。分别将pIRES2-p65 WT、pIRES2-p65S535D、pIRES2-p65 S535A和p GL3-IRF-8-FL共转染HEK-293T,发现过表达pIRES2-p65 WT或pIRES2-p65 S535D均可明显增加IRF-8启动子活性,且以pIRES2-p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2-p65 S535A后,IRF-8启动子活性无明显变化。将pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1~3和pIRES2-p65 S535D共转染HEK-293T后发现,pGL3-IRF-8-3的启动子活性显著低于pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1和p GL3-IRF-8-2,提示大鼠IRF-8启动子-752~68 nt区域可能存在p65结合元件。结论:在HEK-293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF-8基因的启动,且p65与IRF-8启动子的结合元件可能位于-752^-68 nt部位。

T淋巴细胞、TLR4与NF-κB p65在脑卒中相关性肺炎患者血清中的表达及意义

目的:探讨T淋巴细胞、Toll样受体4(TLR4)与核转录因子-κB P65(NF-κB p65)在脑卒中相关性肺炎(SAP)患者血清中的表达及意义。方法:选取2019年5月至2020年5月福建省三明第一医院收治的17例SAP患者和同期该院收治的20例单纯脑卒中患者为研究对象。将17例SAP患者作为SAP组,将20例单纯脑卒中患者作为非SAP组。采用流式细胞检测法检测两组患者血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的水平,采用荧光定量(PCR)法检测其血清TLR4、NF-κB p65的水平。然后比较两组患者血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、TLR4、NF-κB p65的水平。结果:(1)两组患者血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的水平相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)SAP组患者血清NF-κB p65基因mRNA的表达量高于非SAP组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者血清TLR4基因mRNA的表达量相比,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)两组患者血清NF-κB p65基因mRNA的表达量与其血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的水平呈正相关(r=0.144,P<0.05;r=0.201,P<0.05;r=0.071,P<0.05),与其血清CD8^(+)的水平呈负相关(r=-0.028,P<0.05)。两组患者血清TRL4基因mRNA的表达量与其血清CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的水平呈正相关(r=0.097,P<0.05;r=0.260,P<0.05;r=0.149,P<0.05),与其血清CD8^(+)的水平呈负相关(r=-0.156,P<0.05)。结论:脑卒中患者血清TLR4、NF-κB p65的水平与其血清T淋巴细胞的水平密切相关。SAP的发生可能与NF-κB p65信号通路被激活有关。

早期结直肠癌组织中PGC-1α、NF-κB p65的表达及与临床病理特征和预后的相关性分析

目的探讨早期结直肠癌组织中过氧化物酶体增殖物受体共激活因子-1α(peroxisome proliferator ivated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65的表达情况及与临床病理特征和预后的相关性。方法选取2015年11月-2017年11月收治的75例结直肠癌患者作为研究对象,对其癌组织及癌旁组织进行染色。检测组织中PGC-1α及NF-κB p65的表达水平,并结合2组结直肠黏膜组织病理分期情况,分析PGC-1α、NF-κB p65的表达与病理特征的相关性,随访2年,观察预后情况。结果癌组织中NF-κB p65、PGC-1α高表达率高于癌旁组织(P<0.05);TNMⅢ~Ⅳ期、存在血管侵犯、伴随淋巴结转移、肿瘤低分化的结直肠癌患者NF-κB p65、PGC-1α的表达水平更高(P<0.05)。NF-κB p65、PGC-1α的表达与结直肠癌患者TNM分期、淋巴结转移、血管侵犯程度呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.01);二者表达水平与结直肠癌患者生存率无相关性(P>0.05)。结论结直肠癌NF-κB p65、PGC-1α的表达与疾病严重程度具有相关性,其表达水平越高,患者病情越严重。

温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤对子宫供血、血清NF-κB p65水平影响分析

目的分析温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤对患者子宫供血、血清核转录因子-κB p65(NF-κB p65)水平影响。方法选取医院2016年11月—2018年11月收治的子宫肌瘤患者118例,分为两组。对照组采用米非司酮治疗,观察组采用温肾化痰祛瘀法治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果观察组总有效率为69.49%,对照组为49.15%,观察组患者总有效率高于对照组(P<0.05)。两组治疗前子宫血液流变学指标组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后血流搏动指数和阻力指数高于对照组,收缩期峰值速度和舒张期最小血流速度低于对照组(P<0.05)。两组治疗前子宫体积、子宫肌瘤体积组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后子宫体积(93.88±10.03)mm^3、子宫肌瘤体积(27.98±7.63)mm^3小于对照组(P<0.05)。两组治疗前NF-κB p65、白细胞介素-2(IL-2)、血管生成素-2(Ang-2)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后IL-2水平高于对照组,NF-κB p65、Ang-2水平低于对照组(P<0.05)。结论温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤可缩小子宫体积和子宫肌瘤体积,降低血清NF-κB p65、Ang-2的表达水平,减慢子宫血液循环。