人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2和线粒体转录因子A在前列腺癌中的表达及意义

目的检测前列腺癌组织标本中人类核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)、人类线粒体转录因子A(TFAM)的表达,并分析其表达与Gleason评分的关系。方法用免疫组织化学S-P法检测40例前列腺癌组织标本中Nrf2与TFAM的表达,应用Spearman相关分析Gleason评分与Nrf2、TFAM表达强度的关系。结果 Nrf2和TFAM的表达与Gleason评分正相关(P值为0.0052,0.0003);Nrf2与TFAM的表达也有相关性(P=0.006)。结论 Nrf2与TFAM是前列腺癌恶性程度的相关因素之一,Nrf2与TFAM很可能通过同一机制参与前列腺癌的发生发展过程。

原发性胆囊癌中核因子E2P45相关因子与血红素加氧酶-1的表达及其与临床病理的相关性

目的检测核因子E2 p45相关因子2(Nrf2)与血红素加氧酶-1(HO-1)在原发性胆囊癌组织中的表达,探讨其与胆囊癌发生、发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测59例原发性胆囊癌患者Nrf2和HO-1的表达水平。结果原发胆囊癌组织中Nrf2和HO-1表达的强阳性率分别为76.3%、80.7%。随着转移程度、Nevin分级以及病理分级的增加,Nrf2和HO-1的强阳性表达率增加,且具有统计学差异(P<0.05)。两者的强阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性;Nrf2和HO-1表达之间具有相关性(r=0.376,P<0.05)。结论 Nrf2和HO-1在原发性胆囊癌组织中存在高表达,对胆囊癌的发生、发展起一定作用。

白癜风患者皮损处核因子E2p45相关因子2核转位异常

目的明确白癜风患者皮损处是否存在核因子E2p45相关因子2（Nrf2）核转位异常。方法应用试剂盒检测8例表皮移植白癜风患者皮损处与正常供皮处疱液中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和过氧化氢酶（CAT）水平，采用细胞免疫荧光组化法鉴定8例寻常型白癜风患者皮损处与正常供皮处表皮细胞以及3例健康对照包皮原代培养的表皮细胞中Nrf2的表达，同时应用蛋白质印迹法检测上述样本中表皮细胞的胞质和胞核中Nrf2的表达水平。结果皮损处SOD与CAT水平显著低于正常供皮处（P〈0．05），MDA水平显著高于正常供皮处（P〈0．05）；细胞免疫荧光结果显示，健康对照、患者正常供皮处Nrf2在表皮细胞的胞质和胞核中均有表达，而患者皮损处Nrf2表达主要集中在胞质，胞核中表达量非常低。蛋白质印迹结果显示，核蛋白中Nrf2表达水平，白癜风患者皮损处（0．11±0．03）明显低于正常供皮处（0．27±0．06）和健康对照（0．32±0．02，均P〈0．01）；胞质蛋白Nrf2表达水平，皮损处（0．63±0．04）与正常供皮处（0．61±0．03）和健康对照（0．65±0．04）差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论白癜风患者皮损处表皮细胞存在Nrf2核转位异常。

NF-κB p65对子宫内膜异位症腺上皮细胞OPN、MMP-9表达及细胞侵袭性的影响

目的:探讨RNAi抑制核因子NF-κB p65对子宫内膜异位症(EMs)在位内膜腺上皮细胞中OPN、MMP-9表达及细胞侵袭性的影响。方法:采用NF-κB p65 siRNA基因沉默转染10例EMs患者在位内膜原代腺上皮细胞,由Western blot、Real-time PCR、Transwell等分别检测干扰前后OPN、NF-κB p65、MMP-9蛋白和mRNA表达及细胞侵袭性的变化。结果:与未干预组比较,NF-κB p65 siRNA干预后EMs腺上皮细胞中OPN蛋白及mRNA表达无明显变化,差异无统计学意义(P均>0.05);NF-κB p65、MMP-9蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。NF-κB p65 siRNA干预后,EMs腺上皮细胞的细胞侵袭性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:揭示NF-κB可能通过下调MMP-9的表达进而改变细胞侵袭性诱导EMs的发生。

核因子E2p45相关因子2核转位对黑素细胞生物学活性的影响

目的探讨核因子E2p45相关因子2（Nrf2）核转位对永生化黑素细胞株B10BR细胞生物学活性的影响。方法构建电转染野生型和nls缺失型nrf2质粒载体至B10BR细胞，结合叔丁基氢醌（TBHQ）和（或）H2O2处理，Western印迹检测Nrf2，his标签蛋白表达，MTT法测定细胞活性，多巴氧化法检测酪氨酸酶活性，Transwell法测定转染细胞的迁移。结果TBHQ处理的转染组细胞核中Nrf2表达均显著高于TBHQ未处理组（P〈0．01）。转染质粒组间及其与未处理组间细胞酪氨酸酶活性差异均无统计学意义（P〉0，05），H2O2处理使2个质粒转染组酪氨酸酶活性较单独质粒转染组显著下降（pcDNA-nrf2，P〈0．05；pcDNA-nrf2△nls，P〈0．05）。相对于TBHQ未添加H2O2 处理的nrf2组，TBHQ显著增强H2O2处理的野生型nrf2质粒转染细胞酪氨酸酶活性（P〈0．05）；相对于TBHQ未添加H2O2处理的nls组，nls缺失型nrf2质粒转染组细胞酪氨酸酶活性差异无统计学意义（P〉0．05）。相对于nrf2未转染组，H2O2对野生型nrf2质粒转染组细胞活性的影响无统计学意义（P〉0．05）；相对于两组的未处理组，H2O2引起未转染组及nls缺失型质粒转染组细胞活性显著下降（未处理组，P〈0．05；pcDNA-nrf2Anls，P〈0．01）。TBHQ可以保护野生型nrf2质粒转染细胞免受H2O2引起的氧化损伤，对nls缺失型质粒转染组细胞无明显保护作用。各处理组黑素细胞迁移差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Nrf2核转位异常影响黑素细胞的抗氧化能力、黑素细胞活性及酪氨酸酶活性。TBHQ可以激活野生型Nrf2在细胞核中表达水平，增强酪氨酸酶和黑素细胞活性，进而提高细胞的抗氧化水平。

砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响

目的探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,Ha Ca T)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响。方法将Ha Ca T细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h。采用流式细胞仪检测Ha Ca T细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-time quantitative PCR)检测Ha Ca T细胞中Nrf2、Keap1 m RNA的表达水平。结果与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后Ha Ca T细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组相比,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均增高,而3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后Ha Ca T细胞中Nrf2 m RNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,Ha Ca T细胞Nrf2 m RNA的表达水平均呈下降趋势。与对照组相比,1.30、3.25μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈波动性上升,3.25μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50μmol/L亚砷酸钠染毒组Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时Ha Ca T细胞中Keap1 m RNA的表达水平呈上升趋势。结论亚砷酸钠可抑制Ha Ca T细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关。

嗜水气单胞菌感染影响中国大鲵核因子45和90表达

为研究中国大鲵核因子45(NF45)和90(NF90)对嗜水气单胞菌感染的免疫响应,通过腹腔注射的方式感染健康的中国大鲵,并在感染后0、12、24、36和48 h分别收集大鲵不同组织,通过qPCR检测NF45和NF90在各个组织中的表达情况.结果显示,核因子NF45和NF90在正常大鲵的所测组织中均有表达,其中NF45基因的相对表达量在大鲵肌肉、胃、心脏和脾脏中保持较高水平,而在肝脏中的表达水平最低,并且心脏中的相对表达量约为肝脏中的5.57倍;而NF90基因的相对表达量在大鲵心脏、皮肤、肌肉和脾脏中保持较高水平,而在肠中的相对表达水平最低,其中心脏中的相对表达量约为肠中的6.27倍.在接种嗜水气单胞菌24 h后,大鲵皮肤、肝、脾和肾中的NF45相对表达水平明显上升,并且NF45在皮肤中的相对表达量是肠的6.55倍;而NF90的相对表达量在接种后也明显上升,并且在脾脏中的相对表达量是肠的9.28倍.NF45和NF90在皮肤、脾、肾和肝中的相对表达量随时间变化均呈现先升高后下降的趋势.在肝和肾组织中,NF45和NF90基因的相对表达量均在大鲵染菌24 h时达到最大值,而在脾组织中,均在大鲵染菌36 h时达最大值.在皮肤组织中,NF45的相对表达量在大鲵染菌24 h时达到最大值,而NF90在大鲵染菌12 h时达最大值.本研究表明在嗜水气单胞菌的刺激下,NF45和NF90均作出积极响应,结果可为研究NF45和NF90调控大鲵免疫响应机制提供重要的理论基础.(图6表1参49)

硫辛酸的抗氧化应激作用在帕金森病中的展望

机体内活性氧蓄积,超出正常代谢能力,是导致细胞变性、坏死,造成组织损伤的重要原因。而针对氧化损伤,机体存在很多对抗机制,抗氧化应激通路——核因子红系2 p45相关因子2/血红素氧合酶1(Nrf2/HO-1)通路是其中重要的一条。机体内抗氧化应激物质可以通过减少胞质中的Nrf2降解来促进其核内转导,升高下游HO-1的水平,进而发挥抗氧化应激作用。硫辛酸具有极佳的抗氧化性,可以显著增强Nrf2的核内转导及上调HO-1,对多种细胞有保护作用。因其具有良好的脂溶性和水溶性,容易通过血脑屏障,故其对神经元细胞尤其是多巴胺能神经元的保护作用值得探索和期待。

右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤小鼠的保护作用及Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤小鼠的保护作用及核转录因子红细胞系2p45相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的影响。方法:将100只C57BL/6小鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、地塞米松组(100 mg·kg-1)、右美托咪定低(40 mg·kg-1)、高(80 mg·kg-1)剂量组。除正常对照组外,其余各组建立高氧诱导急性肺损伤模型,并于造模成功后腹腔注射相应药物,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水,qd,持续7 d。实验结束后,检测小鼠肺/体比值、肺损伤评分、血氧分压(Pa O2),小鼠肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,胱天蛋白酶-1(caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)蛋白水平。制作肺部HE染色切片,观察肺损伤情况。结果:与正常对照组比较,模型组肺/体比值、肺损伤评分、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平、IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达水平明显升高,Pa O2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,右美托咪定组肺/体比值、肺损伤评分、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平、IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达水平明显降低,Pa O2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且呈剂量相关性;右美托咪定低剂量组与地塞米松组比较差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组肺泡组织结构正常,无炎症细胞浸润、无胶原蛋白沉淀;模型组、右美托咪定低剂量组肺泡壁明显增厚、破裂,可见中性细胞及少量嗜酸性细胞浸润,肺间质可见较多胶原蛋白沉淀;右美托咪定高剂量组及地塞米松组肺泡结构基本正常,有少量中性细胞侵润,几乎无胶原蛋白沉淀。结论:右美托咪定对高氧诱导急性肺损伤小鼠的保护作用与抑制Nrf2 mRNA及蛋白表达水平表达,进而抑制IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达有关。

人参皂苷Rd通过下调Nrf2表达调控H460细胞的增殖和凋亡

核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor 2,Nrf2)是细胞应对外界应激的主要调控因子,通过调控一系列细胞保护酶,维持细胞稳态。然而,在许多肿瘤细胞中Nrf2过度激活,导致肿瘤细胞获得增殖优势并产生化疗耐药,因此,靶向抑制Nrf2是肿瘤增敏治疗的一种新思路。人参皂苷Rd是人参皂苷中的重要活性成分,具有显著的抗肿瘤作用。本研究以不同浓度的人参皂苷Rd处理人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460细胞,利用CCK-8法检测细胞活力;倒置显微镜观察H460细胞的形态变化;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;RT-qPCR和Western印迹检测的Nrf2及其下游调控基因的表达情况;此外通过转染Nrf2-siRNA下调H460细胞中Nrf2的表达,观察其对人参皂苷Rd增敏的影响。结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rd能够抑制H460细胞增殖活力,诱导细胞G0/G1期阻滞,促进细胞凋亡,具有剂量依赖性(P<0.05);此外,人参皂苷Rd能够下调Nrf2,醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase,NQO1],谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate--cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和调节亚基(glutamate--cysteine ligase regulatory subunit,GCLM)的mRNA和蛋白质水平,同时增强H460细胞对化疗药的敏感性(P<0.05),而转染Nrf2-siRNA后,人参皂苷Rd的增敏作用减弱。表明人参皂苷Rd可以抑制非小细胞肺癌H460细胞活性并增敏化疗,其机制可能是通过抑制Nrf2信号通路来实现。

雷公藤红素治疗变应性鼻炎大鼠的机制研究

目的:研究雷公藤红素对大鼠变应性鼻炎(AR)的治疗作用并初步探讨相关作用机制。方法:构建大鼠AR模型,测定大鼠第1天、第4天和第7天的行为学特征改变、鼻黏膜呼吸区组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平;测定鼻黏膜呼吸区组织核因子E2p45相关因子2(NRF2)的核内蛋白表达及谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的浆蛋白表达。结果:AR大鼠第1、4、7天的行为学特征改变显著(P<0.01),鼻黏膜呼吸区组织SOD、GSH、GSH-PX降低,MDA升高;NRF2的核内蛋白表达降低,GCLC的浆蛋白表达降低。雷公藤红素低剂量治疗组和高剂量治疗组能不同程度改善上述指标的变化,同时提高了鼻黏膜呼吸区组织NRF2的核蛋白表达和GCLC的浆蛋白表达。结论:雷公藤红素能改善AR大鼠的症状,其机制可能与提高鼻黏膜呼吸区组织NRF2的核蛋白表达和GCLC的浆蛋白表达相关。

前列腺癌Nrf2表达临床意义

目的探讨核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子2(nuclear factor erythroid-2related factor 2,Nrf2)在良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)和前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织中的表达及临床意义。方法收集2015-01-10-2016-01-10武汉市第一医院泌尿外科就诊的前列腺癌患者80例,设为前列腺癌组。选择同院同期前列腺增生患者52例,设为对照组。免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)检测前列腺癌和前列腺增生组织中Nrf2的表达情况;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测Nrf2mRNA和蛋白的表达水平;分析前列腺癌患者肿瘤组织中Nrf2的表达与患者年龄、肿瘤大小、血清前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)含量、Gleason评分、临床分期、是否淋巴结处转移和是否化疗耐药的关系;培养前列腺癌细胞系DU145,采用siRNA敲减DU145细胞中Nrf2的表达,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞对多西他赛(docetaxel,DTX)等化疗药物的敏感性。结果前列腺癌组织中Nrf2mRNA相对表达水平为3.61±1.75,高于前列腺增生组织的1.08±0.78,差异有统计学意义,t=3.669,P=0.003 2;前列腺癌组织中Nrf2蛋白相对表达水平为2.55±1.03,高于前列腺增生组织的0.73±0.54,差异有统计学意义,t=3.513,P=0.005 6。前列腺癌组织Nrf2阳性率为71.25%(57/80)高于前列腺增生组织7.69%(4/52),差异有统计学意义,χ2=51.217,P<0.001。前列腺癌患者肿瘤组织中Nrf2阳性率与血清PSA含量(χ2=19.985,P=0.001)、肿瘤大小(χ2=4.665,P=0.031)、Gleason评分(χ2=9.937,P=0.002)、临床分期(χ2=11.446,P=0.003)和有无淋巴结转移(χ2=6.572,P=0.01)有关联,与患者年龄无关(χ2=1.993,P=0.448)。62例患者进行以DTX为基础的化疗,其中化疗敏感37例,化疗耐药25例。化疗敏感组Nrf2阳性20例,阴性17例,阳性率为54.1%,化疗耐药组Nrf2阳性20例,阴性5例,阳性率为80.0%,两组差异有统计学意义,χ2=4.387,P<0.036。siNrf2组24、48和72hDTX、奥沙利铂和5-氟尿嘧啶(5-FU)的IC50明显低于siCtrl组,差异均有统计学意义,均P<0.01。结论 Nrf2在前列腺癌组织中的表达升高,可能参与前列腺癌的发生发展及化疗耐药的产生,可作为肿瘤治疗的潜在靶点。

NRF2与MRP2在原发性胆囊癌中的表达

目的 检测核因子E2 p45相关因子2（Nuclear factor-erythroid 2 p45-related factor 2,NRF2）与多药耐药相关蛋白2（multidrug resistance-associated protein 2,MRP2）在原发性胆囊癌组织中的表达,探讨其在胆囊癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测59例原发性胆囊癌组织中NRF2和MRP2的蛋白表达水平.结果 原发胆囊癌组织中NRF2和MRP2表达的强阳性率分别为76.3%和74.6%.随着转移程度、Nevin分级以及病理分级的增加,NRF2和MRP2的强阳性表达率增加,且差异具有统计学意义（P＜0.05）;两者的强阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性;NRF2和MRP2表达之间具有相关性（r=0.589,P＜0.05）.结论 NRF2和MRP2在原发性胆囊癌组织存在高表达且具有相关性,在胆囊癌的发生、发展中发挥作用.

砷致HaCaT细胞恶性转化过程中NRF2对自噬的调控作用

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)致永生化人皮肤角质形成(HaCaT)细胞恶性转化过程中核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子-2(NRF2)对自噬的调控作用。方法采用细胞培养方法, 以含0.0(对照组)和1.0 μmol/L NaAsO2(染砷组)的DMEM高糖培养基长期培养HaCaT细胞至第35代, 构建细胞恶性转化模型, 收集细胞恶性转化模型建立过程中对照组和染砷组的第0、1、7、14、21、28、35代细胞;分别采用NRF2干扰RNA(siRNA)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂Rapamycin处理染砷组的第35代恶性转化HaCaT细胞(T-HaCaT细胞)。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测对照组、染砷组不同代次HaCaT细胞及各处理组T-HaCaT细胞内NRF2, PI3K-蛋白激酶B(Akt)-mTOR信号通路相关指标PI3K、Akt、mTOR、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR, 自噬相关蛋白p62、Beclin1、微管相关蛋白1轻链(LC)3Ⅰ、LC3Ⅱ的蛋白表达情况。结果染砷组不同代次HaCaT细胞中NRF2蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR比值比较, 差异均有统计学意义(F = 9.371、16.035、15.932、27.739, P均<0.05);且NRF2蛋白表达、p-mTOR/mTOR比值均高于对照组同代细胞(P均<0.05)。与同代HaCaT细胞比较, T-HaCaT细胞中NRF2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62蛋白表达均明显较高, Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ比值均明显较低(P均<0.05);NRF2沉默的T-HaCaT细胞较其对照siRNA(Con siRNA)组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高, NRF2、p-mTOR、p62蛋白表达均较低(P均<0.05);LY294002处理组T-HaCaT细胞较其非处理组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高, NRF2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达均较低(P均<0.05);Rapamycin处理组T-HaCaT细胞较其非处理组Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均较高, p-mTOR蛋白表达较低(P均<0.05)。结论在砷致HaCaT细胞恶性转化过程中, NRF2可以作为自噬重要调节机制PI3K-Akt-mTOR中PI3K-Akt下游、mTOR上游因子, 通过激活mTOR来调控自噬, 而自噬的这一异常表现, 最终可能引起细胞的恶性转化。