核因子蛋白90敲减对肝癌细胞增殖影响及机制的研究

目的探究核因子蛋白90(NF90)敲减对肝癌细胞增殖影响并探讨其可能机制。方法将靶向NF90的寡核苷酸链克隆至PLKO质粒后,包装出靶向敲减NF90的慢病毒shRNA(带有绿色荧光标签及G418抗性)。将肝癌细胞QGY-7703、SMMC-7721分为对照组及干扰组,分别感染包含随机序列shRNA和靶向NF90 shRNA的病毒液。48 h后流式分选出带有绿色荧光的阳性细胞,G418筛选阳性单克隆细胞株,Western blotting鉴定NF90的蛋白表达水平,最终在对照组中选取一株细胞命名shRNA-ns,在干扰组中选取NF90敲减效果良好且稳定的两株细胞命名为shRNA-1、shRNA-2。采用CCK-8法检测各株细胞的增殖情况,克隆形成试验分析各株细胞的克隆形成能力。质谱分析预测NF90的相关结合蛋白,内、外源免疫共沉淀确定NF90与多聚ADP核糖合成酶(PARP1)的关系,荧光定位分析NF90与PARP1在细胞内的定位情况。结果 shRNA-1、shRNA-2细胞中的NF90表达水平显著低于shRNA-ns细胞,表明包装的慢病毒敲减NF90效果良好。与shRNA-ns细胞比较,shRNA-1、shRNA-2细胞的生长缓慢,克隆形成数减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。NF90与PARP1在细胞内相互结合并且共定位于细胞核。结论敲减NF90可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与PARP1相互作用有关。

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察微小RNA-382-5p (miR-382-5p)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90(NF90)的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达(P <0. 05),过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡(P <0. 01)。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miRNC组明显降低(P <0. 01)。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3'非翻译区存在靶向关系(P <0. 01)。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。

ILF2及NF90在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨白细胞介素增强结合因子2(Interleukin enhancer-binding factor 2,ILF2)及核因子90(Nuclear factor 90,NF90)在口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及临床意义。方法使用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)及实时荧光定量检测(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测ILF2及NF90在OSCC和正常口腔黏膜(Normal oral mocusa,NOM)组织中的表达水平,并进一步分析二者表达情况与OSCC患者临床病理特征以及预后之间的关系;使用Oncomine及GEPIA数据库分析二者在不同组织中的表达情况。结果与NOM组织对比,ILF2及NF90在OSCC组织中高表达(P<0.05),二者在OSCC组织中的表达具有相关性(φ=0.540,P<0.001);Oncomine数据库结果显示ILF2及NF90同样在OSCC组织中高表达(P<0.05);GEPIA数据库结果显示ILF2及NF90在OSCC中的表达呈正相关(r=0.600,P<0.001)。ILF2及NF90的表达情况与OSCC的肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结是否转移相关(P<0.05);生存分析显示ILF2和NF90高表达的患者总生存期较短,且ILF2及NF90因子的高表达和肿瘤分化程度是影响患者总生存期的独立危险因素(P<0.05)。结论ILF2和NF90在OSCC中高表达,且两者具有相关性,对OSCC患者的预后有不良影响,提示二者可以作为OSCC发生发展新的诊断标志物及预后评估指标。

嗜水气单胞菌感染影响中国大鲵核因子45和90表达

为研究中国大鲵核因子45(NF45)和90(NF90)对嗜水气单胞菌感染的免疫响应,通过腹腔注射的方式感染健康的中国大鲵,并在感染后0、12、24、36和48 h分别收集大鲵不同组织,通过qPCR检测NF45和NF90在各个组织中的表达情况.结果显示,核因子NF45和NF90在正常大鲵的所测组织中均有表达,其中NF45基因的相对表达量在大鲵肌肉、胃、心脏和脾脏中保持较高水平,而在肝脏中的表达水平最低,并且心脏中的相对表达量约为肝脏中的5.57倍;而NF90基因的相对表达量在大鲵心脏、皮肤、肌肉和脾脏中保持较高水平,而在肠中的相对表达水平最低,其中心脏中的相对表达量约为肠中的6.27倍.在接种嗜水气单胞菌24 h后,大鲵皮肤、肝、脾和肾中的NF45相对表达水平明显上升,并且NF45在皮肤中的相对表达量是肠的6.55倍;而NF90的相对表达量在接种后也明显上升,并且在脾脏中的相对表达量是肠的9.28倍.NF45和NF90在皮肤、脾、肾和肝中的相对表达量随时间变化均呈现先升高后下降的趋势.在肝和肾组织中,NF45和NF90基因的相对表达量均在大鲵染菌24 h时达到最大值,而在脾组织中,均在大鲵染菌36 h时达最大值.在皮肤组织中,NF45的相对表达量在大鲵染菌24 h时达到最大值,而NF90在大鲵染菌12 h时达最大值.本研究表明在嗜水气单胞菌的刺激下,NF45和NF90均作出积极响应,结果可为研究NF45和NF90调控大鲵免疫响应机制提供重要的理论基础.(图6表1参49)

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。