丙泊酚对脂多糖诱导急性肾损伤小鼠的保护作用及Nrf2/HO-1/NLRP3通路的影响

目的:探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导急性肾损伤(AKI)小鼠的保护作用及核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/HO-1/NLRP3)通路的影响。方法:40只小鼠随机分为正常对照组、AKI模型组、丙泊酚组、Brusatol组、丙泊酚+Brusatol组。分析检测小鼠尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、肾脏系数、血清中氧化应激及肾组织中炎症因子水平、Nrf2/HO-1/NLRP3通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组相比,AKI模型组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白升高,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白降低(P<0.05)。与AKI模型组相比,丙泊酚组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白降低,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白升高(P<0.05);Brusatol组则相反。与丙泊酚组相比,丙泊酚+Brusatol组小鼠肾脏系数、尿蛋白、血清BUN、Scr、MDA、肾组织损伤评分、肾组织炎症因子、NLRP3蛋白升高,血清SOD、GSH、肾组织Nrf2、HO-1蛋白降低(P<0.05)。结论:丙泊酚可改善LPS诱导的小鼠急性肾损伤,可能是通过激活Nrf2/HO-1/NLRP3通路实现的。

NLRP3炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病的关系

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病(T2DM)的关系。方法采用ELISA法测定30例老年T2DM患者、30例健康体检者(对照组)血浆中IL-1β、IL-18和IL-37水平,分别采用定量聚合酶链反应(PCR)技术和ELISA技术检测糖尿病患者单核细胞来源的巨噬细胞(MDM)表达NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和IL-1βm RNA水平及葡萄糖诱导MDM分泌IL-1β和TNF-α的水平。结果老年T2DM患者血浆中的IL-1β和IL-18水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而IL-37无统计学差异;T2DM患者MDM中NLPR3、ASC和IL-1βm RNA表达水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05);且经葡萄糖刺激后IL-1β、TNF-α水平显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 NLRP3炎性体相关分子的表达与炎性体活化可能参与老年T2DM的炎症反应过程。

根皮素对2型糖尿病肾病小鼠的肾保护作用及机制

为探究根皮素对2型糖尿病肾病小鼠肾损伤的分子保护作用及潜在机制,将小鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、阳性药物组(二甲双胍500 mg/kg)、根皮素低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg·d)。造模成功后,各组小鼠灌胃给予相应药物,12周后,观察肾脏肥大指数、肾脏病理形态学变化,测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和尿β2-微球蛋白(β2-MG)、血清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)等指标,并检测肾组织丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达。结果显示:与模型组比较,根皮素中、高剂量组小鼠肾脏肥大指数极显著减小(P<0.01);HE染色和Masson染色见肾小球体积明显减小、系膜增生明显减少,肾小球和肾间质纤维化明显减轻;血BUN、Scr、IL-1β、IL-18和肾组织MDA含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ι(CollagenΙ)、NLRP3、IL-1β和Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织GSH-Px活性、Nrf2、HO-1、钙粘附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达显著升高(P<0.05)。结果表明:根皮素能保护2型糖尿病肾病小鼠肾功能改善肾纤维化,可能与调控Nrf2/HO-1/NLRP3通路改善氧化应激与炎症反应有关。

成纤维细胞生长因子21对非酒精性脂肪性肝炎的作用及机制的研究

目的:探索成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及其机制。方法:用浓度为500μmol/L的油酸和棕榈酸混合物(摩尔比=2:1)诱导HepG2细胞建立NASH细胞模型,实验分为5组:正常对照组(Control)、模型组(Model)、低剂量FGF-21组(LFGF-21,0.5μmol/L)、中剂量FGF-21组(MFGF-21,1.0μmol/L)和高剂量FGF-21组(HFGF-21,2.0μmol/L),油红O染色法观察细胞内脂滴,全自动生化分析仪检测细胞内ALT、AST、TC、TG的水平,Real-time PCR和Western blot分别检测细胞内核因子E2相关因子-2(Nrf-2)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)的m RNA和蛋白水平,ELISA检测IL-1β、TNF-α水平。结果:NASH细胞造模成功,油红O染色结果显示对照组细胞无明显脂滴蓄积,模型组细胞内可见大量橘红色脂滴,并出现融合现象。不同浓度FGF-21治疗组的细胞内红色脂滴明显减少,并呈剂量依赖性。模型组ALT、AST、TC、TG、IL-1β、TNF-α和NLRP3的水平均高于对照组(P<0.05),FGF-21治疗组其水平低于模型组(P<0.05)。模型组Nrf2的水平低于对照组(P<0.05),FGF-21治疗组Nrf2的水平高于模型组(P<0.05)。结论:FGF-21通过促进Nrf-2、抑制NLRP3减少非酒精性脂肪性肝炎细胞的脂质沉积,减轻炎症反应,对NASH有保护作用。

肺曲菌病患者外周血中NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路的表达及意义

目的:研究NLRP3-RIP2-NF-κB信号通路在肺曲菌病患者外周血中的表达水平,及其介导炎症反应的作用机制。方法:选取2016年5月~2019年10月收治的肺曲菌病患者62例为研究对象,分为侵袭性肺曲霉菌病组(IPA组)24例和非侵袭性肺曲霉菌病组(NIPA组)38例,并选取同期20例非真菌感染者作为对照组。采用RT-PCR法检测三组NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA表达水平;Western Blot法检测NLRP3、RIP2、NF-κB蛋白水平;ELISA法检测炎症介质hs-CRP、IL-6水平,对三组上述指标进行比较,并采用Spearman相关性分析分析NLRP3 mRNA与RIP2、NF-κB、IL-6、hs-CRP之间的相关性。结果:(1)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(2)IPA组、NIPA组NLRP3、RIP2、NF-κB蛋白表达水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(3)IPA组、NIPA组IL-6、hs-CRP水平均高于对照组,且IPA组高于NIPA组(P<0.05)。(4)相关性分析发现外周血中NLRP3 mRNA水平与下游基因RIP2、NF-κB mRNA水平呈正相关(相关指数r=0.676,P<0.001;r=0.513,P<0.001);与炎症介质IL-6、hs-CRP及NLRP3水平呈正相关(相关指数r=0.467,P<0.001;r=0.621,P<0.001)。结论:肺曲菌病患者外周血中NLRP3、RIP2、NF-κB mRNA和蛋白表达均升高,NLRP3可能通过RIP2依赖的NF-κB信号通道介导肺曲菌病患者致炎过程。

尼莫地平联合多奈哌齐治疗老年血管性痴呆患者疗效分析

目的探讨尼莫地平联合多奈哌齐对老年血管性痴呆(VD)患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的影响。方法将124例老年VD患者随机分为联合组和尼莫地平组,每组62例。尼莫地平组给予尼莫地平治疗,联合组在尼莫地平组基础上加用多奈哌齐。比较2组简易智能状态检查量表(MMSE)评分、神经功能缺损评分、长谷川痴呆量表(HDS)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分;比较2组巴氏指数(BI)和日常生活能力量表(ADL)评分;比较2组治疗前后血流动力学指标及血清IGF-1、Lp-PLA2、NLRP3的变化。结果 2组患者治疗后MMSE、HDS、MoCA、ADL、BI评分及血清IGF-1水平均升高,神经功能缺损评分、全血黏度、血浆黏度、红细胞比容、纤维蛋白原、Lp-PLA2及NLRP3相对表达量水平均降低,差异有统计学意义(P <0.05)。联合组上述指标变化幅度大于尼莫地平组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论尼莫地平联合多奈哌齐治疗老年VD患者疗效确切,能有效改善患者痴呆状态、日常生活质量、认知功能和血管功能。

肺炎克雷伯菌肺炎对小鼠NLRP3炎症通路的影响

目的建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,并探究肺炎克雷伯菌感染对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症通路的影响。方法给小鼠气管内接种肺炎克雷伯菌,观察小鼠死亡率;接种肺炎克雷伯菌48 h后,取小鼠肺部匀浆涂板检查菌落数;取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)离心,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测无细胞上清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-6、趋化因子配体1(KC)的水平,迈格林华-姬姆萨染色计数细胞沉淀中的中性粒细胞数;取肺部病理切片并进行苏木精-伊红(HE)染色观察肺部病变;提取肺部总蛋白,蛋白质印迹法检测NLRP3、核因子(NF)-κB p65、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、人白介素-1β前体(pro-IL-1β)表达水平。结果成功建立肺炎克雷伯菌肺炎小鼠模型,小鼠在144 h内死亡率达到百分之百,肺部有大量细菌负载,肺部中性粒细胞浸润增加,支气管肺泡灌洗液中IL-1β、TNF-α、IL-6、KC分泌升高,肺组织IL-1β、p-p65表达升高。结论通过将肺炎克雷伯菌液接种到小鼠肺部的方法所建立的肺炎小鼠模型稳定性高、可重复性好,肺部NLRP3炎症通路反应强烈。

柚皮苷对脓毒症引起的急性肺损伤小鼠保护作用的研究

目的 研究柚皮苷对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法 通过腹腔注射10 mg·kg^(-1)脂多糖建立脓毒症急性肺损伤小鼠模型。将小鼠随机分为对照组(注射等量磷酸缓冲液)、模型组(脓毒症急性肺损伤小鼠模型)、柚皮苷组(脂多糖造模前1 h腹腔注射50 mg·kg^(-1)柚皮苷)、BzATP组(脂多糖造模前1 h腹腔注射50 mg·kg^(-1)柚皮苷+5 mg·kg^(-1) BzATP)。造模后24 h取肺组织,计算肺系数;用酶联免疫吸附实验检测肺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用蛋白质印迹法检测肺组织嘌呤能2X7受体(P2X7R)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组、柚皮苷组和BzATP组的肺系数分别为(6.26±0.31)、(9.09±1.02)、(7.02±0.45)和(8.79±0.55)mg·g^(-1);TNF-α含量分别为(56.41±0.35)、(174.68±1.58)、(85.23±1.68)和(162.97±3.42)pg·mL^(-1);IL-1β含量分别为(44.18±7.37)、(119.91±17.16)、(85.41±2.14)和(104.57±3.39)pg·mL^(-1);IL-10含量分别为(50.82±2.89)、(28.31±1.86)、(42.82±1.98)和(25.19±1.69)pg·mL^(-1);P2X7R表达水平分别为0.45±0.16、1.33±0.10、0.64±0.09和1.05±0.18;NF-κB表达水平分别为0.38±0.19、1.29±0.09、0.57±0.11和0.92±0.07;NLRP3表达水平分别为0.72±0.14、1.28±0.23、0.75±0.09和1.27±0.23。对照组、柚皮苷组上述指标与模型组比较,BzATP组上述指标与柚皮苷组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论 柚皮苷可通过抑制P2X7受体介导NF-κB/NLRP3信号通路,减轻脓毒症小鼠急性肺损伤。