Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1-核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件抗氧化应激通路在多发性硬化中作用的研究进展

多发性硬化(MS)是一种慢性炎症性疾病,主要是由T淋巴细胞引起,可使中枢神经系统产生氧化应激反应,导致脱髓鞘等病理改变。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)抗氧化应激通路是体内最重要的内源性抗氧化应激通路,激活该通路可启动下游解毒酶、抗氧化蛋白,参与清除氧自由基,维持细胞内氧化还原系统平衡,从而对神经退行性疾病起保护作用。通过药物或各种康复治疗手段激活该Keap1-Nrf2/ARE通路,减轻MS疾病进展的作用及未来MS治疗靶点是目前研究热点。

香豆素通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤

目的 探讨香豆素通过调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap)1/核因子E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤。方法 大鼠随机分为假手术(Sham)组、脑缺血-再灌注损伤模型(CIRI)组,低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高剂量(10 mg/kg)香豆素组,Keap1/Nrf2/ARE信号通路抑制剂组(ML385)组及ML385+高剂量香豆素组,脑缺血2 h、再灌注24 h后采用Longa5分制法评估大鼠神经行为评分;2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量大鼠脑梗死体积;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑皮质组织病理学变化;Western印迹检测大鼠脑皮质组织中Keap1/Nrf2/ARE信号通路相关因子[Keap1、Nrf2、血红素氧合酶(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)1]蛋白水平。结果 与Sham组比较,CIRI组神经行为评分、脑梗死体积,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,Keap1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞可见明显病理学改变。与CIRI组比较,低、中、高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积及脑皮质组织中Keap1蛋白减少,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白增加,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度显著减轻;ML385组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度加重。与高剂量香豆素组比较,ML385+高剂量香豆素组神经行为评分、脑梗死体积增加,脑皮质组织中胞核Nrf2/Nrf2及HO-1、NQO1蛋白减少,差异有统计学意义(P<0.05),且神经细胞损伤程度有所加重。结论 香豆素可减轻脑缺血-再灌注大鼠神经损伤,可能通过激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路而实现。

Keap1/Nrf2/ARE信号通路调控脑出血后氧化应激的研究进展

脑出血是一种常见的、严重的脑卒中亚型,具有较高的发病率和死亡率,多数患者伴有不同程度的神经功能障碍,给全球带来了重大的健康和社会经济问题。脑出血急性期所诱发的氧化应激可引起机体发生氧化应激损伤,是引起继发性脑损伤的关键因素。研究表明,Keap1/Nrf2/ARE通路是最重要的抗氧化应激通路,该通路被激活后,可促进抗氧化应激酶的表达,从而减轻氧化应激损伤。现就Keap1/Nrf2/ARE通路改善脑出血后氧化应激损伤的研究进展进行综述,旨在为临床治疗脑出血患者提供新的治疗思路和客观依据。

Nrf2/Keap1/ARE信号通路和髓核细胞自噬的研究进展

近年来,核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1/抗氧化应答元件信号通路和细胞自噬之间的相互作用机制成为国内外的研究热点之一。泛素结合蛋白p62介导的自噬诱导对Nrf2活化、消除线粒体功能障碍和氧化应激至关重要。椎间盘退变是各种脊柱退行性疾病的病理基础,在退变的椎间盘中可以观察到不同水平的髓核细胞自噬。炎症、营养缺乏、低氧、压力和高糖等因素均能诱导髓核细胞自噬,但自噬在椎间盘退变中的确切作用尚存在争议。

山茶油调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对老年痴呆大鼠氧化应激损伤的影响

目的 探讨山茶油调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对老年痴呆(AD)大鼠氧化应激损伤的影响。方法 将大鼠随机分为空白组、AD组、山茶油低、中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组。空白组大鼠灌胃大豆油(1 ml/kg),模型组大鼠灌胃AlCl_(3)(110 mg/kg)+大豆油(1 ml/kg);山茶油低、中、高剂量组大鼠分别灌胃AlCl_(3)(110 mg/kg)+山茶油(1 ml/kg、2 ml/kg、4 ml/kg);盐酸多奈哌齐组大鼠灌胃AlCl_(3)(110 mg/kg)+盐酸多奈哌齐(1.75 mg/kg)。Morris水迷宫实验及跳台实验检测大鼠学习和记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化;试剂盒检测大鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性;Western blot检测大鼠脑组织中Keap1、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达情况。结果 与空白组比较,AD组大鼠海马组织神经细胞出现变形、坏死情况,且细胞数量减少,排列不规则,层次不清晰;大鼠潜伏时间及逃避潜伏时间明显延长(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及Keap1蛋白表达明显增加(P<0.05),SOD、GPx活性及Nrf2、HO-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与AD组比较,山茶油低、中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠海马组织病理学损伤均有良好改善;大鼠潜伏时间及逃避潜伏时间明显缩短(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及Keap1蛋白表达明显降低(P<0.05),SOD、GPx活性及Nrf2、HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 山茶油能够通过调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路发挥对AD大鼠氧化应激损伤的保护作用,同时也能减轻AD大鼠病情。

香豆素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对过氧化氢诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨香豆素调节Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的改善作用。方法 将人卵巢颗粒细胞株COV434分为空白组(正常培养)、模型组(0.5 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2))、香豆素组(0.5 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+320μmol·L^(-1)香豆素)、抑制药组(0.5 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+10μmol·L^(-1) Keap1/Nrf2/ARE通路抑制药compound 20c)、联合组(0.5 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)+320μmol·L^(-1)香豆素+10μmol·L^(-1) compound 20c)。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞光密度(OD)值;用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素-18(IL-18)水平;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用蛋白质印迹法检测细胞Keap1、Nrf2蛋白表达。结果 空白组、模型组、香豆素组、抑制药组和联合组的OD值分别为1.53±0.20、0.91±0.10、1.35±0.14、0.56±0.05和1.06±0.12;ROS水平分别为1.00±0.00、2.24±0.35、1.18±0.13、3.97±0.58和2.09±0.20;SOD水平分别为(73.43±9.76)、(43.32±5.88)、(71.54±8.76)、(27.64±3.12)和(52.46±6.45)U·mL^(-1);IL-18水平分别为(205.90±20.43)、(334.56±35.68)、(233.24±24.58)、(456.54±47.83)和(301.13±37.64)pg·mL^(-1);凋亡率分别为(5.96±0.69)%、(19.62±1.77)%、(8.89±0.97)%、(30.23±3.12)%和(17.65±1.07)%;Keap1蛋白表达水平分别为0.95±0.10、0.66±0.08、0.93±0.09、0.31±0.04和0.69±0.07;Nrf2蛋白水平分别为1.31±0.12、0.76±0.07、1.25±0.14、0.21±0.02和0.90±0.11。模型组上述指标与空白组比较,香豆素组、抑制药组上述指标与模型组比较,联合组上述指标与香豆素组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 香豆素可能通过上调Keap1/Nrf2/ARE信号通路对H_(2)O_(2)诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤起到改善作用。

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

目的:观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。方法:采用一次性灌胃给予56%(V/V)红星二锅头酒(12 mL·kg^(-1))建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,120只雄性ICR小鼠按体质量随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花-枳椇子1∶1组、葛花-枳椇子1∶2组、葛花-枳椇子2∶1组,每组15只。各给药组按10 mL·kg^(-1)预防性灌胃相应药物3 d,除空白组外,其余各组小鼠按12 mL·kg^(-1)分别灌胃给予二锅头酒,于酒后12 h处死小鼠,并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化响应元件(ARE)信号通路相关蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关各指标mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平,肝组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量显著升高(P<0.01);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,葛花-枳椇子2∶1组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低(P<0.01),肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低(P<0.01),GSH、SOD水平均显著升高(P<0.01);肝脏脂肪变损伤均减轻,显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达(P<0.01),显著下调Keap1mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用,其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路,恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关,从而有效遏制酒精性肝病的发展。

西格列汀联合甘精胰岛素治疗对2型糖尿病Nrf2及氧化应激的影响

目的研究西格列汀联合甘精胰岛素治疗对2型糖尿病患者核因子E2相关因子2(Nrf2)及氧化应激的影响。方法选取100例2型糖尿病患者,随机分为西格列汀组和甘精胰岛素联合西格列汀组,每组50例;另选取健康体检者50例作为对照组。西格列汀组采用西格列汀治疗,甘精胰岛素联合西格列汀组采用西格列汀联合甘精胰岛素治疗,收集两组患者治疗前后及对照组研究对象血液进行检测,观察三组血糖、血脂及血清Nrf2、抗氧化酶[谷胱甘肽S转移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、血红素氧合酶-1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)]水平,以及外周血单核细胞(PBMC)中HO-1/β-肌动蛋白信使核糖核酸(β-actinmRNA)表达率的差异。结果治疗前,西格列汀组及甘精胰岛素联合西格列汀组患者空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);且两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,西格列汀组及甘精胰岛素联合西格列汀组患者FPG、HbA1c、TG、TC、LDL-C水平均低于治疗前且甘精胰岛素联合西格列汀组的FPG、TG、TC、LDL-C、HbA1c水平分别为(6.41±0.62)mmol/L、(1.61±0.54)mmol/L、(4.65±0.72)mmol/L、(3.11±0.51)mmol/L、(6.93±0.52)%均低于西格列汀组的(6.93±0.54)mmol/L、(1.82±0.41)mmol/L、(4.98±0.88)mmol/L、(3.37±0.75)mmol/L、(7.63±0.64)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。西格列汀组和甘精胰岛素联合西格列汀组患者治疗前SOD、GST水平明显低于对照组,Nrf2、NQO1、HO-1水平及PBMC中HO-1/β-actinmRNA表达率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与本组治疗前比较,西格列汀组和甘精胰岛素联合西格列汀组患者治疗后血清Nrf2、HO-1、NQO1水平及PBMC中HO-1/β-actinmRNA表达率均明显降低,GST、SOD水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,甘精胰岛素联合西格列汀组患者较西格列汀组患者血清Nrf2、HO-1、NQO1水平及PBMC中HO-1/β-actinmRNA表达率降低更为明显,GST、SOD水平升高明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论西格列汀联合甘精胰岛素治疗较单用西格列汀治疗,对于2型糖尿病的血糖、血脂等改善效果更好。西格列汀联合甘精胰岛素治疗能够抑制2型糖尿病患者Nrf2的表达,其可能通过Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对2型糖尿病患者氧化应激产生影响,使Nrf2下游HO-1、NQO1等抗氧化酶活性受到调节,血清GST、SOD水平升高,值得临床注意。

基于p62/Keap1/Nrf2信号通路探讨香砂愈疡汤对胃溃疡大鼠氧化损伤的保护作用

目的:探讨香砂愈疡汤对乙酸诱导胃溃疡模型大鼠的保护作用并探讨其作用机制,为临床用药提供实验依据。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分成6组:空白组,模型组,香砂愈疡汤高、中、低剂量组,奥美拉唑组。通过乙酸诱导制作胃溃疡大鼠模型,香砂愈疡汤高、中、低剂量组分别灌胃28,14,7 g·kg^(-1)香砂愈疡汤溶液,奥美拉唑组将奥美拉唑以4.17 g·kg^(-1)溶于生理盐水后灌服,空白组和模型组以等体积生理盐水灌胃,1次/d。连续治疗14 d后处死大鼠,采血并取胃组织,测量并计算胃溃疡面积、胃溃疡抑制率,制作胃黏膜组织病理学切片并观察胃黏膜损伤状态;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中胃黏膜修复因子、胃组织相关蛋白水平、氧化应激因子、炎症因子等指标的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃黏膜组织中p62,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子2(Nrf2),血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组胃黏膜出现较为明显的病理变化,白细胞大量浸润;模型组溃疡面积显著增加(P<0.01),黏蛋白5AC(MUC5AC),表皮生长因子(EGF),超氧化物歧化酶(SOD)和前列腺素E2(PGE2)含量显著减少,胃泌素(GAS),8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG),丙二醛(MDA),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和环氧化酶-2(COX-2)含量显著增多(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Keap1含量明显增高(P<0.05),p62蛋白表达降低;与模型组比较,香砂愈疡汤高剂量组和奥美拉唑组细胞层次结构更加清晰,排列规则,形状规整;中、低剂量组对胃黏膜也均有一定的修复作用;香砂愈疡汤高、中剂量组可显著减少乙酸诱导胃溃疡大鼠模型的胃溃疡面积(P<0.01),提高溃疡抑制率,明显促进胃黏膜组织中MUC5AC和EGF的表达,降低GAS水平(P<0.05,P<0.01),显著降低8-OHdG和MDA水平,提高SOD活性(P<0.01),显著降低TNF-α和COX-2表达水平,增加PGE2的含量,升高胃黏膜组织Nrf2,HO-1蛋白表达(P<0.01),香砂愈疡汤高剂量组可明显降低Keap1的蛋白表达(P<0.05),升高p62蛋白表达量。结论:香砂愈疡汤治疗乙酸诱导胃溃疡模型大鼠效果显著,可有效减少溃疡面积,增加溃疡抑制率,保护溃疡组织。其作用机制可能与激活p62/Keap1/Nrf2信号通路,调控相关基因表达,从而改善炎症反应、调控氧化应激反应有关。

胞磷胆碱对脑出血小鼠Keap1/Nrf2/ARE信号通路的影响

目的 基于Kelch样ECH关联蛋白1/核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Keap1/Nrf2/ARE)信号通路探讨康复训练联合胞磷胆碱对小鼠脑出血模型的神经保护作用及潜在作用机制。方法 将C57BL/6雄性小鼠采用随机数字表法分为假手术组(假手术处理)、模型组(用Ⅶ型胶原酶右侧尾壳核脑出血模型)、胞磷胆碱组(模型+胞磷胆碱64 mg·kg^(-1))、康复训练组(康复训练)及联合组(模型+康复训练+胞磷胆碱64 mg·kg^(-1))。观察脑出血小鼠改良神经损害程度评分(mNSS),用比色法检测脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的表达,用蛋白质印迹法和逆转录-定量聚合酶链反应检测脑组织Keap1、Nrf2、血红素氧合酶-1 (HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白和mRNA的表达。结果 假手术组、模型组、胞磷胆碱组、康复训练组及联合组mNSS评分分别为0、(1.56±0.73)、(1.00±0.00)、(0.78±0.44)和(0.67±0.50)分,MDA水平分别为(6.93±0.92)、(22.97±0.77)、(19.26±1.73)、(13.21±0.78)和(7.25±0.97)nmol·mgprot-1,Keap1蛋白相对表达水平分别为0.79±0.03、1.02±0.04、0.95±0.10、0.90±0.09和0.86±0.05,Nrf2蛋白相对表达水平分别为0.94±0.12、0.71±0.08、0.90±0.07、0.98±0.12和1.33±0.25。模型组上述指标与假手术组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);胞磷胆碱组、康复训练组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组上述指标与胞磷胆碱组、康复训练组比较,除Keap1蛋白相对表达水平外,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 康复训练、胞磷胆碱均可减轻脑出血小鼠的神经功能缺损症状,作用机制可能为激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路发挥抗氧化应激作用,且联合使用效果最佳。

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎大鼠的影响及作用机制

目的:探讨半夏泻心汤通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路防治慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法:取SD大鼠,除12只正常组大鼠外,其余大鼠联合造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)模型,造模成功后随即分为模型组,维酶素组(VG,60 mg·kg^(-1))及半夏泻心汤高、中、低剂量组(280,140,70 mg·kg^(-1)),分别相当于半夏泻心汤生药量28,14,7 g·kg^(-1)。正常组及模型组大鼠给予等体积的蒸馏水,各治疗组给予相应容积的药物灌胃。治疗12周后采用苏木素-伊红(HE)染色法观察CAG大鼠胃黏膜病理变化情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CAG大鼠胃黏膜中Nrf2,醌氧化还原酶-1(NQO1),谷胱甘肽-S-转移酶(GST)蛋白及mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05),胃黏膜萎缩,甚至肠化。与模型组比较,维酶素组及半夏泻心汤高、中剂量组Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05),胃黏膜萎缩、肠化情况明显改善,且以高剂量组改善最为明显,但半夏泻心汤低剂量组作用不明显。结论:半夏泻心汤降低Nrf2的转录活性,关闭Nrf2信号通路,降低NQO1,GST的表达水平,实现正常的氧化-抗氧化平衡可能是其治疗CAG的作用机制之一。

补肾启智方调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路对缺血性卒中大鼠认知功能的影响

目的 研究补肾启智方通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路改善缺血性卒中大鼠认知功能的作用机制。方法 采用大脑中动脉栓塞法建立缺血性卒中大鼠模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾启智方低剂量组(3.6 g/kg)、补肾启智方高剂量组(14.4 g/kg),每组9只,连续灌胃14 d。采用Garcia JH法评价大鼠神经功能缺损程度;Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习和记忆能力;Western blotting法检测大鼠缺血侧海马组织中Keap1、Nrf2及血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白表达水平;TBA法、WST-1法、微板法分别检测大鼠缺血侧海马组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)含量;酶联免疫吸附测定法检测大鼠缺血侧海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)、干扰素诱导蛋白10(CXCL10)水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分降低(P<0.01),逃避潜伏期时间延长(P<0.01),目标象限停留时间及穿越平台次数均减少(P<0.05,P<0.01),海马组织中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平、MDA含量以及TNF-α、IL-18、CXCL10水平均升高(P<0.05,P<0.01),SOD活力、GSH含量降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾启智方高、低剂量组大鼠的神经功能评分升高(P<0.01),其中补肾启智方高剂量组大鼠逃避潜伏期时间缩短(P<0.01),目标象限停留时间及穿越平台次数均增多(P<0.05,P<0.01),补肾启智方低剂量组大鼠目标象限停留时间增多(P<0.05);补肾启智方高、低剂量组海马组织中Keap1蛋白表达、MDA含量及TNF-α、IL-18、CXCL10水平均降低(P<0.05,P<0.01),Nrf2蛋白表达水平及SOD活力、GSH含量均升高(P<0.05,P<0.01),补肾启智方高剂量组HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05)。与补肾启智方低剂量组比较,补肾启智方高剂量组大鼠神经功能评分升高(P<0.01),海马组织中Keap1蛋白表达水平、MDA含量及TNF-α、IL-18水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活力及GSH含量升高(P<0.05)。结论 补肾启智方改善缺血性卒中大鼠神经功能缺损及认知功能损伤的作用机制,可能与激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路、抑制海马氧化应激及炎症反应有关。

热补针法对类风湿关节炎寒证家兔膝关节滑膜Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号通路的影响

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔膝关节滑膜组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化元件(ARE)/血红素加氧酶(HO-1)信号转导通路的影响,从氧化应激角度探讨热补针法治疗RA的机制。方法:新西兰兔随机分为正常组、模型组、平补平泻组、捻转补法组、热补针法组,每组6只。通过卵蛋白诱导联合低温冷冻法复制RA寒证模型。平补平泻组、捻转补法组、热补针法组分别于双侧“足三里”施以平补平泻法、捻转补法及热补针法,每次30 min,1次/d,治疗7 d。治疗后观察各组家兔的一般情况;测定各组家兔膝关节周径、痛阈值;彩色超声诊断仪观察家兔膝关节滑膜变化并进行影像评级;HE染色观察各组家兔膝关节滑膜组织病理形态并评分;荧量定量PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织Keap1、Nrf2、HO-1、谷胱甘肽氧化酶(GSH-PX)1 mRNA表达水平;Western blot法检测各组家兔膝关节滑膜组织HO-1蛋白表达量。结果:正常组家兔摄食、饮水正常,活动灵敏,精神状态良好;模型组家兔肢体蜷缩,精神萎靡,脱毛严重,活动量小,饮食、饮水量少,皮肤青紫,双后腿蜷曲跛行,触之躲避行为明显。针刺后,各针刺组家兔较模型组一般情况均好转、活动量增大。与正常组比较,模型组家兔膝关节周径明显增大(P<0.05);与模型组比较,各针刺组膝关节周径缩小(P<0.05)。与正常组比较,模型组家兔的膝关节病理积分,滑膜组织Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),滑膜组织Keap1、GSH-PX1 mRNA表达量和痛阈降低(P<0.05)。与模型组比较,各针刺组痛阈,滑膜组织Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达升高(P<0.05),膝关节周径、病理积分及滑膜组织Keap1 mRNA表达量降低(P<0.05)。热补针法组痛阈,Nrf2、GSH-PX1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达高于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05),膝关节病理积分及滑膜Keap1 mRNA表达量低于平补平泻组和捻转补法组(P<0.05)。结论:热补针法可能通过调控Keap1-Nrf2/ARE/HO-1信号转导通路提高机体抗氧化应激能力,是其治疗RA的机制之一。

SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复模型中Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控研究

目的探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。方法(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、Sestrin2过表达组及空载体组,后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株,除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率,采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平,采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构,采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+Sestrin2过表达组,后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h,然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。结果(1)与OGD/R组相比,Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高(61.33%±1.15%vs.81.00%±3.00%),Bcl-2/Bax值明显升高(0.467±0.006 vs.0.880±0.010),Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低(1.089±0.033 vs.0.865±0.014;0.829±0.009 vs.0.350±0.007;0.967±0.017 vs.0.881±0.024),胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs.0.957±0.015),差异均有统计学意义(P<0.05);并且,Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整,Nrf2发生了明显的核移位。(2)与Sestrin2过表达组相比,鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs.0.627±0.035),Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高(0.994±0.020 vs.1.084±0.005;0.728±0.010 vs.0.906±0.022),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路,从而抑制线粒体分裂,减少细胞凋亡,减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。