MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织内Nrf2/HO-1/NQO1信号通路的影响

目的探讨皮肤再生医疗技术(MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织内核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO⁃1)/醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路的影响。方法选取90只SPF级Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后,采用随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO组和贝复新组,每组18只。其中空白组大鼠只做备皮处理,对照组大鼠建立急性创面模型,模型组、MEBO组和贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)药纱换药处理,贝复新组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶药纱换药处理,对比观察各组大鼠创面愈合率、组织病理学变化情况以及皮肤/创面组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO⁃1、NQO1蛋白与HO⁃1、NQO1 mRNA表达水平。结果干预第3天,各组大鼠创面愈合率尤以对照组最高、贝复新组次之(P均<0.05);干预第7、14天,各组大鼠创面愈合率尤以MEBO组最高、贝复新组次之(P均<0.05)。HE染色结果显示,干预第3、7、14天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内坏死细胞及炎性细胞逐渐减少,成纤维细胞与毛细血管逐渐增多,而模型组大鼠创面组织内坏死细胞和炎性细胞减少不明显;Masson染色结果显示,干预第3、7、14天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内胶原纤维由细少且紊乱逐渐趋于粗大且平整,而模型组大鼠创面组织内胶原纤维虽逐渐增粗、增多,但排列仍较紊乱。干预第7天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内MDA表达水平均明显低于模型组(P均<0.05);干预第3、7天,对照组、MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内SOD表达水平均明显高于模型组(P均<0.05)。干预第3、7天,MEBO组和贝复新组大鼠创面组织内Nrf2、HO⁃1、NQO1蛋白以及HO⁃1、NQO1 mRNA表达水平均明显高于空白组、对照组和模型组(P均<0.05),且干预第7天,MEBO组大鼠创面组织内Nrf2、HO⁃1蛋白以及HO⁃1 mRNA表达水平均明显低于贝复新组(P均<0.05)。结论MEBT/MEBO可能能够通过激活Nrf2/HO⁃1/NQO1信号通路减轻大鼠慢性难愈合创面氧化应激损伤,促进创面再生修复。

D-GalN/LPS诱导大鼠急性肝衰竭中髓过氧化物酶和 Nrf2/HO-1信号通路的变化

目的 探讨D-氨基半乳糖(D-GalN)/脂多糖(LPS)诱导急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路的变化及ALF的发生机制。方法 SD大鼠随机分为对照组和ALF组。ALF组:将D-GalN 800 mg/kg和LPS 8μg/只同时腹腔注射,于注射后6、12和24 h检测血清总胆红素(TBiL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。ELISA法检测血清MPO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,比色法测定MPO活性,RT-PCR检测肝组织Nrf2和HO-1的mRNA水平,Western blot法检测肝组织MPO、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果 与对照组比较,ALF组血清MPO水平于造模后6 h升高,12 h为最高,24 h开始下降(23.33±2.06 vs.33.00±3.16,65.75±7.02,53.92±5.63,P<0.05);血清TNF-α(11.30±3.26 vs.102.17±14.80,83.33±11.22,64.25±9.29,P<0.01)和IL-6(10.83±2.92 vs.89.25±10.86,77.33±8.02,65.58±7.31,P<0.01)于造模后6 h升高最明显,12 h后逐渐下降,差异均有统计学意义。ALF组6、12、24 h肝组织MPO活性高于对照组,差异均有统计学意义(15.5±1.51,28.08±4.65,22.92±1.93 vs.12.17±1.27,P<0.05);ALF组肝组织6、12、24 h Nrf2 mRNA(1.59±0.13,3.65±0.11,2.35±0.11 vs.1.04±1.01,P<0.01)和HO-1 mRNA(2.44±0.19,4.77±0.18,3.82±0.17 vs.1.12±0.06,P<0.01)水平高于对照组,差异均有统计学意义。ALF组肝组织MPO(4.10±0.70,9.77±1.15,7.23±0.40 vs.2.07±0.42,P<0.01)、Nrf2(4.03±0.80,9.03±0.50,6.07±0.47 vs.2.63±0.38,P<0.01)和HO-1(1.73±0.21,5.17±0.51,3.03±0.32 vs.0.97±0.21,P<0.01)蛋白表达于12 h达最高值,ALF组各时间点与对照组比较均差异有统计学意义。结论 MPO可能通过氧化应激和炎症反应影响Nrf2/HO-1信号通路,在ALF中发挥重要作用。

参七糖络丸激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路改善2型糖尿病小鼠骨骼肌氧化应激损伤

目的:基于核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/醌氧化还原酶1(NQO1)通路探讨参七糖络丸对2型糖尿病小鼠骨骼肌氧化应激损伤的干预作用及机制。方法:选取SPF级7周龄雄性db/db小鼠60只适应性饲养1周,按随机数字表法分为模型组、参七糖络丸低、中、高剂量组(19、38、76 g·kg^(-1)))和二甲双胍组(0.26 g·kg^(-1))灌胃,每组12只,另选12只同周龄雄性db/m小鼠为空白组。连续干预8周。检测小鼠空腹血糖(FBG);采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹血清胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(HOMA-ISI);口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、胰岛素耐量实验(ITT);生化试剂盒检测骨骼肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠骨骼肌组织病理学改变;免疫荧光法(IF)检测骨骼肌组织中活性氧(ROS)及4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、FINS、HOMA-IR均明显升高(P<0.05),HOMA-ISI降低(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,小鼠血糖在各时间节点均明显升高(P<0.05),糖耐量和胰岛素耐量明显受损;骨骼肌组织中SOD、GSH-Px活力明显降低(P<0.05),MDA、NADPH含量明显升高(P<0.05);骨骼肌组织肌纤维排列疏松,细胞核紊乱,见炎细胞浸润;骨骼肌组织中ROS、4-HNE表达水平明显升高(P<0.05);骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,二甲双胍组FBG、FINS、HOMA-IR均明显降低(P<0.05),HOMA-ISI升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,二甲双胍组小鼠血糖在各时间节点均明显降低(P<0.05);骨骼肌组织中SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);骨骼肌组织未见明显异常;骨骼肌组织ROS、4-HNE表达均减少(P<0.05);骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,参七糖络丸中、高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR均显著降低(P<0.05),HOMA-ISI均升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,参七糖络丸各剂量组均改善小鼠糖耐量和胰岛素耐量;参七糖络丸低剂量组GSH-Px活性明显升高(P<0.05),NADPH含量降低(P<0.05);参七糖络丸中、高剂量组SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);参七糖络丸各剂量组小鼠骨骼肌组织损伤均可见不同程度改善;参七糖络丸中、高剂量组ROS、4-HNE表达均降低(P<0.05);参七糖络丸中、高剂量组Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与参七糖络丸低剂量组比较,参七糖络丸高剂量组FBG、HOMA-IR明显降低(P<0.05),HOMA-ISI升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,参七糖络丸高剂量组显著改善小鼠糖耐量和胰岛素耐量;骨骼肌组织SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);骨骼肌组织未见明显异常;骨骼肌组织ROS、4-HNE表达均减少(P<0.05);骨骼肌组织Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:参七糖络丸能够显著改善T2DM小鼠IR,其机制与参七糖络丸激活骨骼肌中Nrf2/HO-1/NQO1通路,促进骨骼肌中抗氧化酶的表达,进而改善骨骼肌氧化应激损伤有关。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨四逆散对胆汁淤积性肝炎大鼠氧化应激反应的影响

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路探讨四逆散对胆汁淤积性肝炎大鼠肝脏氧化应激损伤的影响及其作用机制。方法:30只6周雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、四逆散低、高剂量组(2.5、5.0 g·kg^(-1))、熊去氧胆酸(UDCA,63 mg·kg^(-1))组,每组6只。各组大鼠连续给药7 d,第5天除对照组给予10 m L·kg^(-1)橄榄油外,其余各组均给予80 mg·kg^(-1)的α-萘异硫氰酸酯(ANIT);采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中胆汁淤积相关生化指标水平,以及肝组织中抗氧化因子的含量;通过苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中Nrf2、HO-1和醌氧化还原酶1(NQO1) mRNA与蛋白的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组血清各胆汁淤积生化指标水平、肝组织中抗氧化应激因子含量均显著升高(P<0.01),模型组肝细胞排列紊乱、门管区有明显的瘀血性坏死,炎性细胞浸润,小叶间胆管破坏等病理学改变;模型组大鼠肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA与蛋白相对表达水平均明显下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,四逆散高剂量组的血清各胆汁淤积生化指标水平、肝组织中抗氧化应激因子含量均显著降低(P<0.01);肝病理损伤较模型组有明显改善,表现为坏死面积明显缩小,炎性细胞浸润显著减少,小叶间静脉有少量瘀血;肝组织中Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA与蛋白相对表达水平均明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:四逆散能显著改善肝内胆汁淤积性肝炎大鼠肝损伤,其机制可能与Nrf2/HO-1信号通路介导的抑制氧化应激反应有关。

基于Nrf2/HO-1信号通路的中药有效成分缓解肝损伤研究进展

近年研究已证实,氧化应激是造成肝损伤的重要因素,研究发现核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)可以通过调控氧化应激以缓解肝损伤。中药单体或中药复方可以通过调控该信号通路减少氧化应激、铁死亡、炎症和细胞焦亡的发生以缓解肝损伤。对中药中的黄酮类、多糖、酚酸、甾体类等有效成分通过Nrf2/HO-1信号通路在氧化应激与肝损伤之间的相互作用进行综述,对于寻求靶向Nrf2/HO-1信号通路发挥缓解肝损伤作用的中药提供依据,同时为中药治疗肝损伤作用机制的深入研究提供参考。

基于Nrf2/HO-1/GPX4信号通路探讨真武汤改善脾肾阳虚型糖尿病肾病小鼠的作用机制

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨真武汤对脾肾阳虚型糖尿病肾病(DKD)小鼠肾脏氧化损伤的干预作用及机制。方法:将25只7周龄SPF级雄性db/m小鼠及95只7周龄SPF级雄性db/db小鼠适应性喂养1周。db/m小鼠作为空白组,其余小鼠进行运用灌服生大黄溶液和氢化可的松制备脾肾阳虚型DKD模型,成模后随机分为模型组、厄贝沙坦组(25 mg·kg^(-1))、真武汤高、中、低剂量(33.8、16.9、8.45 g·kg^(-1))组,每组15只,连续灌胃8周。观察小鼠生存状态和计算中医证候评分并测定脾肾阳虚相关、空腹血糖(FBG)及肾功能相关指标;苏木素-伊红(HE)染色观察各组肾脏组织病理学改变;生化试剂盒法测定肾组织中氧化应激相关指标;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、GPX4 m RNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠中医证候积分明显升高(P<0.05),雌二醇(E2)含量明显升高(P<0.05),睾酮(T)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量明显降低(P<0.05);FBG明显升高(P<0.05),肾功能明显下降(P<0.05);肾脏病理显示肾小球肥大,肾小球系膜和基底增厚明显,肾组织中过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平均明显降低(P<0.05),丙二醛(MDA)的含量明显升高(P<0.05),肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,真武汤高、中剂量组中医证候积分明显降低、E2含量明显降低(P<0.05),T、T3、T4含量明显升高(P<0.05);肾功能明显改善(P<0.05),肾脏病理明显改善,真武汤高、中剂量组小鼠肾组织中CAT、T-AOC、GSH水平均明显升高(P<0.05),MDA的含量明显下降(P<0.05),各给药组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:真武汤改善脾肾阳虚型db/db小鼠一般状态、肾功能,降低氧化损伤和减轻肾脏病理改变,其作用机制可能与调节Nrf2/HO-1/GPX4通路有关。

芳樟醇调控Nrf2/HO-1抑制黄曲霉毒素B_(1)所致肝损伤的实验

目的:探讨芳樟醇对黄曲霉毒素B(1 AFB1)诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制。方法:20只雄性SPF级SD大鼠,采用随机数字表法分为3组:正常组(n=6),AFB1组(n=7),芳樟醇组(n=7)。预防性给予芳樟醇溶液(200 mg·kg^(-1))持续14 d,正常组和AFB1组给予等体积双蒸水灌胃。芳樟醇预防性给药结束后,连续2 d腹腔注射AFB1(1 mg·kg^(-1),溶于生理盐水)溶液,以建立大鼠急性肝损伤模型。模型建立14 d后进行样本采集和处理。苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察大鼠肝组织病理学改变;生化检测各组大鼠的丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)和间接胆红素(IBil)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)和肝组织中的Fe^(3+)和Fe^(2+)含量;蛋白免疫印迹法(Wester blot)检测核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平;分子对接技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白之间的结合性能;分子动力学技术验证芳樟醇与Nrf2/HO-1信号通路关键蛋白结合能的稳定性和亲和力。结果:病理结果表明,与AFB1组比较,芳樟醇组肝脏结构趋向正常,蓝色胶原纤维显著减少;芳樟醇组的ALT、AST、GGT、LDH含量及ALP、TBil、DBil、IBil水平均显著降低(P<0.01),肝组织中的Fe^(3+)和Fe^(2+)含量及氧化应激产物MDA的水平显著降低(P<0.01);抗氧化物质SOD水平、CAT含量和GSH含量则显著增加(P<0.01);分子对接结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1靶点结合的分子对接能分别为-5.4956、-5.1994 kcal·mol^(-1)(1 cal≈4.186 J);分子动力学结果显示芳樟醇与Nrf2、HO-1结合能与亲和力较强。Western blot结果显示芳樟醇组中Nrf2蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),而HO-1蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:芳樟醇可能通过调控铁死亡信号通路中的Nrf2/HO-1来抑制肝脏细胞铁死亡并调节肝脏氧化应激水平,从而实现对AFB1诱导的急性肝损伤的保护作用。

Nrf2/HO-1信号通路在心肌梗死中的作用及中医药干预研究进展

心肌梗死(MI)是临床常见的一种心血管系统疾病,是造成心血管病死亡的主要原因之一,其发病机制复杂,与氧化应激反应相关。核转录因子E_(2)相关因子2(Nrf2)是调节氧化应激反应的关键因子,可调控其下游血红素氧合酶-1(HO-1)的表达,在机体中发挥维持氧化还原稳态的作用。MI的病程中Nrf2与HO-1的生物活性及含量水平均下降,组织抗氧化和抗炎能力减弱,心肌血管内皮受损,血管细胞黏附因子释放,血管内皮功能发生障碍。近年来,诸多基础研究探索中医药通过调控Nrf2/HO-1信号通路治疗MI的作用及机制,结果表明Nrf2/HO-1信号通路是中医药治疗MI的重要潜在靶点。该文就Nrf2/HO-1信号通路在MI中的作用机制及靶向调控该通路的中医药研究进展进行了综述,以期为MI疾病的防治以及进一步的药物开发提供理论依据。

补阳还五汤对特发性肺纤维化大鼠Keap1/Nrf2/HO-1抗氧化信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤对特发性肺纤维化(IPF)大鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)抗氧化信号通路的影响,探讨该方干预IPF的作用机制。方法:将40只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、尼达尼布组,每组10只。除假手术组外,其余各组气管内滴注博来霉素(0.005 g·kg^(-1))制备IPF大鼠模型。补阳还五汤组灌服补阳还五汤煎液(14.84 g·kg^(-1)),尼达尼布组灌服尼达尼布混悬液(0.1 g·kg^(-1)),假手术组、模型组灌服等容积生理盐水,共28 d。肺功能检测后,取血清及肺组织。苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察肺组织病理改变并行半定量分析;检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;测定血清和肺组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠呼吸系统阻力和弹力增高,顺应性显著降低(P<0.01);肺指数和病理评分、HYP含量显著升高(P<0.01);血清和肺组织MDA含量增加,SOD、GSH-Px、CAT活性显著降低(P<0.01);肺组织Keap1 mRNA与蛋白表达降低,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,补阳还五汤组大鼠呼吸系统阻力和弹力下降,顺应性显著升高(P<0.01);肺指数、病理评分、肺组织HYP含量显著降低(P<0.01);血清和肺组织MDA含量下降、SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高(P<0.01);肺组织Keap1表达降低,Nrf2、HO-1表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可启动Keap1/Nrf2/HO-1介导的抗氧化效应,增强机体抗氧化能力,延缓IPF大鼠病理进程。

醒脑静注射液对急性脑梗死外周血单个核细胞Nrf2、HO-1、NQO1表达及临床疗效的影响

目的：观察醒脑静注射液对急性脑梗死（ACI）核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）以及临床疗效的影响。方法：2015年1月～2015年11月在我院住院ACI患者70例,随机分为对照组及治疗组各35例,2组均进行常规治疗,治疗组加用醒脑静30ml加入0.9%生理盐水注射液250ml,静脉滴注,每日1次,连用14d。比较2组治疗前以及治疗后7、14d外周血Nrf2、HO-1和NQO1水平,观察治疗前后2组ACI患者神经功能缺损量表（CNS）评分、血生化指标以及临床疗效。结果：治疗组治疗后CNS评分与对照组比较明显降低,治疗后两组Nrf2、HO-1和NQO1水平与治疗前比较均明显升高;治疗组治疗后以上指标均显著优于对照组。结论：醒脑静是对ACI有显著疗效,其作用机制可能通过上调ACI患者Nrf2、HO-1和NQO1水平,起到改善患者神经功能缺损和临床综合疗效的作用。

脊柱手术术后深部感染Nrf2/HO-1/NQO1信号通路表达及其预后

目的 探讨脊柱手术术后深部感染患者核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路表达及其预后。方法 选取2014年10月-2020年10月浙江中医药大学附属江南医院收治的脊柱手术术后深部感染患者62例(深部感染组),另选取同期脊柱手术术后未感染患者64例(非感染组),比较两组患者血清Nrf2、HO-1、NQO1表达水平及其对深部感染预后的评估价值。结果 深部感染组患者血清Nrf2、HO-1、NQO1水平均低于非感染组(P<0.05),术后深部感染患者共检出病原菌68株,其中革兰阳性菌38株、革兰阴性菌28株、真菌2株,革兰阳性菌以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主,革兰阴性菌以大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为主;深部感染预后不良组患者血清Nrf2、HO-1、NQO1水平均低于预后良好组(P<0.05),血清Nrf2、HO-1和NQO1水平预测深部感染患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.854、0.736、0.812。结论 脊柱手术术后深部感染病原菌以革兰阳性菌为主,脊柱手术术后深部感染及预后不良患者血清中Nrf2、HO-1、NQO1呈低表达,其表达水平对术后深部感染患者预后不良有较好的预测价值。

Nrf2/HO-1信号通路在骨质疏松症中的作用及中药干预研究进展

骨质疏松症是以骨量低和骨组织微结构破坏、骨稳态失衡为特征的慢性骨骼疾病,导致骨脆性增加和骨折风险增加,产生的过量活性氧(ROS)与抗氧化系统之间的平衡被打破导致的氧化应激是骨质疏松症发生和进展的重要因素。核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)是重要的抗氧化应激通路,Nrf2是调节细胞氧化应激的主要因素,激活Nrf2可以刺激HO-1的表达,HO-1是一种关键的酶,其代谢产物胆绿素、一氧化碳和游离铁可以清除活性氧,从而在细胞中发挥抗氧化作用。目前,已有国内外学者研究报道,Nrf2/HO-1信号通路与骨质疏松症的发生发展及药物作用机制密切相关。中药具有重要的多靶点、多途径和多层次的优势,可以有效解决西药的不足,中药可以通过调控Nrf2/HO-1信号通路抗氧化应激、抗炎症反应、抗细胞凋亡等,从而治疗骨质疏松症。本文综述了Nrf2/HO-1信号通路及其中关键靶点蛋白因子与骨质疏松症的关系,以明确Nrf2/HO-1信号通路对骨质疏松症的重要作用。同时,对靶向调控Nrf2/HO-1信号通路来治疗骨质疏松症的中药进行系统性总结,以期为骨质疏松症的进一步精准治疗提供理论依据。

三焦祛湿方对C-BSA诱导膜性肾病小鼠肾脏保护作用及其对Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:探索三焦祛湿方对阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导膜性肾病(MN)小鼠肾脏保护作用及其对核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路影响。方法:雌性BALB/c小鼠60只,随机分为正常组10只,模型组50只。模型组小鼠尾静脉注射C-BSA(6.5 mg·kg^(-1)),造模成功小鼠按体质量随机分为模型组、三焦祛湿方低剂量(3.71 g·kg^(-1))组,三焦祛湿方高剂量(7.42 g·kg^(-1))组及盐酸贝那普利(1.3 mg·kg^(-1))组,分别给予各组相应剂量的药物灌胃,1次/d,连续4周。分别于造模前、造模后及治疗后检测24 h尿蛋白定量。给药后,腹主动脉取血检测血尿素氮(BUN),血清肌酐(SCr),甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),总蛋白(TP),白蛋白(Alb)水平,肾组织行苏木素-伊红(HE),马松(Masson),过碘酸-六胺银(PASM)染色,光镜下观察小鼠肾组织病理形态变化,免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况,采用免疫荧光法检测肾组织中活性氧(ROS)表达情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)观察肾组织Nrf2蛋白在细胞质和细胞核的表达情况,以及其下游因子血红素氧合酶-1(HO-1),醌还原型辅酶Ⅰ(NADH)脱氢酶1(NQO1)蛋白表达水平。结果:模型组小鼠24 h尿蛋白水平显著升高(P<0.01),血清TG,TC水平显著升高(P<0.01),TP,Alb水平显著降低(P<0.01);光镜下观察肾脏病理改变,可见肾小球体积增大,基底膜增厚,嗜复红蛋白沉积,"钉突"形成;荧光显微镜下可见IgG沿毛细血管襻弥漫性沉积;肾组织ROS表达水平显著升高(P<0.01);肾组织细胞核内Nrf2蛋白表达显著升高(P<0.01),细胞质Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01),HO-1和NQO1蛋白表达显著升高(P<0.01);给药后,各治疗组小鼠24 h尿蛋白水平显著降低(P<0.01),血清TG,TC水平显著降低(P<0.01),TP,Alb水平明显升高(P<0.05,P<0.01);各治疗组肾组织病理损害明显改善;肾组织ROS表达水平显著降低(P<0.01);肾组织细胞核内Nrf2蛋白表达显著降低(P<0.01),细胞质Nrf2蛋白表达不同程度升高(P<0.05,P<0.01),HO-1和NQO1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:三焦祛湿方可能通过调控膜性肾病肾组织Nrf2/HO-1信号表达,缓解肾组织氧化应激,进而降低24 h尿蛋白定量,降低血脂水平,提高血清蛋白含量,减轻肾脏病理损害,起到明显的肾脏保护及延缓病程进展的作用。

基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨半夏泻心汤对慢性萎缩性胃炎大鼠的影响及作用机制

目的:探讨半夏泻心汤通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路防治慢性萎缩性胃炎的作用机制。方法:取SD大鼠,除12只正常组大鼠外,其余大鼠联合造模法复制大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)模型,造模成功后随即分为模型组,维酶素组(VG,60 mg·kg^(-1))及半夏泻心汤高、中、低剂量组(280,140,70 mg·kg^(-1)),分别相当于半夏泻心汤生药量28,14,7 g·kg^(-1)。正常组及模型组大鼠给予等体积的蒸馏水,各治疗组给予相应容积的药物灌胃。治疗12周后采用苏木素-伊红(HE)染色法观察CAG大鼠胃黏膜病理变化情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CAG大鼠胃黏膜中Nrf2,醌氧化还原酶-1(NQO1),谷胱甘肽-S-转移酶(GST)蛋白及mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜组织Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05),胃黏膜萎缩,甚至肠化。与模型组比较,维酶素组及半夏泻心汤高、中剂量组Nrf2,NQO1,GST蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05),胃黏膜萎缩、肠化情况明显改善,且以高剂量组改善最为明显,但半夏泻心汤低剂量组作用不明显。结论:半夏泻心汤降低Nrf2的转录活性,关闭Nrf2信号通路,降低NQO1,GST的表达水平,实现正常的氧化-抗氧化平衡可能是其治疗CAG的作用机制之一。

Fisetin对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及机制探讨

活性氧(reactive oxygen species,ROS)在非酒精性脂肪肝、心血管疾病、癌症、糖尿病等疾病发生发展的过程中具有重要作用。HepG2细胞是评价抗氧化剂对活细胞氧化损伤保护作用的常用细胞模型。为了探讨非瑟酮(fisetin)对H2O2诱导细胞内ROS的清除作用及其机制,将HepG2细胞随机分为空白对照组(control)、溶剂对照组(solvent control)、H2O2模型组(H2O2model group)、fisetin干预组(fisetin+H2O2)、fisetin单独处理组(fisetin),检测不同干预组细胞存活率大小及细胞内ROS水平,同时检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)及Ⅱ相酶血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate-cysteine ligase modifier subunit,GCLM)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1)的表达。此外,通过构建Nrf2敲低细胞系,进一步明确Nrf2在fisetin清除ROS过程中的作用。研究发现,与H2O2模型组相比,fisetin干预组细胞存活率显著上升;fisetin可抑制由H2O2引起的HepG2细胞内ROS的增加,上调Nrf2、HO-1蛋白表达,并下调Keap1蛋白表达;Nrf2稳定敲低后,细胞内ROS水平增加。实验结果表明,fisetin可能通过激活Keap1/Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)通路诱导HO-1的表达,从而在抗氧化损伤过程中发挥细胞保护作用。

基于Nrf2/HO-1轴探讨大黄黄连泻心汤加味对2型糖尿病大鼠肝脏氧化应激损伤的影响

目的:基于核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)轴探讨大黄黄连泻心汤加味对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏氧化应激损伤的影响及其作用机制。方法:6只ZDF(fa/+)大鼠为正常组,30只ZDF(fa/fa)大鼠为造模组,采用高脂饲料喂食诱导建立T2DM大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g·kg^(-1))及大黄黄连泻心汤加味低、中、高剂量组(0.54、1.08、2.16 g·kg^(-1)),每组6只。药物干预12周后测定大鼠体质量、肝质量、空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)水平、全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理形态变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平,免疫组化检测肝脏Nrf2的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、肝质量、肝指数均显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠体质量、肝质量、肝指数均显著降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL含量均显著升高(P<0.01),HDL含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组TC含量均显著降低(P<0.01),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组TG含量均明显降低(P<0.05),大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组LDL含量明显降低(P<0.05),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组HDL含量明显升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠ALT、AST活性显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组ALT活性均明显降低(P<0.05),AST活性均显著降低(P<0.01)。与正常组比较,所有时间点模型组大鼠FBG显著升高(P<0.01);与模型组比较,8、10、12周二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组FBG明显降低。OGTT结果显示,与正常组比较,所有时间点的模型组大鼠血糖均显著升高(P<0.01);与模型组比较,所有时间点的二甲双胍组血糖显著降低(P<0.01),90、120 min大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组血糖均显著降低(P<0.01)。HE病理显示,正常组大鼠肝细胞结构清晰,排列规律;模型组大鼠肝细胞组织紊乱,可见脂肪空泡,大量细胞出现变形坏死状态;二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝组织结构转好,少量坏死细胞。与正常组比较,模型组大鼠肝脏SOD、GSH-Px显著降低(P<0.01),肝脏ROS、MDA显著升高(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏SOD、GSH-Px显著升高(P<0.01),MDA显著降低(P<0.01),二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠肝脏ROS明显降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1 mRNA表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味中、高剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1mRNA表达明显升高(P<0.05)。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1阳性表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1阳性表达升高,细胞核周围棕黄色颗粒明显增多(P<0.05)。Weatern blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏Nrf2、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍及大黄黄连泻心汤加味各剂量组大鼠肝脏Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:大黄黄连泻心汤加味能明显改善T2DM大鼠一般情况及肝脏组织的病理学变化,可能通过调控Nrf2/HO-1轴改善肝脏氧化应激损伤。

锰对小鼠黑质内活性氧及Nrf2信号通路影响

目的探讨不同浓度锰暴露后小鼠脑黑质内活性氧(ROS)变化及其对Nrf2信号通路影响及相关机制。方法小鼠48只,随机分为4组,即对照组、低、中、高剂量染锰组,分别给予腹腔注射生理盐水及12.5、25和50 mg/kg MnCl2,连续2周。用流式细胞仪测定小鼠脑黑质细胞内ROS,免疫组化法检测核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2),蛋白伴侣分子Keap1,血红素氧化酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)表达,Western blotting检测Nrf2,Keap1,HO-1和NQO1的蛋白水平。结果与对照组比较,低、中、高剂量染锰组小鼠脑黑质细胞中ROS含量明显升高(P<0.05);免疫组化结果显示,与对照组比较,低剂量染锰组小鼠脑黑质Nrf2、HO-1、NQO1表达[分别为(4.46±0.83)、(10.10±2.33)、(8.15±0.24)]明显升高(P<0.05),Keap1表达(6.22±0.58)降低(P<0.05),高剂量染锰组结果与低剂量呈相反趋势;Western blotting结果显示,与对照组比较,低剂量染锰组小鼠脑黑质Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达量[分别为(0.85±0.13)、(0.76±0.12)、(0.86±0.14)]明显升高(P<0.01),Keap1蛋白表达(0.48±0.05)下降(P<0.05),高剂量染锰组结果与低剂量呈相反趋势。结论锰暴露可导致小鼠脑黑质细胞内ROS含量增加,低浓度锰能激活Nrf2,增加HO-1和NQO1表达,高浓度锰则会抑制Nrf2通路。

丁苯酞对RSC96细胞糖尿病周围神经病变模型的保护作用及其分子机制研究

目的研究丁苯酞(NBP)对大鼠施万细胞(RSC96)糖尿病周围神经病变(DPN)模型的保护作用及其分子机制。方法分别用不同浓度的H_(2)O_(2)作用于RSC96细胞,搭建DPN细胞模型;用不同浓度的NBP作用于RSC96细胞,确定干预组的药物浓度。DPN模型及干预组药物浓度确认后实验共分为四组(组1:空白对照组;组2:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)DPN模型组;组3:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)+2μmol/L丁苯酞处理组;组4:1.6 mmol/L H_(2)O_(2)+10μmol/L丁苯酞处理组)。用Cell Counting Kit-8测定各处理组RSC96细胞的增殖活性;2,7-二氯荧光素二乙酸酯荧光探针(DCFH-DA)染色后通过荧光倒置显微镜观察活性氧(ROS)荧光强度;采用蛋白印迹(Western blot)检测各处理组细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、单核细胞血红素氧合-1(HO-1)、醌氧化还原酶-1(NQO1)的分子表达情况;激光共聚焦观察各处理组表达的Nrf2分子由细胞质转移进入细胞核的情况。结果组1、组2、组3和组4细胞的增殖活性均值分别为100.0%、56.2%、73.1%、75.3%,组3与组4比较差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);观察各组ROS荧光强度:与组1比较,组2、组3和组4的荧光强度增强;25μmol/L浓度以下的NBP没有明显的细胞毒性;与组1比较,组2、组3和组4的Total Nrf2、细胞核内Nrf2、HO-1、NQO1的表达量上调,差异有统计学意义(P<0.05);与组1比较,组2、组3、组4由细胞质转移至细胞核内的Nrf2增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞通过上调Nrf2的表达对H_(2)O_(2)诱导的RSC96的糖尿病周围神经病变细胞模型发挥神经保护作用。

乌司他丁对硫化氢急性中毒大鼠肺组织氧化应激损伤的干预作用及机制研究

目的 观察硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）急性中毒大鼠肺组织血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1,HO-1）、醌氧化还原酶-1（NAD（P）H：quinine oxidoreductase 1,NQO-1）和核转录因子红系相关因子-2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）的动态变化及乌司他丁（ulinastatin,UTI对其的影响.方法 将清洁级SD大鼠96只随机（随机数字法）分为健康对照组（NS组,n=8）,UTI对照组（UTI组,n=8）,H2S染毒模型组（H2S组,n=40,采用在染毒柜内暴露吸入体积分数200×10-6的H2S1h,构建H2S急性染毒模型）和UTI干预组（H2S＋UTI组,n=40,建立模型后立即腹腔注射UTI 10万U/kg）.后两组大鼠于染毒后2、6、12、24、48 h时点麻醉后活杀,留取肺标本.观察大鼠行为学变化,ELISA法测定肺组织中HO-1和NQO-1活力的动态变化；RT-PCR法检测肺组织HO-1、NQO-1和Nrf2 mRNA表达,Western blot法检测Nrf2蛋白表达.观察肺组织病理学改变并行肺损伤评分.结果 与NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12h时点HO-1活力和mRNA表达均明显升高（P＜0.01）,其中2h呈高峰；与同时间点H2S组比较,H2S＋ UTI组染毒后6、12、24、48 h时点HO-1活力和mRNA表达显著升高（P＜0.01）.与 、NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12、24 h时点NQO-1活力和mRNA表达均明显升高（P＜0.01）其中2h呈高峰；与同时间点H2S组比较,H2S＋UTI组染毒后6、12、24、48 h时点NQO-1活力和mRNA表达显著升高（P＜0.01）.与NS组比较,H2S组在染毒后2、6、12 h时点Nrf2mRNA和蛋白表达均明显升高（P＜0.01或P＜0.05）,其中2h呈高峰；与同时间点H2S组比较,H2S＋UTI组染毒后6、12、24、48 h时点Nrf2 mRNA和蛋白表达显著升高（P＜0.01）.光镜下,H2S组在染毒后24 h大鼠肺组织损害明显；H2S＋UTI组大鼠肺损伤较H2S组有所减轻.在染毒后12、24、48 h时点H2S＋UTI组的肺损伤评分明显低于H2S组（P＜0.01）.结论 HO-1、NQO-1和Nrf2参与了H2S中毒急性肺损伤的病理生理学过程；UTI干预治疗能显著提高HO-1、NQO-1及Nrf2的活力及表达,减轻H2S中毒急性肺损伤.

壹期煤工尘肺患者血清氧化应激指标水平变化

目的探讨壹期煤工尘肺(CWP)患者血清氧化应激指标血红素氧合酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、总抗氧化能力(T-AOC)、8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)及脂质过氧化产物(LPO)水平变化及意义。方法采用酶联免疫吸附法检测33名井上健康工人(对照组),40名井下健康接尘矿工(接尘组)及91例壹期CWP患者(CWP组)血清中HO-1、Nrf2和8-iso-PGF2α水平;化学比色法检测血清T-AOC和LPO水平。结果与对照组比较,接尘组Nrf2、T-AOC和LPO水平升高,CWP组LPO水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),CWP组T-AOC水平低于接尘组(P<0.01),CWP组饮酒患者血清中HO-1、Nrf2和8-iso-PGF2α水平低于非饮酒者(P<0.05)。CWP组HO-1和Nrf2、8-iso-PGF2α,Nrf2和8-iso-PGF2α水平呈明显正相关(rs值分别为0.840、0.882、0.885,P<0.01)。结论氧化应激反应与壹期CWP发生发展有关;饮酒可影响CWP患者氧化应激水平;检测TAOC水平有助于CWP的早期筛检。