核因子KB受体活化因子配体、护骨素在不同月龄雄性大鼠股骨的表达

目的研究核因子KB受体活化因子(receptor activator of NF-KB,RANK)及核因子KB受体活化因子配体(receptoractivator of NF-KB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegrin,OPG),在不同月龄雄性大鼠股骨表达的变化,探讨αD3对老龄大鼠RANK、RANKL、OPG表达的影响。方法将6周龄、6月龄、24月龄、24月龄+αD3组Wistar大鼠分为甲、乙、丙、丁4组,每组15只。其中丁组为24月龄+αD3组,按0.05μg/kg/d-1灌胃,隔天1次,每周3次。连续10周。取左侧股骨远中干骺端1/2,采用RT-PCR测RANKL、RANK及OPG的mRNA的表达。取右侧股骨做免疫组化。结果与6周组相比,6月和24月组RANKLmRNA分别增加6.2倍和7.3倍,(P<0.05),OPGmRNA值随月龄逐步增加(P>0.05)。24月龄+αD3组较24月龄组RANK降低(P<0.05)、RANKL/OPG比值亦降低(P>0.05)。免疫组化结果显示RANKL、OPG表达于软骨和成骨细胞胞浆和胞核。24月龄+αD3干预组OPG表达较24月组增强。结论股骨RANKL/OPG值随月龄增加,有利于骨的吸收和转换;αD3有促进骨形成降低骨吸收的作用,其机制可能与降低RANK、RANKL/OPG比值有关。RANKL、OPG表达于同一类型的细胞,二者共同调节骨的代谢。

威草胶囊对尿酸性肾病大鼠α平滑肌肌动蛋白和核因子kB蛋白表达的影响

目的:探讨威草胶囊对尿酸性肾病大鼠的作用机制。方法:用腺嘌呤加沙丁鱼造模,并将大鼠分为正常对照组、模型对照组、小剂量威草胶囊组、大剂量威草胶囊组、别嘌呤醇组,在造模的同时,分别给予上述药物灌胃。实验第4周,活杀所有大鼠,取肾组织,做肾脏病理组织检查,用点计数法计算肾小管的萎缩率、炎症细胞浸润面积、间质纤维化率;应用免疫组织化学技术检测大鼠肾组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和核因子kB(NF-kB)蛋白的表达情况。结果:与正常组相比,模型对照组和各给药组α-SMA、NF-kB阳性表达率增高(P<O.01);与模型对照组相比,给药组肾小管的萎缩率,炎症细胞浸润面积、间质纤维化率明显减轻(P<O.01);α-SMA、NF-kB阳性表达下降(P<O.01)。结论:威草胶囊防治尿酸性肾病可能与抑制肾小管和肾间质的上皮细胞表型转化及抵制NF-kB表达有关。

核因子kB与动脉粥样硬化及其中医药干预研究

核因子kB是调节细胞基因转录的关键因子之一 ,本文在转录水平上 ,针对于核因子kB对动脉粥样硬化的干预机制及其中医药治疗作一综述 ,认为应在中医药理论的指导下 ,通过基础实验研究和临床试验 ,发掘对动脉粥样硬化有治疗作用的中药。

核因子kB受体活化剂配体在牙源性角化囊肿中的表达和意义

目的:明确RANKL在牙源性角化囊肿中的表达和分布,了解牙源性角化囊肿骨破坏的机制。方法:经病理诊断的牙源性角化囊肿组织切片,用免疫组化法检测RANKL的表达及分布,用TRAP的免疫组化和降钙素受体的原位杂交明确RANKL阳性细胞的性质。结果:所有标本均显示RANKL阳性,阳性细胞位于牙源性角化囊肿的上皮层;均显示TRAP阳性,阳性细胞位于牙源性角化囊肿的上皮层,两种指标的阳性细胞定位类似;均显示CTR阳性,阳性细胞位于囊肿的上皮层,与RANKL和TRAP的阳性细胞定位类似。结论:RANKL在牙源性角化囊肿引起的颌骨破坏中起作用。

组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)抑制剂通过抑制核因子kB减轻乙醇诱导的人肠上皮Caco-2细胞损伤

目的研究组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)在酒精诱导的肠上皮细胞炎症和通透性中的作用和机制。方法培养Caco-2细胞达到分化,采用(10、25、50、100.200)mmol/L乙醇对其进行处理,通过廛哇蓝(MTT法)检测乙醇对细胞活性的影响,实时定量PCR检测Caco-2细胞HDAC3 mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平,从中筛选出适宜的乙醇浓度。将分化的Caco-2细胞分为对照组、乙醇组(50 mmol/L乙醇处理60 min)和RGFP966预处理组(乙醇处理前用2 p.mol/L HDAC3抑制剂RGFP966预处理1 h)。EUSA检测培养的细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,电阻仪检测跨上皮电阻值(TER),Western blot法检测细胞中闭合蛋白(occludin)、密封蛋白1(claudin-1)以及磷酸化的核因子kBp65(p-NF-i<Bp65)、核因子kB抑制蛋白(IkB)的蛋白水平。结果(10、25、50)mmol/L乙醇对细胞活力无明显影响,这些浓度的乙醇处理后HDAC3 mRNA和蛋白表达均升高,且具有剂量依赖性。与对照组相比,乙醇处理组细胞TNF-α含量和p-NF-KBp65蛋白水平增加,TER值与occludin、claudin-1和IkB蛋白水平均降低;与乙醇处理组相比,RGFP966预处理组细胞TNF-α含量和p-NF-KBp65蛋白水平均降低,TER值与occludin、claudin-1和IkB蛋白水平均增加。结论抑制HDAC3能够减弱乙醇诱导的肠上皮细胞炎症和通透性,可能是通过抑制NF-kB的活化发挥作用的。

年龄相关性白内障晶状体前囊膜中核因子kB的免疫组化研究

目的：研究核因子kB蛋白在正常人、年龄相关性白内障的晶状体前囊膜上皮细胞中表达的差异，探讨NF—kB在年龄相关性白内障发病机制中的作用。方法：显微镜下随机收集年龄相关性白内障前囊膜组织30例为病例组及透明晶状体前囊膜组织5例为正常对照组，采用免疫组织化学方法检测NF—kB P65蛋白的表达。结果：正常品状体前囊膜上皮细胞胞质和胞核中可见NF—kB P65蛋白阳性表达，以胞质为主；年龄相关性白内障晶状体前囊膜上皮细胞胞质和胞核染色呈阳性且以胞核为主。图像分析表明病例组NF—kB P65平均吸光度值高于对照组，差异有统计学意义（t=6．2109，P〈0．05）。结论：NF＋kB表达水平升高与年龄相关性白内障发病密切相关，其表达异常可能参与年龄相关性白内障的发生与发展。

星形细胞瘤中核因子kB与热休克蛋白的关系

核因子ｋＢ与热休克蛋白７０均是蛋白质，前者活化后进入细胞核调节相关基因表达，后者是机体在某些应激状态下才合成以维持细胞功能。本文采用免疫组织化学ＳＰ法对４０例星形细胞瘤标本进行分析，分别计算核因子ｋＢ与热休克蛋白７０的核阳性率，并进行相关分析，发现热休克蛋白７０的核阳性率随核因子ｋＢ核阳性率的变化而变化，二者呈正相关关系。

咀嚼力对青龄期大鼠牙槽骨胰岛素样生长因子-1、骨保护素、核因子kB受体活化因子配体蛋白表达的影响

分析不同强度力学刺激对青龄期大鼠牙槽骨IGF-1、OPG、RANKL蛋白表达的影响,探讨力学信号在牙槽骨骨重建中的传导,揭示力学刺激对牙槽骨骨重建的调节机制。喂食不同硬度饲料,建立大鼠牙槽骨不同力学刺激动物模型。40只SD大鼠随机分为2组,一组软食喂养,一组硬食喂养。大鼠分别在喂养2月、4月时分两次处死,显微CT检测下颌骨第三磨牙区牙槽骨骨组织形态计量学指标,Western blot方法检测IGF-1、OPG、RANKL蛋白质表达。经显微CT检查发现,硬食组大鼠牙槽骨骨体积分数、骨小梁数量等均较软食组组显著增加,骨小梁分离度降低,P<0.05;大鼠牙槽骨中IGF-1和OPG蛋白表达硬食组较软食组同时上调,并且它们的表达量呈正相关;RANKL表达硬食组较软食组降低;IGF-1和RANKL表达量呈负相关;4月组结果与2月组结果相比,IGF-1、OPG和RANKL蛋白表达量均有变化,但差异不显著。结果显示较高的咀嚼力能够促进大鼠牙槽骨的生长,促进牙槽骨中IGF-1和OPG的表达,抑制RANKL的表达,表明力学刺激能够影响IGF-1和OPG/RANKL两种分子系统的表达水平,两种分子信号通路存在关联协同性。IGF-1和OPG/RANKL两种分子信号系统是调节骨重建力学信号传导通路。

护骨素和核因子KB活化因子受体配体基因多态性与类风湿关节炎的相关性研究

目的探讨护骨素（OPG）基因rs2073618、rs3102735位点和核因子KB活化因子受体配体（RANKL）基因rs2277438位点单核苷酸多态性（SNP）及其外周血水平对类风湿关节炎（RA）患者疾病活动性及骨侵蚀的影响。方法采用连接酶检测反应方法检测101例RA患者OPG基因rs2073618、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP，ELISA法测定其外周血OPG和RANKL水平，采用Sharp评分评价其双手x线骨侵蚀。结果OPG基因rs2073618位点表达为纯合型RA患者（60例）比杂合型患者（40例）的关节压痛数（13±7比10±6，t=2．154，P=0．034）、关节压痛指数（19±11比13±9，t=2．318，P=0．023）、VAS评分（5．7±1．9比4．8±1．8，t=2．481，P=0．015）明显升高（P〈0．05）；RA患者OPG基因rs3102735位点SNP与其外周血OPG水平、病情活动性指标及Sharp评分无关（P〉0．05）。RANKL基因rs2277438位点表达为纯合型RA患者（62例）和杂合型（39例）间病情活动性指标比较差异无统计学意义（P〉0．05）；但杂合型RA患者外周血RANKL水平较纯合型明显升高（139±152比80±38，￡=2．152，P=0．038）、双手x线Sharp评分亦明显高于纯合型（68±66比40±45，t=2．194，P=0．032）。多元线性回归分析显示，RA患者Sharp评分与病程（卢=0．725，t=9．078，P〈0．01）、外周血RANKL／OPG比值（卢=0．166，t=2．104，P=0．039）、年龄（口=一0．179，t=2．274，P=0．026）呈直线相关（R。=0．570，F=33．137，P〈0．01）。结论OPG基因rs2073618位点SNP与RA患者的病情活动性有关，纯合型患者的病情更重；RANKL基因rs2277438位点SNP与RA患者骨侵蚀相关，杂合型患者外周血RANKL水平更高，骨侵蚀更重。

核因子KB:一种新的治疗途径?

基因转录过程是由被称作为转录因子的调节蛋白所控制的。这些转录因子在细胞信息传递中起着非常重要的作用。它们的结构中含有特异性区域,即DNA结合区域,能与靶基因调节区域(即启动子和增强子)上的特定DNA序列结合。根据其DNA结合区域的不同,转录因子被分为不同家族。核因子KB(NF-KB)是其中的一种,它最早是因调节小鼠B淋巴细胞的K轻链而被认识的。随后,在不同的细胞中发现了几种不同的NF-KB蛋白。NF-KB的家族成员[如NF-KB1(或p50)和RelA(或p65)

MKLl调节核因子KB依赖的炎症基因的表观遗传修饰

目的正常的免疫反应对于维持机体的稳态具有十分重要的作用，失调的免疫反应是动脉粥样硬化等一系列疾病发生的关键原因之一。除了外界刺激，免疫反应的转录组还受到机体内AP-1、STAT和核因子KB（NF—KB）等几种进化保守的转录因子的调控。而NF-KB被认为是一个主要的促炎转录因子。我们已有的数据发现MKLl能够与p65相互作用，而且在氧化型低密度脂蛋白刺激的血管内皮细胞中，MKLl能够激活p65的靶基因细胞间黏附分子1（ICAM一1）的转录。本研究旨在探讨MKLl是否能够影响p65依赖的促炎因子的转录及其机制。方法与结果MKLl与p65单独或共同转染细胞，通过荧光素酶报告基因实验确定MKLl能够增强p65对其靶基因的转录激活。肿瘤坏死因子α（TNF-α）或脂多糖（LPS）刺激转染负显性MKLl及缺失MKLl的细胞，通过基因芯片和实时定量PCR确定p65依赖的炎症反应减弱。染色质免疫共沉淀实验MKLl能够结合到p65靶基因启动子上且能够改变启动子上组蛋白的修饰。通过免疫共沉淀结合质谱和染色质免疫共沉淀确定MKLl能够招募表观遗传修饰蛋白影响相关基因启动子的表观遗传修饰。结论在外界炎症信号刺激下，MKLI通过招募甲基化酶复合物改变p65靶基因启动子组蛋白的修饰增强炎症因子的转录。

核因子KB——全身炎症反应综合征的关键因子及新的治疗对象

前言 全身炎症反应综合征(SIRS)是指因感染引起的炎症反应,如败血症。它能引起严重的后果,如多器官功能衰竭(MODS)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS),甚至死亡。SIRS的矛盾之处在于:机体的免疫反应对于抵抗感染是至关重要的,但过度或失控的炎症反应又能引起中性粒细胞介导的组织损伤和器官功能紊乱。探讨调节中性粒细胞性炎症反应的分子机制有助于对SIRS中机体的组织损伤进行特异性干预而又不使机体防御系统受到实质性损害。

中药复方益糖康对动脉粥样硬化兔核因子KB和丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨中药复方益糖康对动脉粥样硬化兔血清中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),以及核因子KB(NF-ΚB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,明确中药复方益糖康抗动脉粥样硬化的机制。方法将雄性纯种日本大耳白兔以完全随机区组法分为6组,即正常对照组(对照组,n=10),高脂模型组(高脂组,n=10),中药复方低、中、高剂量组(n均为10),中药复方预防组(预防组,n=10)。酶联免疫分析(ELISA)法检测血清炎性指标(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测主动脉组织中(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果高脂组(IL)-1β、IL-6、TNF-α浓度则均低于高脂组(P均<0.01),且此作用呈剂量依赖性。此外,高脂组主动脉组织中,高剂量组及预防组NF-ΚB、P38MAPK、JNK蛋白磷酸化水平均低于高脂组(P均<0.05),ERK1/2蛋白磷酸化水平,与高脂组比较差异无统计学意义。结论中药复方益糖康可以降低动脉粥样硬化兔血清炎症因子水平,其作用机制可能与抑制NF-ΚB、MAPK信号通路的激活有关。

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子kB受体活化素配体表达的影响

目的探讨脂联素影响骨代谢的可能作用机制。方法体外培养人成骨细胞，（1）分别加入0、3、10和30mg／L的脂联素作用48h；（2）加入0或30mg／L脂联素分别作用12、24、48h；采用荧光定量PCR和ELISA方法检测护骨素和核因子KB受体活化因子配体（RANKL）的表达。另将人成骨细胞与CD14＋外周血单个核细胞（PBMC）共培养，加入30mg／L脂联素作用14d，行破骨细胞标志酶抗酒石酸磷酸酶染色。结果0、3、10和30mg／L的脂联素作用48h，成骨细胞护骨素mRNA和蛋白表达分别为100％±9％、68％±7％、47％±8％、30％±5％与（9．2±0．3）、（6．6±0．4）、（4．1±0．4）、（2．6±0．4）ng／ml，RANKLmRNA和蛋白表达分别为100％±5％、165％±8％、213％±6％、316％±10％与（1．3±0．2）、（2．1±0．1）、（2．3±0．2）、（2．8±0．1）ng／ml。脂联素对护骨素表达的抑制和对RANKL表达的促进作用均呈剂量和时间依赖性（P〈0．05）。脂联素干预成骨细胞与CD14＋PBMC共培养体系可诱导破骨细胞生成。结论脂联素可通过抑制护骨素表达、诱导成骨细胞RANKL表达，诱导破骨细胞生成，这可能是脂联素影响骨代谢的作用机制之一。

糖尿病大鼠肺组织核因子KB活性的研究

近年研究表明，NF-KB在糖尿病肾病和糖尿病血管病变的发生、发展中起重要作用，但NF—KB在糖尿病肺损害及糖尿病机体肺组织抗感染免疫反应中的作用目前尚不清楚。本研究观察糖尿病大鼠肺组织NF-KB表达，探讨NF-KB在糖尿病机体肺组织免疫防御反应的变化及作用。

慢性肾功能衰竭大鼠主动脉核因子kB活化及泛素通路的调节作用

目的探讨慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素（Ub）-NF-kB通路的表达变化规律。方法将大鼠随机分为假手术对照组（CON）、肾功能衰竭组（CRF）、肾功能衰竭加MG-132干预组（CRF＋M），观察6个月。采用部分肾动脉结扎加对侧肾切除法复制慢性肾功能衰竭大鼠模型。ELISA法测定血液中炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。RT-PCR半定量测定主动脉中NF-kB及Ub mRNA表达。免疫组织化学方法检测主动脉中NF-kB及Ub蛋白表达。Western印迹法测定主动脉泛素化蛋白的含量。凝胶电泳迁移率（EMSA）法测定动脉中NF-kB的活化情况。结果与CON组比较，CRF组大鼠术后4～6个月时血清中IL-lβ[（9．02±1．29）比（2．74±0．96）mg／L]和TNF-α[（50．02±9．52）比（14．04±1．29）mg／L]水平显著升高（P〈0．01）；主动脉NF-kB、Ub的mRNA表达升高1．38倍和1．29倍（P〈0．01）；NF-kB、Ub的蛋白质表达升高3．75倍和20．5倍（P〈0．01）；NF-KB活性增强1．82倍（P〈0．01），术后6个月各指标均有进一步上升趋势。与CRF组比较，CRF＋M组大鼠干预治疗4～6个月后，大鼠血清中IL-lβ[（2．94±0．33）mg／L]和TNF-d[（12．80±2．12）mg／L]含量显著下降（P〈0．01）；NF-kB、Ub的mRNA及蛋白质表达显著减少（P〈0．01）；NF-KB的活性显著降低（P〈0．01），与CON组比较，差异已无统计学意义，而主动脉中泛素化蛋白含量显著升高（P〈0．01）。结论慢性肾功能衰竭大鼠主动脉泛素．NF-KB炎性反应信号明显活化，抑制蛋白酶体活性可能是降低主动脉NF-KB活化的重要药物靶点。

核因子-kB信号通路对肺炎模型小鼠免疫功能和炎症反应的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)信号通路对肺炎模型小鼠免疫功能和炎症反应的影响。方法:采用肺炎链球菌诱导肺炎小鼠模型,然后将其分为模型对照组(腹腔注射120 mg/kg生理盐水)和模型+PDTC组(腹腔注射120 mg/kg NF-κB通路抑制剂PDTC),各8只;另取8只BALB/c小鼠作为正常对照组(腹腔注射等剂量生理盐水),均连续注射2周后,取各组大鼠右肺上叶组织,测定湿重(W)和干重(D),并计算含水量(TLW)和干湿比(D/W)、Western blot检测各组小鼠肺组织NF-κB蛋白表达、流式细胞术检测各组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+占比、ELISA试剂盒检测小鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-10的含量。结果:(1)与正常对照组相比,模型对照组肺组织TLW显著增加,而D/W比值显著降低(P<0.05);与模型对照组相比,模型+PDTC组小鼠肺组织TLW显著降低,D/W比值显著增加(P<0.05)。(2)与正常对照组相比,模型对照组肺组织NF-κB蛋白相对表达量显著增加(P<0.05);与模型对照组相比,模型+PDTC组小鼠肺组织NF-κB蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。(3)与正常对照组相比,模型对照组小鼠外周血CD3+和CD4+百分比以及CD4+/CD8+比值均显著减小(P<0.05);而与模型对照组相比,模型+PDTC组小鼠以上指标占比或比值均显著升高(P<0.05)。(4)与正常对照组相比,模型对照组小鼠血清促炎因子TNF-α和IL-6含量均显著升高,抗炎因子IL-10含量显著降低(P<0.05);而与模型对照组相比,模型+PDTC组小鼠血清中TNF-α和IL-6含量均显著降低,而IL-10含量显著升高(P<0.05)。结论:肺炎的发病机制可能与NF-κB信号通路激活有关,而通过抑制该通路可显著改善肺炎小鼠肺组织病理状态,增强其免疫功能,并改善其炎症反应水平。

脂联素对人成骨细胞护骨素和核因子KB受体活化素配体表达的调节

目的探讨脂联素对人成骨细胞护骨素（OPG）和核因子xB受体活化素配体（RANKL）表达的作用。方法RT-PCR及Western印迹检测体外培养的人成骨细胞的脂联素受体（AdipoR）mRNA及AdipoR蛋白表达。分别用0、3、10μg／ml和30μg／ml脂联素干预人成骨细胞48h以观察剂量效应和分别用0、30μg／ml脂联素干预人成骨细胞0、12、24h和48h以观察时间效应，干预前后OPG、RANKL的mRNA及蛋白表达分别用实时聚合酶链反应（real—timePcR）和ELISA检测。结果（1）人成骨细胞可表达AdiopR1mRNA、AdiopR1蛋白和AdiopR2mRNA。（2）30μg／ml脂联素干预人成骨细胞12、24h或48h后，OPG的mRNA表达分别为0h的（69±6）％、（51士7）％和（26±8）％（Pd0．05），OPG蛋白表达分别为0h的（66±5）％、（32士8）％和（14士6）％（P％0．05）；RANKL的mRNA表达分别为0h的（180±12）％、（220士19）％和（316士14）％（P％0．05），可溶性RANKL（sRANKL）蛋白的表达分别为0h的（236±12）％、（272±9）％和（308±14）％（P〈O．05）。（3）3、10ug／ml或30ug／ml脂联素干预人成骨细胞48h时，OPG的tuRNA表达分别为对照组的（66±9）％、（44±10）％和（29±7）％（P〈O．05），OPG蛋白的表达分别为对照组的（52±9）％、（38±4）％和（17±4）％（P〈O．05）；RANKL的mRNA表达分另4为对照组的（168±6）％、（214±7）％和（314±11）％（P〈0．05），sRANKL蛋白的表达分别为对照组的（156±6）％、（196±8）％和（212±7）％（P〈0．05）。结论脂联素呈时间和剂量依赖性调节人成骨细胞OPG和RANKL的表达，可能是新的骨代谢调节因子。

晚期糖基化终产物激活内皮细胞核因子κB

目的探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞核因子κB的激活及作用机制。方法用晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304体外共同培养。用Westernblot检测核因子κB抑制蛋白水平,凝胶滞留法检测核因子κB的活性。结果晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白可致ECV304核因子κB抑制蛋白降解及核因子κB激活,并且呈时间、剂量依赖关系,抑制核因子κB抑制蛋白的降解,可抑制核因子κB的激活。结论晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白通过引起核因子κB抑制蛋白降解,导致核因子κB的激活,这一作用机制可能参与动脉粥样硬化的进程。