目的 构建骨骼肌肌细胞生成素 (myogenin)基因真核表达载体 ,深入探讨在骨骼肌损伤及骨骼肌失神经萎缩的发生、发展过程中的变化规律 ,以及病理过程。 方法 含 myogenin c DNA的克隆载体 p GEMT- myogenin经限制性内切酶 Hind 和 Xho...目的 构建骨骼肌肌细胞生成素 (myogenin)基因真核表达载体 ,深入探讨在骨骼肌损伤及骨骼肌失神经萎缩的发生、发展过程中的变化规律 ,以及病理过程。 方法 含 myogenin c DNA的克隆载体 p GEMT- myogenin经限制性内切酶 Hind 和 Xho 双酶切 ,得到含这两个酶切位点之 myogenin c DNA片段 ,T4 连接酶连接到含有这两个酶切位点的真核表达载体 pc DNA3,构建出重组真核表达载体 pc DNA3- myogenin,经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定及 DNA测序证实 c DNA片段大小和序列的正确性。 结果 经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实 :pc DNA3-myogenin含大小正确的 myogenin c DNA片段 ,DNA测序证实其 DNA序列正确。 结论 成功地构建了肌细胞生成素基因真核表达载体 pc DNA3-展开更多
目的构建RECK(reversion-induc ing-cyste ine-rich prote in w ith Kazal motifs)基因的真核表达载体,通过脂质体介导法转染人肝癌细胞株HepG2并获得高表达RECK蛋白的细胞克隆。方法用RT-PCR方法扩增出人RECK基因,构建真核表达载体pcDN...目的构建RECK(reversion-induc ing-cyste ine-rich prote in w ith Kazal motifs)基因的真核表达载体,通过脂质体介导法转染人肝癌细胞株HepG2并获得高表达RECK蛋白的细胞克隆。方法用RT-PCR方法扩增出人RECK基因,构建真核表达载体pcDNA3-RECK,采用脂质体介导法将重组质粒导入体外培养的HepG2细胞,RT-PCR和W estern b lot检测转染细胞和未转染细胞中RECK基因mRNA及蛋白质的表达。结果本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3-RECK,并用脂质体介导的方法获得了高稳定表达RECK的细胞克隆;W estern b lot显示转染前的细胞未检测到RECK基因mRNA及蛋白质表达,但转染后表达量明显增高。结论重组质粒pcDNA3-RECK经转染能在HepG2细胞中高效表达,为进一步研究RECK对肝癌细胞的生物学影响奠定了基础。展开更多
文摘目的 构建骨骼肌肌细胞生成素 (myogenin)基因真核表达载体 ,深入探讨在骨骼肌损伤及骨骼肌失神经萎缩的发生、发展过程中的变化规律 ,以及病理过程。 方法 含 myogenin c DNA的克隆载体 p GEMT- myogenin经限制性内切酶 Hind 和 Xho 双酶切 ,得到含这两个酶切位点之 myogenin c DNA片段 ,T4 连接酶连接到含有这两个酶切位点的真核表达载体 pc DNA3,构建出重组真核表达载体 pc DNA3- myogenin,经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定及 DNA测序证实 c DNA片段大小和序列的正确性。 结果 经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实 :pc DNA3-myogenin含大小正确的 myogenin c DNA片段 ,DNA测序证实其 DNA序列正确。 结论 成功地构建了肌细胞生成素基因真核表达载体 pc DNA3-
文摘目的构建RECK(reversion-induc ing-cyste ine-rich prote in w ith Kazal motifs)基因的真核表达载体,通过脂质体介导法转染人肝癌细胞株HepG2并获得高表达RECK蛋白的细胞克隆。方法用RT-PCR方法扩增出人RECK基因,构建真核表达载体pcDNA3-RECK,采用脂质体介导法将重组质粒导入体外培养的HepG2细胞,RT-PCR和W estern b lot检测转染细胞和未转染细胞中RECK基因mRNA及蛋白质的表达。结果本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3-RECK,并用脂质体介导的方法获得了高稳定表达RECK的细胞克隆;W estern b lot显示转染前的细胞未检测到RECK基因mRNA及蛋白质表达,但转染后表达量明显增高。结论重组质粒pcDNA3-RECK经转染能在HepG2细胞中高效表达,为进一步研究RECK对肝癌细胞的生物学影响奠定了基础。