核基质结合序列(MAR)与基因表达调控

核基质结合序列 (MAR)是能在体外与核基质特异结合的DNA序列 ,广泛存在于染色质Loop结构的边界序列中。随着研究的深入 ,发现MAR序列不仅在染色质折叠中起到重要作用 ,影响邻近内源基因表达 ,而且将MAR序列构建到外源基因表达盒两侧转化动植物时 ,也影响外源基因的表达。因此 ,MAR序列是基因组中一种重要的基因间边界序列 ,为阐明非编码序列在基因表达中的作用和构建真核生物高效表达载体提供了新途径。

强MAR的分离及其体内外功能鉴定

将MAR（matrix attachment region）构建到外源基因表达盒两侧可以促进外源基因的表达克服基因沉默.用PCR方法从烟草和拟南芥中分离到4个新的MAR序列（TM2,TM3,AM1和AM2）,以水稻悬浮细胞为材料,提取大量细胞核制备核基质,以已发表的MAR（TM1）为对照,对4个新MARs序列进行体外结合实验.结果表明TM2和TM3与核基质的结合能力强于已知MAR序列.将4个新MARs和对照分别顺向构建到表达载体pBI121 gus基因表达盒两侧,用农杆菌介导法转化烟草,获得转基因植株.对转基因植株体内GUS酶活性检测表明,TM1,TM2,TM3和AM1均能使外源基因表达增强,其中TM2增强5倍,TM1增强1.5倍,TM2增强效果强于对照TM1.表明分离到一个新的强MAR,可以用于高效表达载体的构建.对5个MARS的序列特征、体外结合能力及外源基因表达影响三者之间的关系进行了分析,并对获得的强MAR在植物基因工程中的应用进行了讨论.