新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料的合成及其在蛋白质N-糖链富集中的应用

蛋白质的N-糖基化修饰与多种重要的生理、病理进程密切相关,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。由于糖蛋白本身多是低丰度表达的蛋白质,且糖链结构具有高度微不均一性,这使得蛋白质糖基化修饰的分析具有一定的挑战。本研究利用表面引发-原子转移自由基聚合(SI-ATRP)法,以带有双键的氨基葡萄糖为单体(GMAG),成功制备了新型核壳型亲水聚合物-硅胶杂化填料(pGMAG-SiO2)。由于在硅胶表面引入致密的亲水聚合物层,该填料不仅保持了硅胶良好的机械强度,而且显著提高了其亲水性,因此非常适合作为亲水填料用于蛋白质的N-糖链富集。以麦芽七糖和鸡卵清蛋白的N-糖链为研究对象,考察了该填料对N-糖链的富集效果,并将该杂化填料成功用于人血浆中糖蛋白N-糖链的富集检测,共鉴定了47种糖型。以上结果表明,pGMAG-SiO2填料对N-糖链具有较高的亲和性,可以用于N-糖链的高覆盖率鉴定。

1.2μm新型放射型核壳色谱填料在加压毛细管电色谱中的性能评价

研究制备了1.2μm放射型核壳色谱填料,并对其表面进行了键合C18的改性,通过匀浆填充法制备了总长度为350 mm(固定相有效填充长度为70 mm)、内径为100μm的毛细管色谱柱,应用加压毛细管电色谱(pCEC)法考察了硫脲和萘在该色谱柱上的分离性能,同时讨论了流动相中有机相的比例、缓冲液的浓度、pH值、线性流速及施加电压对分离度的影响。实验结果表明,该新型核壳色谱填料在乙腈水体系中分离硫脲和萘时,表现出典型的反相色谱性能,当含有10 mmol/L磷酸的70%(v/v)乙腈水溶液为流动相、缓冲液pH为7.2、施加电压为-10kV时,柱效最高;在最佳线性流速为1 mm/s时,能够在8 min内实现8种中性物质的基线分离,且峰形较好,其中二苯甲酮的柱效高达19 072块/m。该研究表明1.2μm新型放射型核壳色谱填料适用于pCEC法的分离分析。

核壳型色谱柱-高效液相色谱串联质谱法快速测定环境水样中的克百威

目的:建立利用核壳型色谱柱和高效液相色谱串联质谱法快速测定环境水样中克百威的分析方法。方法:水样经过0.45μm微孔滤膜过滤,采用核壳型Waters Cortecs C18色谱柱(100×2.1mm,2.7μm)分离,以甲醇-水(0.1%甲酸)为流动相,在加热电喷雾电离源、正离子模式下,采用选择反应监测模式采集数据。结果:在0.2~100μg/L的范围内线性关系良好,相关系数>0.999。方法的检出限为0.02μg/L。在2.0和20.0μg/L2个添加水平下,方法的回收率在84.9%~89.8%,相对标准偏差在1.3%~3.3%。结论:该方法简单、快速、灵敏度高,适合于环境水样中克百威的测定。

核壳液相色谱-蒸发光散射检测法直接检测20种氨基酸

目的 ：应用蒸发光散射检测器（evaporative light scattering detector,ELSD）、＂HALO＂核-壳型新型填料液相色谱柱,建立一种高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）直接测定20种未衍生氨基酸的分析方法,并将其用于复方氨基酸注射液中氨基酸含量的测定。方法 ：采用核-壳型HALO色谱柱（4.6 mm×150 mm,2.7 mm C18）,以甲醇-九氟戊酸-七氟丁酸-三氟乙酸-水为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 ml/min,ELSD飘移管温度40℃,载气流速3.0 L/min,对20种基本氨基酸进行分离检测。结果 ：氨基酸的质量浓度在0.01~1.0 mg/ml范围内,其峰面积的对数值与进样质量的对数值呈良好的线性关系;氨基酸的检出限介于20~50 ng之间,样品加标回收率为89.0%~111.2%。结论 ：该方法操作简便快速、准确可靠,溶剂消耗少,为药品、食品、饲料及化工生产等领域混合氨基酸样品的直接检测提供了参考。

氧化铝包裹硅胶核-壳型色谱填料的制备及正相色谱性能研究

采用层层自组装(LBL-SA)技术制备了新型的氧化铝包裹硅胶(Al2O3/Si O2)核-壳型色谱填料。对该填料进行了光电子能谱表征、扫描电镜表征、比表面孔径表征,结果表明Al2O3被成功的组装到了Si O2表面。考察了Al2O3/Si O2填料在正相色谱条件下对碱性、中性和酸性化合物色谱分离行为并与Si O2填料进行了比较性研究。结果表明,由于氧化铝表面的Lewis酸性位点的存在,相比较于Si O2填料而言,Al2O3/Si O2在分离碱性化合物和中性化合物时具有很大的优势,但是也是由于这些Lewis酸性位点,造成酸性化合物在Al2O3/Si O2柱上具有很长的保留时间和严重拖尾的峰形,流动相中少量乙酸的加入可以有效地掩盖Al2O3表面的Lewis酸性位点,减弱其对酸性化合物的吸附。

高效液相色谱法快速测定参芪降糖胶囊中人参皂苷的含量

建立了高效液相色谱法快速测定参芪降糖胶囊中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rd含量的方法.采用3.5μm Coreshell C_(18)核壳型分离填料(3.0 mm×150 mm)为色谱柱,分别以纯乙腈、纯水为流动相进行梯度淋洗,流量为0.43 mL/min,柱箱温度为25℃,检测波长为203 nm.人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rd分别在5~400、20~800、5~400μg/mL质量浓度范围内线性关系良好(R^(2)大于0.9996),加标回收率为95.89%~100.67%,相对标准偏差为1.04%~3.39%.方法可以快速检测参芪降糖胶囊中人参皂苷的含量,准确度高,数据可靠,对仪器要求不高,易于接受,可用于人参皂苷的相关质量控制.