靶向核抗原的嵌合抗原受体T细胞构建及其分泌IFN-γ功能验证

目的构建靶向实体瘤微环境嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞),诱导微环境中IFN-γ的表达,以达到抗肿瘤的目的。方法筛选核抗原特异性单克隆抗体,通过基因工程技术构建嵌合抗原受体(CAR);将CAR亚克隆到慢病毒载体后转染HEK293细胞,包装成表达CAR的慢病毒,转导HEK293F细胞后,以流式细胞术检测CAR表达细胞比例判断转导效率;将CAR表达慢病毒转导活化T细胞后形成CAR-T细胞,采用流式细胞术检测在不同抗原(核小体抗原、Brefeldin A、二者联合)诱导下或核小体抗原单独诱导0、2、48 h时CAR-T细胞分泌IFN-γ情况。结果在培养10~15 d时,表达CAR的HEK293F细胞比例达53.04%~87.17%。在核小体抗原、Brefeldin A、二者联合组诱导下,分泌IFN-γ的T细胞比例分别为0.028%、0.034%、3.570%;核小体抗原诱导0、48 h时检测不到分泌IFN-γ的CAR-T细胞,2 h时分泌IFN-γ的CAR-T细胞最多。结论成功构建靶向核抗原的CAR-T细胞,且该细胞具有IFN-γ分泌功能。