核小体结合蛋白1在前列腺癌中的表达和意义

目的通过检测核小体结合蛋白1(NSBP1)在正常前列腺(NP)、良性前列腺增生(BPH)、前列腺癌(PCa)组织中的表达,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。方法采用Western印迹方法检测NSBP1在10例NP组织、15例PCa组织中的蛋白表达差异;采用免疫组织化学方法检测19例NP组织、26例BPH组织、40例PCa组织中NSBP1的表达水平。结果NSBP1在PCa组织中蛋白表达高于在NP组织中的表达,差异有统计学意义(t=37．308,P<0．01)。3种组织中NSBP1的阳性及弱阳性表达率为56．5％(48／85),其中NP、BPH、PCa组织中分别为36．8％(7／19)、34．6％(9／26)、80．0％(32／40)。PCa组织中NSBP1表达水平明显高于NP及BPH组织(t=-3．569, -4．152,P<0．01)。在PCa中NSBP1的表达水平与PCa病理分期、Gleason评分(GS)、血清前列腺特异抗原(PSA)均不相关(P=1．911,0．666,0．779)。结论NSBP1在PCa中高表达,并可能参与了PCa的发生发展过程。

核小体结合蛋白1在雄激素非依赖性前列腺癌中的作用

目的明确核小体结合蛋白1（NSBP1）在雄激素非依赖性前列腺癌细胞（PC-3）中的生物学功能。方法通过RNA干扰技术，使PC-3细胞中的NSBP1表达水平明显降低，然后用胆囊收缩素（CCK）-8法观察细胞活性的变化，用流式细胞光度术检测细胞周期的变化。结果NSBP1的表达抑制后，从60h开始PC-3细胞活性（A值为0．329±0．017与0．386±0．022）有显著下降（P〈0．05），抑制率到108h达到高峰（27．5％）。流式细胞光度术检测结果显示，NSBP1抑制后的PC-3细胞的G2M＋S期细胞百分率也从60h开始（31．7％±2．0％）与对照组（37．3％±2．5％）有统计学意义（P〈0．05）。结论NSBP1在前列腺癌PC-3细胞中，对维持细胞活性及促进细胞生长增殖有重要作用。

HMGN1激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导小鼠BV2小胶质细胞活化上调其促炎介质表达

目的 探究高迁移率族核小体结合蛋白1(HMGN1)对小鼠BV2细胞炎症反应的影响并探究其可能的机制。方法使用(0、 100、 200、 500、 1000、 2000)ng/mL的重组HMGN1孵育BV2细胞6 h。用显微镜观察细胞形态变化,实时定量PCR检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA水平。随后把小胶质细胞随机分成对照组、模型组、抑制剂组和拮抗剂组。模型组用500 ng/mL的HMGN1处理BV2细胞,拮抗剂组在模型组的基础上加入瑞沙托维(resatorvid)/TAK-242进行干预,使用实时定量PCR和免疫荧光细胞化学染色检测细胞中的M1/M2型标志物的表达情况,Western blot法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NF-κB抑制物激酶β(IKK-β)的蛋白表达。结果 HMGN1处理后,BV2细胞形态发生明显变化,呈阿米巴样;与0 ng/mL HMGN1组相比,TNF-α、 IL-6、 IL-1β、 MCP-1的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高;M1型标志物iNOS的mRNA水平随HMGN1剂量的增加而升高,M2型标志物CD206的水平随HMGN1剂量的升高而降低。与模型组相比,拮抗剂组M1型标志物iNOS的mRNA水平显著降低,M2型标志物CD206的水平显著升高。免疫荧光细胞化学染色结果也显示MI型标志物iNOS在拮抗剂组中的表达降低。Western blot的结果提示,拮抗剂组iNOS、 TLR4、 MyD88、 NF-κB p65和IKK-β的蛋白表达显著降低。结论 HMGN1可能通过激活TLR4/MyD88/NF-κB p65/IKK-β信号通路诱导BV2小胶质细胞活化来上调其促炎介质的水平。

胰岛素联合贝那普利下调高迁移率核小体蛋白1/Toll样受体4的表达改善糖尿病肾组织炎症的研究

目的探讨胰岛素联合贝那普利对糖尿病小鼠肾脏病变的影响及其相关机制。方法 8周龄C57BL/6健康小鼠25只,选取5只作为正常对照组(NC组),余20只腹腔注射150mg/kg的STZ诱导建立T1DM模型后随机平均分为单纯糖尿病(DM)组、胰岛素治疗(INS)组、贝那普利治疗(BEN)组及胰岛素联合贝那普利治疗(INS+BEN)组。8周后检测各组血糖、肾重/体重(KW/BW)和尿白蛋白/肌酐比值(UACR),观察肾组织形态学变化,检测肾组织高迁移率核小体蛋白1(HMGN1)、Toll样受体4(TLR4)的表达。结果与NC组比较,DM组血糖、KW/BW及UACR升高[(8.571±0.701)vs(24.280±1.944)mmol/L,(1.438±0.022)vs(1.698±0.088),(97.691±10.680)vs(697.673±168.781)μg/mg,P<0.01],可见肾小管间质炎性细胞浸润,系膜扩增改变,HMGN1和TLR4的mRNA、蛋白表达增加;与DM组比较,INS+BEN组KW/BW无明显改变[(1.698±0.088)vs(1.489±0.065),P>0.05],而血糖和UACR下降[(24.280±1.944)vs(12.150±1.150)mmol/L,(697.673±168.781)vs(148.570±28.935)μg/mg,P<0.05],肾脏组织病变减轻,HMGN1和TLR4的mRNA、蛋白表达降低,且上述变化较BEN组、INS组改善明显。Pearson相关性分析显示,HMGN1和TLR4在肾组织中的表达呈正相关,且两者表达量的变化与肾脏系膜指数也呈正相关。结论胰岛素联合贝那普利可改善STZ糖尿病小鼠的肾脏病变,其机制可能与降低HMGN1和TLR4的表达有关。

HMGN1在糖尿病肾病小鼠肾小管上皮-间充质转化中的作用

目的明确糖尿病肾病小鼠模型中肾小管上皮细胞-间充质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)中高迁移率核小体结合蛋白1(high mobility group nucleosome binding domain 1, HMGN1)表达水平的变化,并探讨HMGN1在肾脏纤维化中的作用。方法20只C57BL/6小鼠随机分成对照组、模型组、贝那普利组和胰岛素组。药物干预8周后处死小鼠取血、尿和肾组织样本,分别检测常规生理、生化指标;使用HE、天狼星红染色法检测肾脏结构及纤维化情况;使用免疫组化、原位杂交法检测肾组织中HMGN1、CD68、F4/80、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)的蛋白及mRNA表达水平。结果模型组血糖、肾脏指数、尿蛋白肌酐比均明显高于正常组。模型组中,HE染色显示肾小球肥大、肾小管间质炎性细胞浸润;天狼星红染色显示肾组织内胶原纤维蛋白沉积;且HMGN1蛋白及mRNA表达水平增高,CD68、F4/80阳性细胞数增加,α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin蛋白表达降低(均P<0.05)。贝那普利干预后上述指标未见明显改善。胰岛素干预后,CD68阳性细胞数、α-SMA蛋白表达水平较模型组降低,E-cadherin蛋白表达水平较模型组增高(均P<0.05)。相关性分析显示,HMGN1表达水平与CD68、F4/80、α-SMA、E-cadherin、胶原纤维蛋白相关,而CD68和F4/80蛋白水平分别与α-SMA、胶原纤维蛋白、血糖相关(均P<0.05)。结论HMGN1参与糖尿病肾病纤维化进展,其相关机制可能与诱导巨噬细胞相关的EMT过程有关。