外周血核心结合因子-β核苷酸结合寡聚化结构域样受体3组织抑制剂在膝骨关节炎中的表达及与病情的相关性分析

目的分析外周血核心结合因子-β(Cbf-β)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、组织抑制剂(TIMP-1)在膝骨关节炎中的表达及与病情的相关性。方法选取2021年2月至2022年2月河南神火集团总医院收治的膝骨关节炎患者150例设为研究组,另选取同期在河南神火集团总医院进行体检的健康人群150名设为对照组。分析2组人群外周血Cbf-β、NLRP3、TIMP-1水平表达情况。使用磁共振成像对患者进行检测,随后按照Recht标准将膝骨关节炎分为四级,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级,分析不同病情下患者外周血Cbf-β、NLRP3、TIMP-1水平表达情况及三者的相关性。结果与对照组相比,研究组Cbf-β、TIMP-1水平较高,NLRP3水平较低,差异具有统计学意义(P<0.05);与Ⅰ级患者相比,Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者Cbf-β、TIMP-1水平呈不断上升趋势,NLRP3呈不断下降的趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);Cbf-β、NLRP3呈负相关(r=-9.068,P=0.003);Cbf-β、TIMP-1呈正相关(r=11.830,P=0.001);NLRP3、TIMP-1呈负相关(r=-22.820,P=0.001);Cbf-β、TIMP-1与膝骨关节Recht等级呈正相关;NLRP3与膝骨关节炎Recht等级呈负相关。结论外周血Cbf-β、NLRP3、TIMP-1在膝骨关节炎中呈现出异常表达,三者在膝骨关节炎中存在着相关性,且Cbf-β、TIMP-1与膝骨关节Recht等级呈正相关;NLRP3与膝骨关节炎Recht等级呈负相关。说明三者与膝骨关节炎密切相关,对其检测有着一定的诊断价值。

白皮杉醇调控miR-106b-5p/RUNX3轴对宫颈癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究白皮杉醇(PIC)调控微小RNA-106b-5p(miR-106b-5p)/RUNT相关转录因子3(RUNX3)轴对宫颈癌(CC)细胞迁移及侵袭的影响。方法使用不同浓度PIC(0、20、40、80和160μmol/L)培养液处理人CC Hela细胞,通过CCK-8法检测PIC对细胞增殖活力的影响,以确定PIC最佳使用浓度。将Hela细胞分为Control组、PIC组、PIC+NC mimics组、PIC+miR-106b-5p mimics组、NC inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor组、miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组及miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组。实时荧光定量PCR检测各组Hela细胞miR-106b-5p表达水平;Transwell法检测各组Hela细胞迁移及侵袭能力;Western blot法检测各组Hela细胞中RUNX3、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验检测miR-106b-5p与RUNX3靶向关系。结果Hela细胞增殖活力随着PIC处理浓度的增高而呈现降低趋势(P<0.05),其中80μmol/L PIC对Hela细胞的抑制作用接近半数抑制浓度(IC50),故选择80μmol/L为后续研究的PIC浓度。与Control组相比,PIC组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平均降低,迁移和侵袭细胞数量减少,RUNX3表达水平增加(P<0.05);与PIC+NC mimics组相比,PIC+miR-106b-5p mimics组miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多,RUNX3表达水平降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验证实RUNX3为miR-106b-5p的靶基因。与NC inhibitor组相比,miR-106b-5p inhibitor组RUNX3表达水平增加,miR-106b-5p、MMP2与MMP9表达水平降低,迁移和侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-106b-5p inhibitor+si-RNA组相比,miR-106b-5p inhibitor+si-RUNX3组RUNX3表达水平降低,miR-106b-5p、MMP2和MMP9表达水平增加,迁移和侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论PIC通过抑制miR-106b-5p表达、促进RUNX3表达来抑制CC细胞迁移及侵袭。

胃癌高发区人群RUNX3表达与胃黏膜病变的关系

目的:探讨RUNX3蛋白表达与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染相关胃黏膜病变的关系。方法:选取山东省临朐县胃癌高发区具有明确胃黏膜病理诊断的1 026例H.pylori感染者为研究对象,采用免疫组织化学方法,检测最高诊断部位胃黏膜组织RUNX3蛋白表达状况。结果:在1 026例患有不同胃黏膜病变的研究对象中,RUNX3表达阳性者为359例,表达率为35.0%(359/1 026),表达率随胃黏膜病变的加重呈逐渐下降趋势,由浅表性胃炎/正常(superficial gastritis/normal,SG/N)的65.6%(40/61)降至异型增生(dysplasia,DYS)的22.4%(60/268,P<0.01)。以SG/N为对照组,RUNX3表达阳性为参照,RUNX3表达阴性者患慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)、肠上皮化生(intestinal metaplasia,IM)和DYS的风险分别为表达阳性者的2.83倍[oddsratio(OR)=2.83,95%confidence interval(CI)=1.58～5.06)],3.52倍(OR=3.52,95%CI=1.98～6.24)和7.19倍(OR=7.19,95%CI=3.81-13.56)。进一步分析显示,不论吸烟(或饮酒)状况如何,RUNX3表达阴性者与表达阳性且不吸烟(或不饮酒)者相比,患IM和DYS的风险均明显增加,ORs在2.78～12.29之间。结论:RUNX3蛋白表达水平与H.pylori感染相关胃黏膜病变程度呈明显的负相关,提示RUNX3表达下调可能在胃黏膜病变的演变过程中起重要作用。

钛表面粗糙度对成骨细胞核心结合因子α1亚基基因表达的影响

目的 通过研究种植体表面粗糙度对成骨细胞黏附、增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量以及核心结合因子α1亚基（core bindingfactor alpha 1 subunit,Cbfα1）基因表达的影响,探讨种植体表面形态影响界面生物学反应的可能途径.方法 直径15 mm、厚2 mm的纯钛圆盘试件48个,均分为4组,每组12个.分别采用粒度为88～125μm（微度粗糙组）、125～150μm（中度粗糙组）、250～500μm（重度粗糙组）的金刚砂颗粒喷砂,后两组试件再用10%的盐酸、硫酸混合液处理5 min;剩余1组未处理作为对照组.测试4组试件表面粗糙度.将成骨细胞接种于4组试件表面,采用扫描电镜、吖啶橙荧光染色及考马斯亮蓝染色检测试件粗糙度对成骨细胞黏附、增殖的影响.采用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定成骨细胞ALP含量的变化.采用荧光实时定量聚合酶链反应测定成骨细胞Cbfα1基因表达的变化.结果 处理后微、中、重度粗糙组和对照组的粗糙度分别为（1.00±0.20）、（1.67±0.08）、（2.40±0.20）和（0.12±0.03）μm.3个粗糙组成骨细胞的数量及ALP含量均高于对照组（P＜0.05）.与对照组相比,粗糙表面上Cbfα1的mRNA水平明显增加（P＜0.05）;中度粗糙组为（0.93±0.03）;微度粗糙组次之,为（0.50±0.03）;重度粗糙组最低,为（0.37±0.07）;对照组仅为（0.10±0.06）.结论 种植体表面粗糙度的差异可造成成骨细胞骨源性基因Cbfα1表达及ALP含量不同.粗糙度在1～2μm范围内成骨细胞的生长、ALP含量及Cbfα1基因的表达较强.

镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的：探讨不同浓度镁离子对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的影响。方法原代培养获取VSMCs，进行形态学及免疫细胞鉴定，后将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、镁干预组。阴性对照组采用含10%胎牛血清培养，高磷组采用高磷培养基培养，镁干预组在高磷培养基的基础上分别加入不同浓度氯化镁，使镁离子终浓度分别为1、2、3 mmol/L（镁干预组1~3），刺激7 d后行钙化检测，测定钙含量及碱性磷酸酶（ALP）活性，并行反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内核心结合因子α1（Cbfα1）mRNA的表达。结果高磷组和镁干预组VSMCs均有钙盐沉积，其钙含量均高于阴性对照组；镁干预组随镁离子浓度增大钙化结节逐渐缩小，除镁干预组1钙含量与高磷组差异无统计学意义外，镁干预组2和镁干预组3均低于高磷组（均P＜0.05）。VSMCs ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达除镁干预组3与阴性对照组差异无统计学意义外，其余组均高于阴性对照组（P＜0.05）。镁干预组随镁离子浓度增大，ALP活性和Cbfα1 mRNA的表达水平均逐渐降低，且均低于高磷组（P＜0.05）。结论镁离子可在一定程度上抑制高磷诱导的VSMCs钙化和成骨样转分化，其可能是通过降低VSMCs中Cbfα1的表达来实现的。

镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠胸主动脉血管钙化中的作用及机制研究

目的探讨镁离子在高磷诱导慢性肾衰竭大鼠模型血管钙化中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠采用随机数字表法均分为对照组(A组)、慢性肾衰竭血管钙化组(B1组)、低镁组(B2组)、高镁组(B3组)。用硫酸腺嘌呤加高磷饮食复制慢性肾衰竭大鼠血管钙化模型。造模成功后测量4组大鼠主动脉脉搏波速率(PWV),反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测主动脉血管钙化标志分子核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA的表达情况,von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法测定钙水平。结果 B1组血肌酐、尿素氮、血磷水平高于A组(t=32.284、22.010、26.000,P<0.05)。4组血镁水平比较,差异有统计学意义(F=7.745,P<0.05);B3组血镁水平高于B2组(q=2.897,P<0.05)。4组主动脉钙水平比较,差异有统计学意义(F=6.824,P<0.05);B2组主动脉钙水平高于B1组(q=13.192,P<0.05);B1组主动脉钙水平高于A组(q=21.925,P<0.05);B3组主动脉钙水平低于B1组和B2组(q=9.333、21.782,P<0.05)。4组胸主动脉PWV值比较,差异有统计学意义(F=6.454,P<0.05);B2组PWV值高于B1组(q=13.492,P<0.05);B1组PWV值高于A组(q=14.311,P<0.05);B3组PWV值低于B1组和B2组(q=5.333、16.865,P<0.05)。4组胸主动脉Cbfα1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=3.212,P<0.05);B1和B2组Cbfα1 mRNA表达量高于A组(q=7.333、13.565,P<0.05);B3组Cbfα1mRNA表达量低于B1组和B2组(q=10.198、13.858,P<0.05);B2组Cbfα1 mRNA表达量高于B1组(q=12.279,P<0.05)。结论镁离子能够抑制高磷诱导的慢性肾衰竭大鼠血管钙化,改善血管弹性功能;其可能机制之一是镁离子通过抑制高磷诱导血管平滑肌细胞表型转化实现。

miR-370-3p对抑郁症大鼠抑郁样行为和神经元损伤的影响

目的探究miR-370-3p对抑郁症大鼠的抑郁样行为和神经元损伤的影响。方法采用在线预测软件TargetScan3.1分析miR-370-3p和RUNX1的靶向关系,并通过双荧光素酶报告实验验证其靶向关系,构建过表达miR-370-3p、RUNX1的293T细胞株,采用qPCR和Western blotting分别检测细胞中miR-370-3p及RUNX1 mRNA和蛋白的表达。将60只SD大鼠随机分为对照组、模型组、NC agomiR、miR-370-3p agomiR、Ad-RUNX1组和miR-370-3p+RUNX1组,每组10只。采用慢性不可预见性温和刺激方法构建抑郁症大鼠模型。对各组大鼠进行旷场实验、糖水偏好实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验检测大鼠抑郁行为,采用HE染色观察大鼠海马病理变化。结果与模型组相比,miR-370-3p agomiR组大鼠下丘脑细胞损伤明显减轻,miR-370-3p表达、旷场实验中总移动距离、蔗糖偏好度、进入开放臂及闭合臂次数明显增加,而强迫游泳实验不动时间明显减少(均P<0.05)。miR-370-3p和RUNX1存在靶向关系,与Ad-RUNX1组比较,miR-370-3p+RUNX1组293T培养细胞中RUNX1 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05);与Ad-RUNX1组比较,miR-370-3p+RUNX1组大鼠旷场实验总移动距离、蔗糖偏好度、进入开放臂及闭合臂次数明显增加,强迫游泳实验不动时间明显降低,下丘脑细胞损伤明显减轻(均P<0.05)。结论miR-370-3p可显著改善抑郁症大鼠抑郁样行为,减轻其神经元损伤,可能与其靶向抑制RUNX1的表达有关。

植物染色质重塑复合体研究进展

染色质重塑复合体在基因的转录调控方面发挥重要作用。综述了近年来国内外学者在染色质重塑复合体的组成、结构、分类及功能分析方面的最新研究概况。重点介绍了植物领域染色质重塑复合体核心亚基的研究进展,并分析了目前影响该领域发展的原因及解决对策,同时还对应用前景进行了展望。

高浓度他克莫司抑制人骨髓间质干细胞增殖及向成骨细胞分化(英文)

目的探讨他克莫司（FK506）对人骨髓间质干细胞（hBMSCs）增殖及向成骨细胞分化的影响。方法 FK506 0.001-5μmo.lL-1处理hBMSCs细胞中,雌二醇0.01μmol·L^-1或咖啡因100μmol·L^-1为阳性对照组,作用24 h后用BrdU掺入法检测细胞增殖,在促成骨细胞分化液中作用8 d后用比色法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,作用12 d后用邻甲酚酞络合法检测钙沉积量;通过检测磷酸盐释放量间接反映钙调神经磷酸酶（CaN）活性,Western印迹法检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）表达。结果与DMSO对照组相比,FK506 0.001-0.01μmol·L^-1促进细胞增殖,但对ALP活性及钙沉积量无影响;FK506 0.5-5μmo·lL^-1呈浓度依赖性地抑制细胞增殖,显著抑制ALP活性及减少钙沉积量（P〈0.05）。此外,FK5060.1-5μmo·lL^-1浓度依赖性地降低CaN活性,与相同浓度FK506呈浓度依赖性地下调Cbfα1的表达效应相一致。结论高浓度FK506可通过CaN/Cbfα1通路抑制hBMSCs增殖及向成骨细胞成骨分化。

人皮肤成纤维细胞体外转染Brg1基因的实验研究

目的探讨重组Brg1基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染对细胞增殖和活性的影响。方法体外重组Brg1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞;通过流式细胞仪检测报告基因表达,并确定细胞转染效率;应用Realtime PCR比较转染前后Brg1 mRNA的表达;MTT法检测Brg1基因对细胞增殖能力的影响。结果Brg1基因转染后,(73.0±6.7)%的被转染细胞表达报告基因;Brg1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为(6.23±1.18)、(1.11±0.22)和(1.52±0.12),转染组Brg1 mRNA相对表达量较未转染组及转染空载体组明显增高(P<0.01);细胞的增殖能力在Brg1基因转染前后无显著差异。结论人皮肤成纤维细胞可作为Brg1转染的靶细胞,转染Brg1基因对人成纤维细胞的增殖能力无显著影响。

血清Runx2 mRNA表达与尿毒症患者动脉血管钙化的关系研究

目的探讨血清Runt相关转录因子2(Runx^(2))mRNA表达与尿毒症患者动脉血管钙化的关系。方法选取行自体动静脉内瘘成形术及切除重造术的尿毒症患者78例并收集患者的血管组织、血清样本及临床资料。根据硝酸银染色结果进行钙化评分,并将患者分为钙化组(n=23)和未钙化组(n=55)。采用免疫组化法检测血管组织的Runx^(2)表达水平,实时荧光定量PCR检测血清Runx^(2) mRNA表达水平。比较2组患者临床各指标的变化,通过线性回归分析各指标对血管钙化的影响因素,通过受试者工作特征(ROC)曲线评价血清Runx^(2) mRNA表达水平对血管钙化的预测能力。结果硝酸银染色结果显示,与未钙化组比较,钙化组黑色沉积显著增多;免疫组化结果显示,钙化组Runx^(2)评分显著增高(P<0.01)。与未钙化组比较,钙化组年龄、透析龄、血清Runx^(2) mRNA表达水平、血磷、全段甲状旁腺素(iPTH)均显著增高,血白蛋白和血钙显著降低(P<0.05)。Spearman相关分析显示,血清Runx^(2) m RNA水平、年龄、透析龄、血磷、i PTH、Runx^(2)评分与钙化评分呈正相关,血白蛋白和血钙与钙化评分呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析结果显示,血清Runx^(2) mRNA表达水平升高、高透析龄、低血钙是尿毒症患者动脉血管钙化的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清Runx^(2) mRNA、透析龄和血钙三者联合诊断预测血管钙化的曲线下面积(AUC)为0.934。结论血清Runx^(2) mRNA表达是尿毒症患者动脉血管钙化的独立危险因素,可能成为诊断预测尿毒症患者动脉血管钙化的生物标志物。

同时伴有t(8;21)和inv(16)/t(16;16)染色体易位的急性髓系白血病:实验室诊断

目的探讨同时具有t(8;21)和inv(16)/t(16;16)染色体易位的急性髓系白血病(AML)的实验室诊断特征。方法取患者骨髓进行形态学及流式细胞术检测;应用RHG显带技术进行细胞遗传学分析;应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)和荧光原位杂交技术(FISH)检测AML1/ETO、核心结合因子-β(CBFβ)/平滑肌肌球蛋白重链基因(MYH11)融合基因。结果细胞形态学诊断为急性粒单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多(M4Eo);流式细胞术分析细胞表达髓系抗原;染色体RHG显带示46,xx,t(8;21)(q22;q22)[11]//46,xx[9];FISH及RQ-PCR检测示AML1/ETO及CBFβ/MYH11阳性。结论该病例的实验室诊断结果对CBF-AML致病机制的研究具有重要意义,也为临床实施个体化治疗方案提供了实验室依据。

Runx2基因高表达对脐血间充质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

背景:Runx2在成骨分化的信号途径中起核心作用,在诱导干细胞成骨分化及促进骨愈合方面具有重要的研究意义。目的:观察Runx2基因高表达对脐血间充质干细胞成骨分化的影响。方法:(1)扩增Runx2基因,利用腺病毒载体构建Runx2重组腺病毒(pA d-Runx2),检测病毒滴度后用重组腺病毒感染脐血间充质干细胞,并于荧光显微镜下观察荧光表达变化;(2)感染后1,3,7,14 d采用实时荧光定量PCR及Western blot检测脐血间充质干细胞Runx2、BMP-2、OCN、ALP的mRNA和蛋白表达。结果与结论:(1)成功制备pA d-Runx2重组腺病毒,病毒滴度为1.7×10^(10)pfu/L;(2)Runx2重组腺病毒感染脐血间充质干细胞后细胞形态呈成骨样细胞改变,对照组细胞无明显变化;(3)感染组细胞Runx2、BMP-2、OCN、ALP mRNA和蛋白的表达量随感染时间的增加均有不同程度的上调;(4)结果表明,高表达Runx2基因腺病毒感染脐血间充质干细胞,能够上调BMP-2、OCN、ALP基因的表达,从而促进脐血间充质干细胞的成骨分化。

Brg1及VEGF信号通路相关蛋白在Peutz-Jeghers综合征中的表达及意义

目的:检测染色质重构复合物核心催化亚基(Brg1)及VEGF信号通路相关蛋白在Peutz-Jeghers综合征(PJS)中的表达,探讨其与PJS息肉发生发展的关系.方法:应用免疫组织化学染色技术分析72枚PJS息肉、12例正常小肠黏膜及30例小肠癌中Brg1、VEGF、COX-2蛋白的表达和分布,比较其在三种组织表达程度的差异.结果:Brg1、VEGF、COX-2在小肠腺癌组织中的阳性表达率明显高于PJS息肉组织和正常小肠黏膜组织(Brg1:76.67%vs54.17%,16.67%;VEGF:80.00%vs58.33%,8.33%;COX-2:83.33%vs62.50%,25.00%,均P<0.01).PJS息肉组织中Brg1与VEGF蛋白表达率呈显著正相关(χ2=15.734,r=0.467),与COX-2蛋白表达率呈正相关(χ2=7.552,r=0.324).结论:在PJS息肉中Brg1及VEGF信号通路可能参与了PJS的发生,并且是其癌变的重要因素之一.

淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:传统中药淫羊藿应用于各类骨科疾病有着悠久的历史,其主要成分之一淫羊藿苷有多种生物学效应。目的:探讨淫羊藿苷在体内及体外对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用及机制。方法:在体外存在或不存在成骨诱导培养的条件下,用淫羊藿苷作用于骨髓间充质干细胞,通过RT-PCR检测runx2、ocn和osx基因的表达情况,以及通过茜素红染色检测成骨细胞分泌的钙结节数量。用淫羊藿苷喂养大鼠(2 mg/d)5周后,进行Micro CT扫描并分析胫骨上段骨结构。结果与结论:(1)无论是否存在成骨诱导培养条件,淫羊藿苷均能促进成骨分化相关基因的表达;(2)在成骨诱导培养时,淫羊藿苷能明显增加钙结节沉积;(3)动物实验表明淫羊藿苷能显著促进骨小梁的生成。

ACTN4通过靶向NDUFV1对食管鳞状细胞癌的细胞增殖的影响

目的探究α-辅肌动蛋白-4(ACTN4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况及其对ESCC细胞增殖的影响。方法采用免疫组化实验检测ESCC组织及配对正常组织中ACTN4的表达,统计学方法分析ACTN4与临床病理特征的相关性;构建ACTN4 shRNA慢病毒表达载体,利用慢病毒包装技术建立ACTN4稳定低表达的ESCC细胞株,Western blot检测敲低效果,克隆形成实验检测ACTN4敲低对细胞增殖的影响;基于前期黑色素瘤A375细胞中ACTN4敲低的蛋白质组学分析结果,选取候选下游靶蛋白并在ESCC细胞中进行验证。结果免疫组化实验结果显示,ESCC组织中的ACTN4表达量高于正常组织(P<0.0001);成功构建ACTN4 shRNA慢病毒质粒并获得稳定低表达ACTN4的ECA109细胞株;克隆形成实验结果表明,ACTN4敲低抑制ECA109细胞的增殖;ESCC细胞中ACTN4的敲低下调NADH∶泛素氧化还原酶核心亚基V1(NDUFV1)蛋白的表达。结论ESCC细胞中,高表达的ACTN4能够促进细胞增殖,并上调NDUFV1的蛋白表达。

miR-130a、RUNX3在食管鳞癌中表达的相关性及其临床意义

【目的】探讨miR-130a、重组人Runt相关转录因子3(RUNX3)在食管鳞癌中表达的相关性及其临床意义。【方法】本院接受手术治疗的84例食管鳞癌患者,取患者手术时癌组织为研究对象,相应的癌旁组织为对照。采用qRT-PCR检测组织中miR-130a表达水平;采用Westernblot法及免疫组化法检测组织中RUNX3蛋白表达。对所有患者进行随访,探讨miR-130a与RUNX3表达对食管鳞癌患者预后的影响。【结果】与癌旁组织相比,食管鳞癌组织中miR-130a表达水平较高(P<0.05),RUNX3蛋白表达水平较低(P<0.05)。食管鳞癌组织中miR-130a与RUNX3蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。miR-130a和RUNX3蛋白表达水平与T分期、组织分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-130a高表达患者中位生存时间显著短于miR-130a低表达患者(P<0.05);RUNX3低表达患者中位生存时间显著短于RUNX3高表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析表明,T分期T3~T4期、有淋巴转移、miR-130a高表达、RUNX3低表达是食管鳞癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。【结论】食管鳞癌癌组织中miR-130a表达水平上调、RUNX3蛋白表达水平下调,二者与食管鳞癌患者预后不良密切相关,且miR-130a高表达、RUNX3低表达的食管鳞癌患者发生预后不良的风险较大。

核心结合因子和Ⅱ型胶原在慢性肾脏病5期患者桡动脉中的表达

目的探讨慢性肾脏病（CKD）5期患者桡动脉中核心结合因子（Cbfα-1）和Ⅱ型胶原（ColⅡ）表达及其与血管钙化发生的关系。方法40例CKD5期患者在接受动-静脉内瘘手术时，留取一段桡动脉。对10例在本院接受胃大部切除术、肾功能正常患者，留取一段胃左动脉为对照组。钙盐沉积采用von Kossa染色法，根据yonKossa染色结果，CKD5期组又分为CKD5期无钙化组、轻中度钙化组和重度钙化组。Cbfα-1和ColⅡ的表达采用免疫组化染色法。同时测定血钙、磷、甲状旁腺激素（iPTH）、C反应蛋白（CRP）水平。结果40例CKD5期患者中有17例（42．5％）出现血管钙化，主要发生在血管中膜，对照组均未见血管钙化发生。CKD5期轻中度钙化组和重度钙化组中，动脉中膜均有Cbfα-1、ColⅡ的阳性表达；23例CKD5期无钙化组中，有18例（78．3％）至少有Cbfα-1、ColⅡ其中一种的阳性表达。对照组均无Cbfα-1、Col Ⅱ的阳性表达。CKD5期轻中度钙化组和重度钙化组，血管中膜Cbfα-1、ColⅡ免疫组化的阳性率均显著高于CKD5期无钙化组，但轻中度钙化组和重度钙化组之间的差异无统计学意义。CRP、钙磷乘积与Cbfα-1、ColⅡ呈正相关；血磷与Cbfα-1（r=0．786，P〈0．01）、ColⅡ（r=0．785，P〈0．01）呈正相关。结论CKD5期患者桡动脉钙化以中膜为主，钙化的动脉均有Cbfα-1、ColⅡ的高表达，且其表达早于组织学上血管钙化的发生。Cbfα-1和ColⅡ可能在血管钙化的发生、发展中起到了重要作用。

Akt／mTOR在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的表达及对核心结合因子的调节

目的观察蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt/mTOR）在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化模型中的表达及其对核心结合因子α1（Cbfα1）表达的调节。方法体外培养的大鼠VSMC，分为正常磷组（1．3mmol/L）和高磷组（2．6mmol／L），培养7d后，观察细胞形态及茜素红染色细胞钙盐沉积，实时定量PCR检测Cbfα1、骨桥蛋白（OPN）mRNA水平，Western印迹检测磷酸化Akt（p-Akt）（ser473）、磷酸化mTOR（P-mTOR）（S2448）、Cbfα1和OPN蛋白的表达。检测到Akt、mTOR活化表达后，给予不同浓度的渥曼青霉素（5、10、30、50和100nmol/L）和雷帕霉素（1、10和100ng／m1）干预24、48h后，检测Cbfα1、OPN、P-Akt和P-mTOR基因和蛋白表达，7d后观察VSMC钙盐沉积变化。结果VSMC高磷干预7d后，与正常磷组相比，高磷组钙盐沉积明显，cbfal、OPNmRNA表达增高（均P〈0．05），p-Akt、P-mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达增高（均P〈0．05）。渥曼青霉素、雷帕霉素干预24h后，相对于高磷组，高磷＋渥曼青霉素30、50、100nmol/L组cbfal、OPNmRNA表达明显下调（均P〈0．05）；高磷＋雷帕霉素1、10和100ng／ml组Cbfα1、OPNmRNA表达下调（均P〈0．05）。渥曼青霉素、雷帕霉素干预48h后，与高磷组比较，高磷＋渥曼青霉素30、50、100nmol/L）组p-Akt、Cbfα1和OPN蛋白表达明显下调（均P〈0．05）；高磷＋雷帕霉素1、10、100ng/ml组，p-mTOR、CbfM和OPN蛋白表达呈剂量依赖性下调（均P〈0．05）。VSMC培养7d后，与高磷组相比，高磷＋渥曼青霉素和高磷＋雷帕霉素组钙盐沉积明显减轻。结论高磷可体外诱导大鼠VSMC钙化，Akt、mTOR参与了高磷诱导的大鼠VSMC钙化，并可能通过调控Cbfα1因子而起作用。

Runx3基因CpG岛甲基化与胃癌发生的关系

目的通过研究Runx3基因CpG岛甲基化对胃癌病变的影响，探讨甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法与焦磷酸测序（PS）法对Runx3基因甲基化检测的特异性。方法选取150例胃癌患者胃切除标本及50例无癌变胃黏膜标本，以MSP法和Ps法同时检测其Runx3启动子的甲基化程度。结果与正常胃黏膜相比，胃癌组织Runx3的甲基化程度差异有显著性意义（MSP法：67．3％比40．0％，P=0．002；PS法：76．0％比30．0％，P〈0．01）。MSP法显示Runx3甲基化只与肿瘤大小相关（P〈0．05）。而Ps法分析显示进展期胃癌的Runx3甲基化率高于早期胃癌（P〈0．05）；且其甲基化状态与肿瘤的大小（P=0．004）、Lauren分型（P=0．043）、浸润的深度（P〈0．01）、淋巴结转移（P=0．021）及肿瘤TNM临床分期（P=0．045）等临床病理特征之间存在相关性。结论Runx3启动子甲基化与胃癌临床病理特征包括肿瘤大小、Lauren分型、浸润的深度、淋巴结转移以及肿瘤TNM临床分期密切相关；与MSP法相比，Ps法敏感性更高，且检测结果与临床病理学结果之间有显著相关性，对于胃癌的早期诊断和治疗有着重要意义。