核心岩藻糖基转移酶缺损导致B细胞抗体产生下降

目的探讨核心岩藻糖基转移酶(Fut8)对B细胞抗体产生的影响。方法小鼠经OVA免疫后,取其脾脏分离单个淋巴细胞,应用流式细胞术分析小鼠脾脏细胞中B细胞群的分布情况;ELISPOT实验检测小鼠B细胞产生抗体的能力;收集小鼠OVA免疫过程中第0、14、28天的血清,ELISA技术检测小鼠血清中抗体的效价。结果 Fut8基因缺失导致小鼠脾脏细胞中所有的B细胞和成熟B细胞的数量下降(P<0.05);Fut8^(-/-)小鼠和Fut8^(+/+)小鼠抗体产生细胞的平均数量分别为16个和27个,与Fut8^(+/+)小鼠相比,Fut8^(-/-)小鼠B细胞产生抗体的能力下降(P<0.05);第1次免疫之后Fut8^(-/-)和Fut8^(+/+)小鼠抗-OVA IgG抗体的效价分别为1∶12 800和1∶51 200,第2次免疫之后,抗体的效价分别为1∶102 400和1∶409 600,Fut8的缺失导致血清中抗体效价下降(P<0.05)。结论核心岩藻糖基化对B细胞的抗体产生具有重要的调节作用。

α-1,6岩藻糖基转移酶与甲胎蛋白异质体在原发性肝癌诊断中的应用

目的:分析α-1,6岩藻糖基转移酶(FUT8)与甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在原发性肝癌(PLC)诊断中的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测我院92例PLC患者和42例非原发肝癌(NPLC)患者血清中FUT8和AFP-L3。结果:经统计学分析,PLC组与NPLC组血清FUT8和AFP-L3比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:α-1,6岩藻糖基转移酶(FUT8)与甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在原发性肝癌(PLC)诊断中有一定的应用价值。

核心岩藻糖基转移酶Fut8基因敲除小鼠肠道菌群特征

目的探究Fut8基因敲除对ICR小鼠肠道菌群结构的影响。方法分别在Fut8^(+/+)和Fut8^(-/-)小鼠出生后不同时间点检测体重,采集粪便样本,采用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的方法检测小鼠粪便中菌群的组成;利用高效液相色谱法(HPLC)测定Fut8^(+/+)和Fut8^(-/-)小鼠Fut8酶活。结果 Fut8^(-/-)小鼠与Fut8^(+/+)小鼠相比生长缓慢(P<0.05);完全丧失核心岩藻糖基化活性;肠道菌群结构不同,其中拟杆菌门微生物存在显著差异。结论核心岩藻糖基转移酶Fut8基因敲除对小鼠肠道菌群结构有显著影响。

核心岩藻糖修饰与疾病相关性研究进展

糖基化是生物体内功能最多样的一种翻译后修饰,核心岩藻糖(core fucose,CF)为N-聚糖的一种常见糖型,受α-1,6岩藻糖基转移酶催化调控。近年来研究表明,CF修饰在肿瘤等疾病的发生与进展中发挥重要作用。糖蛋白丰度较低、糖链的微观不均一性以及质谱等检测技术的限制,给CF修饰蛋白质的发现及应用研究带来了极大的挑战。本文主要介绍蛋白质CF修饰的生物合成、调控机制以及参与调控的生理病理过程,期望为CF修饰蛋白质的发现及临床应用提供新思路。

复方生脉成骨胶囊修复激素性股骨头坏死的作用机制

背景:复方生脉成骨胶囊治疗早期激素性股骨头坏死的疗效佳,但具体治疗机制尚不完全明确。目的:观察复方生脉成骨胶囊干预对激素性股骨头坏死大鼠骨组织中岩藻糖基转移酶8、成骨基因及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达的影响。方法:取60只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为空白组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组,每组12只。模型组和中药低、中、高剂量组通过皮下注射咪喹莫特(每2周一次,共2次)与臀肌注射甲强龙(1次/周,共4次)的方法建立激素性股骨头坏死模型,末次造模给药后第2天,中药低、中、高剂量组分别灌胃给予1.89,3.78,7.56 g/(kg·d)的复方生脉成骨胶囊溶液,模型组灌胃给予等量生理盐水,连续给药8周。给药结束后,分别进行股骨头micro-CT扫描、组织学染色、压缩实验、RT-qPCR及Western blot检测。结果与结论:①micro-CT扫描显示,与空白组比较,模型组大鼠骨小梁体积分数、骨小梁数量及骨小梁厚度减少(P<0.05),骨小梁离散度增加(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组骨小梁体积分数、骨小梁数量及骨小梁厚度增加(P<0.05),骨小梁离散度减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。②苏木精-伊红染色显示,与模型组比较,中药低、中、高剂量组空骨陷窝率减少(P<0.05),且呈剂量依赖性;免疫组化染色显示,与空白组比较,模型组岩藻糖基转移酶8、Runx2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组岩藻糖基转移酶8、Runx2、骨形态发生蛋白2的蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。③压缩实验显示,与模型组相比,中药低、中、高剂量组股骨头最大载荷及弹性模量升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;④RT-qPCR及Western blot检测显示,与空白组相比,模型组岩藻糖基转移酶8、Runx2、碱性磷酸酶、骨钙素、成骨细胞特异性转录因子及骨形态发生蛋白2的mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,中药低、中、高剂量组上述指标的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。与空白组比较,模型组Wnt2、低密度脂蛋白受体相关蛋白5及β-连环蛋白的mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),糖原合成酶激酶3β的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组Wnt2、低密度脂蛋白受体相关蛋白5及β-连环蛋白的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),糖原合成酶激酶3β的mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。⑤结果表明,复方生脉成骨胶囊治疗激素性股骨头坏死的机制可能是通过上调岩藻糖基转移酶8表达来激活Wnt/β-catenin信号通路,促进骨形成。

阻断核心岩藻糖基化修饰对小鼠前B细胞信号传导能力的影响

目的 观察阻抑核心岩藻糖基化修饰对前B细胞信号传导的调节作用.方法 利用逆转录病毒包装技术建立核心岩藻糖转移酶Fut8基因沉默前B细胞株（70Z/3-Fut8-RNAi细胞）.用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot检测Fur8 mRNA、蛋白表达和细胞内信号分子的酪氨酸磷酸化水平.结果 成功构建重组pSINsi-hU6-Fut8 siRNA质粒,逆转录病毒包装后病毒滴度可达2.1×10^5 CFU/ ml.Real-time PCR及Western blot检测结果表明70Z/3-Fut8-RNAi细胞的Fut8基因和蛋白表达明显下降,蛋白表达水平下调70％ - 80％,mRNA水平下调70％ -80％,以及pre-BCR介导的细胞信号传导,即CD79a及BTK磷酸化显著下降.结论 成功构建70Z/3-Fut8-RNAi细胞株,Fut8修饰的核心岩藻糖基化可能在早期B细胞的细胞信号传导过程中发挥重要的调节作用.