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乙肝病毒核心蛋白及核心颗粒的结构及功能研究进展 被引量:7
1
作者 陈恒 刘书朋 +3 位作者 陈莉 项韶明 张大兵 张惟杰 《中国病毒学》 CSCD 2005年第1期95-100,共6页
关键词 乙肝病毒核心(抗原)蛋白 核心颗粒或核衣壳 结构 功能 二态性
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Muted蛋白介导CD63在嗜铬细胞大致密核心颗粒的定位 被引量:1
2
作者 郝振华 李巍 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期718-723,共6页
大致密核心颗粒(Large dense-core vesicles,LDCVs)是一种溶酶体相关细胞器(Lysosome-related organelles,LROs),在细胞受到刺激时快速释放其内含物,从而调节机体生长发育、物质代谢和能量代谢等,维持机体的稳态。Muted蛋白是溶酶体相... 大致密核心颗粒(Large dense-core vesicles,LDCVs)是一种溶酶体相关细胞器(Lysosome-related organelles,LROs),在细胞受到刺激时快速释放其内含物,从而调节机体生长发育、物质代谢和能量代谢等,维持机体的稳态。Muted蛋白是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1(Biogenesis of lysosomal organelles complex-1,BLOC-1)的一个亚基,参与调控溶酶体和多种细胞特异性LROs的生物学发生。四联体跨膜蛋白CD63最初被定位在内体-溶酶体系统,后来发现它也参与部分LROs膜的组成。CD63是否存在于LDCVs尚不清楚,其靶向运输过程是否依赖Muted蛋白也不明确。本研究以肾上腺嗜铬细胞为细胞模型,采用荧光共定位、活细胞追踪和密度梯度离心等实验鉴定CD63蛋白为LDCVs的膜组分,并探讨了其生物学功能。活细胞实验显示CD63-YFP特异性定位在NPY-ds Red标记的LDCVs上,并动态参与LDCVs膜的组成;密度梯度离心实验表明高密度区的CD63与LDCVs的标记蛋白VMAT1共同出峰;Muted蛋白缺乏的小鼠(Bloc1s5基因突变)是一种理想的Hermansky-Pudlak综合征(HPS)小鼠模型,免疫印迹实验显示该突变体小鼠肾上腺组织中CD63蛋白含量明显减少,暗示Muted蛋白可能参与CD63的分选。以上结果表明CD63是LDCVs的膜成分,CD63在胞内的稳态水平依赖于Muted蛋白,为HPS的病理发生机制提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 大致密核心颗粒 CD63 Muted 溶酶体相关细胞器 Hermansky-Pudlak综合征
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HBV病毒样核心颗粒应用研究进展 被引量:1
3
作者 李纬东 梁布锋 《中国预防医学杂志》 CAS 2002年第2期151-153,共3页
病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)是一种模拟病毒的颗粒形态特点,将外源基因片断产物呈递到病毒颗粒表面而形成的嵌合颗粒。它有与病毒颗粒相同的外部形态,甚至还有某些病毒受体的天然配体,同时还可将其他病原的特异性抗原等呈递... 病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)是一种模拟病毒的颗粒形态特点,将外源基因片断产物呈递到病毒颗粒表面而形成的嵌合颗粒。它有与病毒颗粒相同的外部形态,甚至还有某些病毒受体的天然配体,同时还可将其他病原的特异性抗原等呈递在自己的表面,因而在病原体的疫苗研究和基因治疗研究中发挥着重要的作用。目前研究得较多的病毒样颗粒有HIV gag颗粒、HBc颗粒、HBs颗粒、酵母Ty颗粒等等,其中HBc VLP较受人注目。 HBc有自动组装的特性,其形成的核心颗粒有显著刺激B细胞、T辅助细胞及细胞毒T细胞产生免疫反应的能力,而且HBc颗粒在人体内没有细胞毒性作用,再加上HBc容许插入外源片段并可保持或增强外源蛋白的免疫活性,基因表达的杂合蛋白在多种表达体系中都具备颗粒形成能力,且形成的颗粒易于纯化制备。以HBc为载体的疫苗生产研究、基因治疗方法研究在国外日益受到重视。现将有关这方面的研究进展简述如下。 展开更多
关键词 VLPS 乙型肝炎病毒 外源片段 HBV 病毒样核心颗粒
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乙型肝炎病毒核心颗粒的结构和包装
4
作者 胡虎 《微生物学免疫学进展》 1992年第4期7-9,共3页
本文从结构和功能的关系出发阐述乙型肝炎病毒核心颗粒的结构组成及其在装配中的作用
关键词 乙型肝炎病毒 核心颗粒 结构 包装
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以串联式乙肝病毒核心颗粒呈递的基于多重保守抗原的甲型流感病毒病毒样粒子候选疫苗
5
作者 龚洋(摘) 陈锦荣(校) 《微生物学免疫学进展》 2019年第1期66-66,共1页
现有的甲型流感病毒(IAV)疫苗是靶向病毒的不同部分,不同季节可能是不一样的。疫苗的设计依赖于预测的优势流感毒株,而当疫苗和流行毒株之间不匹配时功效欠佳。此外,目前方法制得的疫苗对有可能引起大流行病的新兴流感毒株只提供有限的... 现有的甲型流感病毒(IAV)疫苗是靶向病毒的不同部分,不同季节可能是不一样的。疫苗的设计依赖于预测的优势流感毒株,而当疫苗和流行毒株之间不匹配时功效欠佳。此外,目前方法制得的疫苗对有可能引起大流行病的新兴流感毒株只提供有限的保护。有一种解决方案是设计靶向流感病毒保守的蛋白结构区域的疫苗,这些结构域随着时间的推移基本保持不变,并可能存于在新兴变体中。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 候选疫苗 核心颗粒 乙肝病毒 保守 粒子 抗原 多重
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HBV核心颗粒作为B细胞/T细胞表位的载体
6
作者 杨陵江 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 2002年第5期201-206,共6页
重组乙型肝炎病毒 (HBV)核心 (HBc)这个 2 0面体病毒样颗粒 (VLP)可被视为外来免疫表位的非感染性载体的基本类型。重组 HBc颗粒用于展示多种病毒、细菌和原虫蛋白的免疫显性表位。 HBc颗粒作为载体的实际运用性是由其在异源性表达系统... 重组乙型肝炎病毒 (HBV)核心 (HBc)这个 2 0面体病毒样颗粒 (VLP)可被视为外来免疫表位的非感染性载体的基本类型。重组 HBc颗粒用于展示多种病毒、细菌和原虫蛋白的免疫显性表位。 HBc颗粒作为载体的实际运用性是由其在异源性表达系统中高水平的合成和正确的自身装配能力来实现的。HBc壳膜二聚体单位不寻常的 α螺旋结构 ,选择包装成为 T=3和 T=4对称的二十面体 ,并存在长而突出的刺突。这些发现增强了人们对 HBc VLP的兴趣。特别是刺突的顶端似乎是展示长达 2 36个氨基酸残基的外来序列的最佳靶位。大量关于表位展示的实验室数据与精确的结构信息相结合 ,有可能设计出以 HBc颗粒为基础的诊断、疫苗和基因治疗工具。 展开更多
关键词 HBV核心颗粒 B细胞/T细胞 表位 载体
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日用免疫电镜和光学旋转技术检测HCV核心颗粒的超微结构
7
《传染病网络动态》 2001年第9期23-23,共1页
关键词 免疫电镜 光学旋转技术 HCV核心颗粒 超微结构 日本 Mie大学医学院
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乙型肝炎病毒核心颗粒重组疟疾表位疫苗的免疫原性研究
8
作者 易绍琼 《国外医学(微生物学分册)》 2003年第5期47-47,共1页
全世界有2~4亿的疟疾感染者,且每年有100万~200万人死于恶性疟疾。既往研制的疟疾疫苗有用放射线照射的疟原虫孢子体、合成肽疫苗和重组乙型肝炎病毒(HBV)颗粒疟疾疫苗。以放射线照射的孢子体免疫可诱导保护性体液和细胞免疫,缺点是... 全世界有2~4亿的疟疾感染者,且每年有100万~200万人死于恶性疟疾。既往研制的疟疾疫苗有用放射线照射的疟原虫孢子体、合成肽疫苗和重组乙型肝炎病毒(HBV)颗粒疟疾疫苗。以放射线照射的孢子体免疫可诱导保护性体液和细胞免疫,缺点是孢子体不能在体外进行培养。合成肽疫苗包含环孢蛋白(CS) 展开更多
关键词 重组乙型肝炎病毒核心颗粒疟疾疫苗 免疫原性 免疫应答 B细胞表位肽疫苗 抗体
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在昆虫细胞中同时表达蓝舌病毒VP3与VP7蛋白可装配成核心样颗粒 被引量:2
9
作者 王健伟 姜慧英 +2 位作者 屈建国 赵同兴 洪涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期131-135,共5页
将蓝舌病毒 (BTV) 13型 S7与L3基因同时插入杆状病毒双表达载体 pFastBacDual,获得重组杆状病毒rvBacBTVP37。该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达BTV13VP3与VP7蛋白 ,可以高效自动装配出 2 0面体的 6 0~ 70nm空心颗粒。分析表明 ,所获... 将蓝舌病毒 (BTV) 13型 S7与L3基因同时插入杆状病毒双表达载体 pFastBacDual,获得重组杆状病毒rvBacBTVP37。该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达BTV13VP3与VP7蛋白 ,可以高效自动装配出 2 0面体的 6 0~ 70nm空心颗粒。分析表明 ,所获颗粒为空心的BTV核心样颗粒 (CLP) ,其成分为VP3与VP7,不含BTV其它任何蛋白与核酸。这种装配需要VP3与VP7的共同参与 ,二者缺一不可 ,它们均含有相互作用与装配的信息。本研究为BTV病毒样颗粒的装配打下了基础 ,并为BTV结构与功能研究提供了良好模型。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 核心颗粒 装配 杆状病毒表达系统
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蓝舌病16型病毒核心样颗粒的获取与鉴定 被引量:2
10
作者 王潇 黄超华 +3 位作者 曹琛福 史卫军 花群义 陈金顶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期7-10,I0001,共5页
为了制备一种新型基因工程疫苗BTV-16 VLP疫苗,将蓝舌病病毒16型VP3与VP7基因片段插入杆状病毒双表达载体pFastBac Dual质粒中,通过转染Sf9细胞,同时表达VP3与VP7蛋白。经负染后电镜观察到有与蓝舌病病毒形态相似的核心样颗粒,表明蓝舌... 为了制备一种新型基因工程疫苗BTV-16 VLP疫苗,将蓝舌病病毒16型VP3与VP7基因片段插入杆状病毒双表达载体pFastBac Dual质粒中,通过转染Sf9细胞,同时表达VP3与VP7蛋白。经负染后电镜观察到有与蓝舌病病毒形态相似的核心样颗粒,表明蓝舌病VP3与VP7蛋白能自主组装形成核心样颗粒,并通过Western Blot试验验证该核心样颗粒与蓝舌病病毒具有相同的抗原性。因此本研究成功构建出16型蓝舌病病毒核心样颗粒,为病毒样颗粒装配打下了基础,为制备16血清型BTV VLP疫苗做好前期准备。 展开更多
关键词 蓝舌病 核心颗粒 重组杆状病毒
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重组病毒蛋白纳米颗粒治疗肺腺癌作用
11
作者 周文亭 邹烨宁 +1 位作者 沈立萍 毕胜利 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2024年第4期402-408,共7页
目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙... 目的研究基于乙型肝炎病毒核心蛋白的嵌合病毒蛋白纳米颗粒对肺腺癌动物模型的免疫治疗作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供依据。方法将人上皮细胞生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)B细胞抗原决定簇插入乙肝核心蛋白(hepatitis B core protein,HBc)的主要免疫显性区域(Major Immunodominant region,MIR),利用大肠杆菌进行表达纯化后,得到重组蛋白纳米颗粒HBc-HER2。将此重组蛋白纳米颗粒免疫小鼠肺腺癌皮下瘤模型,通过检测其血清中HER-2抗体水平及抗体型别,评价此纳米颗粒免疫原性。通过小鼠皮下瘤大小变化评价肿瘤治疗效果。结果得到了纯度较高的HBc-HER2重组蛋白,且电镜观察显示其形成了HBc-HER2纳米颗粒,动物实验表明免疫原性强,能够诱导机体产生高滴度的针对HER-2的抗体,并有良好的肿瘤治疗作用。结论基因重组的HBc-HER2在小鼠肺腺癌皮下瘤模型中有明显的抑制肿瘤作用,为肺腺癌的纳米治疗技术提供了依据。 展开更多
关键词 人类上皮细胞生长因子受体-2 乙肝核心蛋白病毒样颗粒 肿瘤免疫治疗
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泛素-蛋白酶体通路:从理论到临床 被引量:1
12
作者 赵初娴 王椿 《世界临床药物》 CAS 2006年第5期278-281,285,共5页
关键词 泛素-蛋白酶体通路 26S蛋白酶体 临床 蛋白酶复合体 核心颗粒 降解过程 催化活性 蛋白质 泛素化 20S
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HBcAg基因在甲醇型酵母中的表达、产物纯化及其性质的初步研究
13
作者 陈恒 黄亚红 +1 位作者 梁婉琪 张惟杰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第9期85-90,共6页
为研究乙肝核心抗原蛋白 (HBcAg)在甲醇型酵母 (PichiaPastoris)中的表达和性质 ,用PCR方法将HBcAg基因 (L)克隆到P .Pastoris胞内表达载体pPIC3k中 ,并利用电击和同源重组法 ,将重组质粒pPIC3k L转化感受态的甲醇型GS1 1 5酵母菌株。... 为研究乙肝核心抗原蛋白 (HBcAg)在甲醇型酵母 (PichiaPastoris)中的表达和性质 ,用PCR方法将HBcAg基因 (L)克隆到P .Pastoris胞内表达载体pPIC3k中 ,并利用电击和同源重组法 ,将重组质粒pPIC3k L转化感受态的甲醇型GS1 1 5酵母菌株。经过筛选得到阳性P .Pastoris重组子。重组菌株经甲醇诱导培养 ,表达产物的Western印迹结果表明 ,HBcAg蛋白能在甲醇型酵母(PichiaPastoris)中诱导表达 ,产物为一 2 1 5kDa的蛋白。经蔗糖密度梯度超离心和CsCl密度梯度超离心纯化后 ,ELISA和密度测定结果表明重组HBcAg蛋白主要分布在密度为 1 2 5 76g ml和1 30 1 3g ml的 2个峰值处。电镜观察表明 ,该重组HBcAg蛋白能自主装配成大小不同的 2种颗粒 (即核心颗粒 ) ,大颗粒直径约 34nm左右 ,小颗粒直径约 30nm左右。同时 ,我们还观察到 ,该核心蛋白颗粒在体外可发生集聚现象。 展开更多
关键词 乙肝病毒 HBcAg基因 甲醇型酵母 表达 产物纯化 核心颗粒 抗原性
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蛋白酶体亚基对肝细胞癌发生发展的调控作用研究进展 被引量:1
14
作者 胡靖依 王青青 刘杨 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期396-402,共7页
蛋白酶体是真核细胞中负责降解细胞内短寿命蛋白、参与维持细胞内蛋白质稳态的重要细胞器。研究表明,在肝细胞癌(HCC)的发生发展进程中,蛋白酶体调节颗粒亚基可通过调节PTEN基因、P53、Bcl-2、Bcl-2相互作用的细胞死亡介体蛋白、周期蛋... 蛋白酶体是真核细胞中负责降解细胞内短寿命蛋白、参与维持细胞内蛋白质稳态的重要细胞器。研究表明,在肝细胞癌(HCC)的发生发展进程中,蛋白酶体调节颗粒亚基可通过调节PTEN基因、P53、Bcl-2、Bcl-2相互作用的细胞死亡介体蛋白、周期蛋白依赖性激酶4、β型转化生长因子受体、E2F1、生长因子受体结合蛋白2等多种肿瘤相关蛋白以及相关的通路分子,例如信号转导及转录激活蛋白3、蛋白激酶B,诱使这些蛋白质功能失调,进而促进HCC的发生,癌细胞增殖、侵袭与转移。蛋白酶体核心颗粒亚基则更多参与HCC相关蛋白的降解,因此核心颗粒的抑制剂表现出良好的抗肿瘤效应。本文就当前蛋白酶体调节颗粒亚基和核心颗粒亚基在HCC发生发展过程中的调控作用及其机制进行综述。 展开更多
关键词 蛋白酶体 蛋白酶体调节颗粒 蛋白酶体核心颗粒 肝细胞癌 机制 综述
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GST pull-down结合质谱技术鉴定Muted蛋白相互作用蛋白
15
作者 郝振华 李巍 《医学分子生物学杂志》 CAS 2021年第6期409-414,共6页
目的鉴定Muted蛋白相互作用蛋白。方法表达并纯化GST-Muted蛋白融合蛋白,与小鼠脑组织蛋白共孵育,银染获得与Muted互作的蛋白条带,利用质谱技术获得这些条带的氨基酸序列,鉴定Muted的相互作用蛋白。结果初步鉴定出31个与Muted特异结合... 目的鉴定Muted蛋白相互作用蛋白。方法表达并纯化GST-Muted蛋白融合蛋白,与小鼠脑组织蛋白共孵育,银染获得与Muted互作的蛋白条带,利用质谱技术获得这些条带的氨基酸序列,鉴定Muted的相互作用蛋白。结果初步鉴定出31个与Muted特异结合的互作蛋白,包括外泌体蛋白、细胞骨架蛋白及马达蛋白等,进一步应用免疫共沉淀技术验证了Muted与Stxbp1的相互作用。结论从小鼠脑组织初步鉴定了Muted蛋白的结合蛋白,为进一步研究Muted蛋白在LDCVs形成和分泌过程中的功能及机制提供了新的线索。 展开更多
关键词 大致密核心颗粒 GST pull-down 质谱 Muted蛋白
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促吞噬肽功能化的HBc VLPs纳米载体的制备 被引量:2
16
作者 李春华 杨静 +6 位作者 任晋 李蕾 曹艺明 王鑫 李卫国 毕胜利 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期804-810,共7页
促吞噬肽(Tuftsin)是机体脾组织产生的生理活性肽,具有强大的免疫调节和免疫治疗潜力。乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒(hepatitis B virus core protein virus-like particles, HBc VLPs)是由HBc自组装形成的空心纳米颗粒,其不仅能应... 促吞噬肽(Tuftsin)是机体脾组织产生的生理活性肽,具有强大的免疫调节和免疫治疗潜力。乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒(hepatitis B virus core protein virus-like particles, HBc VLPs)是由HBc自组装形成的空心纳米颗粒,其不仅能应用于药物的递送,还能应用于外源蛋白质的显示。因此,Tuftsin功能化HBc VLPs载体的研究在免疫治疗、分子递送等方面具有重要意义。本研究选用PET43.1-a质粒作为Tuftsin-HBc VLP的表达载体,以大肠杆菌BL21 (DE3)为工程菌进行诱导表达,通过盐析、分子筛层析和离子交换层析技术纯化生产Tuftsin-HBc VLP。利用Western印迹和ELISA分别对Tuftsin-HBc VLP上HBc和Tuftsin进行定性分析。结果显示,Tuftsin-HBc VLP可与抗HBc抗体和抗Tuftsin抗体发生特异性结合。透射电镜观察结果显示,Tuftsin-HBc VLP呈大小均一的球形结构,粒度分析仪测得Tuftsin-HBc VLP的直径约为30 nm。CCK8法显示,Tuftsin-HBc VLP在0~480μg/mL范围内,细胞增殖未见显著变化。上述结果表明,本研究成功制备了可以在原核系统中高效表达且安全有效的Tuftsin-HBc VLP生物纳米递送载体。 展开更多
关键词 促吞噬肽 乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒 纳米载体
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The structure of the nucleosome core particle of chromatin in chicken erythrocytes visualized by using atomicforce microscopy 被引量:2
17
作者 ZHAO HUI YI ZHANG +4 位作者 SHU BING ZHANG CHUJIANG QI YE HE MIN QIAN LI RUO LANQIAN( Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academyof Sciences, Shanghai 200031, China)( Shanghai Institute of Nuclear Research, ChineseAcademy of Sciences, Shanghai 201800, 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1999年第4期255-260,共6页
The structure of the nuclosome core particle of chromatin in chicken erythrocytes has been examined by usingAFM. The 146 hp of DNA wrapped twice around the corehistone octamer are clearly visualized. Both the ends ofe... The structure of the nuclosome core particle of chromatin in chicken erythrocytes has been examined by usingAFM. The 146 hp of DNA wrapped twice around the corehistone octamer are clearly visualized. Both the ends ofentry/exit of linker DNA are also demonstrated. The dimension of the nucleosome core particles is- 1-4 um inheight and ~13-22 um in width. In addition, superbeads(width of - 48-57 urn, beight of-2-3 nm) are occasionallyrevealed, two turns of DNA around the core particles arealso detected. 展开更多
关键词 Nucleosome core particle chicken erythrocytes atomic force microscopy.
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基于16型蓝舌病病毒重组核心样颗粒的阻断ELISA方法的建立 被引量:4
18
作者 史卫军 林彦星 +10 位作者 黄超华 曹琛福 曾少灵 陈兵 兰文升 贾鹏 刘建利 吴江 赵现锋 阮周曦 花群义 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2021年第8期955-961,共7页
为建立基于蓝舌病病毒(BTV)重组核心样颗粒的阻断ELISA检测方法,采用16型BTV VP3和VP7装配的核心样颗粒作为包被抗原,利用制备的1株抗BTV VP7群特异性HRP标记的单克隆抗体,建立了检测BTV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,经优化反应条件,... 为建立基于蓝舌病病毒(BTV)重组核心样颗粒的阻断ELISA检测方法,采用16型BTV VP3和VP7装配的核心样颗粒作为包被抗原,利用制备的1株抗BTV VP7群特异性HRP标记的单克隆抗体,建立了检测BTV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,经优化反应条件,确定的抗原最佳包被浓度为16 g/m L,抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1∶10,酶标单抗稀释度为1∶4000,封闭液为1%BSA,封闭液作用时间为90 min,被检血清作用时间为45 min,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为5 min。经阴阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率(PI)≥30.11%时判定为阳性,PI≤24.21%时判定为阴性,24.21%<PI<30.11%时判定为可疑。该方法与非洲马瘟病毒(AHSV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡性口炎病毒(VSV)阳性血清不发生交叉反应,敏感性较高。批内和批间精密性试验的变异系数(CV)均<10%。与商品化ELISA试剂盒的对比检测表明,两者的符合率为97.8%。上述结果表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于BTV临床样品的抗体检测。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒 核心颗粒 阻断ELISA
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鹿流行性出血热病毒核心样颗粒的制备与鉴定 被引量:1
19
作者 黄超华 花群俊 +7 位作者 吴江 曹琛福 林彦星 史卫军 林永涛 曾少灵 杨俊兴 花群义 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2021年第8期1023-1028,共6页
为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dualvp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,... 为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dualvp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,随后转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-vp3-vp7。通过重组杆状病毒感染Sf9细胞共表达VP3和VP7蛋白,并利用蔗糖梯度离心进行纯化,两者组装形成CLPs。负染后通过透射电镜观察纯化产物的形态,Western-blotting验证其反应原性,免疫小鼠检验其免疫原性。结果显示,透射电镜下可以观察到纯化产物中含有大量的与EHDV形态相似的直径为60~70 nm的中空颗粒;以绵羊EHDV阳性血清为一抗的Western-blotting可以检测到大小分别为100 ku和38 ku的2条蛋白条带,分别与EHDV VP3和VP7蛋白大小一致;间接ELISA结果显示,3次免疫后可刺激产生的EHDV特异性抗体效价可达1∶12 800。上述结果表明,本研究获得了具有典型形态、良好反应原性和免疫原性的EHDV核心样颗粒(CLPs)。 展开更多
关键词 鹿流行性出血热病毒 VP3蛋白 VP7蛋白 核心颗粒
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26S蛋白酶体抑制剂研究进展 被引量:5
20
作者 李媛 梁俊玉 +2 位作者 刘鑫龙 武国凡 杨宁 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期524-530,共7页
26S蛋白酶体是真核细胞蛋白酶家族中一个2.5MDa的复杂成员,在许多重要细胞活动如细胞周期进程和抗原提呈中起关键调节作用,已成为某些癌症和自身免疫性疾病治疗的有效药物靶标。目前,大部分26S蛋白酶体抑制剂为20S核心颗粒靶向分子,19S... 26S蛋白酶体是真核细胞蛋白酶家族中一个2.5MDa的复杂成员,在许多重要细胞活动如细胞周期进程和抗原提呈中起关键调节作用,已成为某些癌症和自身免疫性疾病治疗的有效药物靶标。目前,大部分26S蛋白酶体抑制剂为20S核心颗粒靶向分子,19S调节颗粒靶向分子的研发还未取得明显成效,这与19S高分率结构和作用机制仍待进一步明确有关。本文综合论述了26S蛋白酶体20S核心颗粒和19S调节颗粒的靶向抑制剂,重点从结构角度阐述近年来取得的进展和研发前景。 展开更多
关键词 26S蛋白酶体 20S核心颗粒 19S调节颗粒 蛋白酶体抑制剂
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