靶向EBV潜伏期基因EBNA2小干涉RNA系统的构建

[目的]构建携带靶向EBV核抗原EBNA2(EBV nuclear antigen,EBNA)的pSUPER.retroRNAi逆转录病毒载体,进而筛选出稳定产毒的细胞克隆。[方法]用DNA重组技术将60nt能转录产生靶向EBNA2小发夹RNA(smallhairpin RNA,shRNA)的寡核苷酸序列定向插入逆转录病毒载体pSUPER.retro,并用限制性内切酶酶切和测序鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒载体转染包装细胞系PheonixA,G418筛选稳定产生逆转录病毒的细胞克隆。[结果]重组逆转病毒载体经限制性内切酶酶切,电泳后可观察到7167bp和281bp两条DNA条带;测序鉴定结果表明序列正确;重组载体转染的包装细胞经G418筛选获得能产生逆转录病毒的抗性细胞克隆,病毒滴度为2.5×104CFU/ml。[结论]成功构建和筛选出靶向EBV潜伏期基因EBNA2的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体以及稳定产毒的细胞系,为深入探讨EBNA2基因的细胞转化和抗凋亡作用提供了实验基础。

EBNA2在恶性淋巴瘤中的表达及意义

目的检测EB病毒核抗原-2(EBNA2)在恶性淋巴瘤标本中的表达,分析EBNA2在EB病毒(EBV)相关淋巴瘤发生中的意义。方法收集淋巴瘤组织蜡块50例和癌旁正常组织蜡块20例,采用免疫组织化学法检测组织中EBNA2的表达情况。结果 EBNA2在50例恶性淋巴瘤标本中的表达率为40. 0%(20/50),EBNA2在20例癌旁正常组织蜡块的表达率为0(0/50)。EBNA2在恶性淋巴瘤标本和癌旁正常组织中的阳性表达率的差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 EBNA2在恶性淋巴瘤标本中的表达上调,EBNA2的阳性表达率与肿瘤的组织类型及临床分期密切相关,而与淋巴瘤患者的性别和年龄无明显关系。