长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(NEAT1)在免疫相关性疾病中的研究进展

严格调控免疫反应是有效清除病原体和防止过度炎症的基础。核旁斑组装转录本1(NEAT1)是近年来被广泛关注的参与调控免疫反应的长链非编码RNA。已证实,NEAT1在免疫相关性疾病中异常表达(多数是上调),如脓毒症、炎症性肠病、自身免疫性疾病及病毒感染。然而,其在疾病发病进程的作用却错综复杂。在机制上,主要作为微小RNA(miRNA)海绵来抑制miRNA与目标mRNA之间的相互作用,也可以影响核旁斑介导的基因表达调控。我们总结了NEAT1在免疫相关性疾病中的表达变化及作用,重点分析其调控免疫细胞分化和功能的机制,为人们理解NEAT1在免疫相关性疾病中的作用提供理论依据。

lncRNA NEAT1调节miR-424-5p/ELK4轴对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤、Lp-PLA2和CRP水平的影响

目的:探讨长链非编码RNA核旁斑组装转录本1(lncRNA NEAT1)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的分子机制和功能。方法:收集健康人和动脉粥样硬化(AS)病人血液标本并通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清中lncRNA NEAT1、微小RNA-424-5p(miR-424-5p)和ETS域蛋白4(ELK4)mRNA表达水平。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4表达情况;细胞计数试剂盒(CCK-8)法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)法检测HUVEC细胞增殖活力和凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β含量、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)和C反应蛋白(CRP)水平;采用双荧光素酶报告基因测定lncRNA NEAT1、miR-424-5p和ELK4之间的靶向相互作用。进行动物实验以评估lncRNA NEAT1在体内AS进展中的作用。结果:lncRNA NEAT1在AS病人血清和ox-LDL诱导的HUVEC中显著上调(P<0.05)。lncRNA NEAT1的沉默可削弱ox-LDL引发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平,并减少ApoE^(-/-)小鼠的脂质异常分泌(P<0.05)。miR-424-5p是lncRNA NEAT1在调节ox-LDL诱导的HUVEC损伤中的功能介质,ELK4是miR-424-5p的直接靶标(P<0.05)。miR-424-5p的抑制或ELK4的过表达逆转了lncRNA NEAT1沉默对ox-LDL诱导的HUVEC细胞损伤的影响(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1可通过调控miR-424-5p/ELK4轴保护HUVEC免受ox-LDL触发的细胞毒性,降低Lp-PLA2和CRP水平。

NEAT1在小鼠早期妊娠子宫组织中的表达和调节

探讨核旁斑组装转录本1(NEAT1)在小鼠早期妊娠子宫组织中的表达和调节,为揭示NEAT1在小鼠胚胎着床过程中的作用机制提供科学依据。分别构建小鼠早期妊娠、假孕、人工诱导蜕膜化和类固醇激素处理模型,采用RNA原位杂交以及实时荧光定量PCR技术检测NEAT1在上述模型子宫组织的定位与表达。结果显示,NEAT1在小鼠早期妊娠子宫组织中呈现动态变化规律,在妊娠1~5 d的子宫内膜组织和肌层组织中均有表达,且主要表达于子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞;在妊娠6~8 d的子宫组织中NEAT1主要表达于蜕膜化细胞,而在孕体组织中未见阳性表达。在小鼠假孕子宫组织中,NEAT1的定位表达与早期妊娠基本一致,在子宫内膜组织和肌层组织中均有表达。在人工诱导蜕膜化模型中,NEAT1主要定位于蜕膜区,且其表达水平与对照组相比极显著上升(P<0.01)。在类固醇激素处理模型中,孕酮(P_(4))和雌二醇(E_(2))均可显著上调NEAT1的表达水平(P<0.05),且对子宫内膜基质细胞中NEAT1表达上调的作用更加显著。本研究结果表明,NEAT1参与调节小鼠早期妊娠和蜕膜化进程,其表达水平受到类固醇激素的显著上调。

长链非编码核旁斑装配转录物1对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的探讨长链非编码核旁斑装配转录物1(Lnc NEAT1)靶向微小RNA(miR)-506-3p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法收集河南省人民医院手术切除的结肠癌组织标本和癌旁正常组织标本各82例,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中Lnc NEAT1的mRNA表达水平;构建miRNA-Control、miR-506-3p和短发卡RNA(shRNA)-Control、shRNA-Lnc NEAT1慢病毒结肠癌细胞株,采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1和miR-506-3p的靶向关系;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell分别检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞的增殖、迁移能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平。两组均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果Lnc NEAT1在结肠癌组织(1.93±0.18)中的mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(0.52±0.06,t=33.337,P<0.05)。过表达Lnc NEAT1-WT后,miR-506-3p细胞的相对荧光素酶活性(0.39±0.04)较miRNA-Control组显著下降(1.50±0.12,t=26.405,P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞48 h(0.69±0.03比1.15±0.03,t=20.129,P<0.05)和72 h(0.82±0.07比1.48±0.06,t=12.651,P<0.05)的增殖活力明显低于shRNA-Control。shRNA-Lnc NEAT1细胞的迁移细胞数明显低于shRNA-Control(47.67±5.81比155.33±12.51,t=13.649,P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平较shRNA-Control显著下降(0.48±0.04比1.39±0.11,t=30.883,P<0.05)。结论Lnc NEAT1可能通过负向抑制miR-506-3p的表达,增强LAMC1的表达,从而促进结肠癌细胞的增殖和迁移。

长链非编码RNA NEAT1通过调节miR-221-3p对哮喘炎症和细胞屏障损伤的影响

目的研究长链非编码RNA NEAT1在哮喘中的作用及其相关机制。方法将人气道平滑肌细胞(ASMCs)分为对照组(常规培养,不做处理),模型组[用血小板活化因子(PAF)处理ASMCs 12 h],转染组1(转染空载质粒24 h后,给予PAF处理12 h),转染组2(转染NEAT1过表达质粒24 h后,给予PAF处理12 h)。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测NEAT1和微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达。用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;比较各组ASMCs之间的单层通透性;用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验验证NEAT1和miR-221-3p之间的相关性。结果对照组、模型组、转染组1和转染组2的ASMCs中NEAT1 mRNA的表达水平分别为1.00±0.00,1.54±0.07,1.50±0.13和2.12±0.13;miR-221-3p的表达水平分别为1.00±0.00,0.55±0.02,0.62±0.04和0.34±0.03;IL-1β分别为(1.57±0.09),(6.48±0.37),(6.16±0.55)和(15.21±0.98)pg·mL^(-1);IL-6分别为(153.51±8.37),(753.41±49.86),(712.79±83.83)和(1179.52±85.86)pg·mL^(-1);TNF-α分别为(9.94±0.56),(28.33±1.13),(26.52±0.90)和(54.86±3.74)pg·mL^(-1);ASMCs的单层通过率分别为(4.44±0.21)%,(8.43±0.39)%,(8.27±0.47)%和(16.54±0.78)%。对照组与模型组,转染组1和转染组2相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因检测实验结果表明NEAT1可以靶向调控miR-221-3p(P<0.05)。结论NEAT1通过靶向miR-221-3p加重了哮喘气道炎症和细胞屏障损伤。

肾综合征出血热患者血浆外泌体固有免疫相关长链非编码RNA含量测定及临床意义

目的观察肾综合征出血热(HFRS)患者血浆外泌体(exosome)固有免疫相关长链非编码RNA(lncRNA)的含量变化情况及其与疾病发生发展的关系。方法提取并鉴定HFRS患者及健康对照者血浆外泌体,对其中的lncRNA进行高通量测序,找出具有足够丰度的固有免疫相关lncRNA,进行实时定量PCR鉴定,分析其与HFRS发生发展的关系。结果提取血浆外泌体;发现固有免疫相关lncRNA抗病毒应答负性调节因子(NRAV)、干扰素应答负性调节因子(NRIR)及核旁斑装配转录物1(NEAT1)在HFRS患者血浆外泌体中有一定丰度,其中NEAT1含量显著低于健康对照,但与疾病的进展无明显关系。结论HFRS患者血浆外泌体中含有多种固有免疫相关lncRNA,其中NEAT1含量降低与HFRS的发生显著相关。