产油核桃内生细菌乙酰辅酶A羧化酶acb基因克隆及优化表达

为了探究细菌异质性乙酰辅酶A羧化酶β亚基生物活性及其对乙酰辅酶A羧化酶酶活影响,以高产油核桃内生细菌B.subtilis HB1310基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(β-CT)基因(acb基因),构建pET-28a-acb载体并在E.coli BL21中表达,进一步对乙酰辅酶A羧化酶acb基因的诱导表达条件进行了优化。结果表明:乙酰辅酶A羧化酶acb基因在E.coli BL21中实现了表达,分子质量在25~35 kDa之间;重组蛋白最佳诱导表达条件为诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时间6 h、诱导初始pH 8.0,在此条件下工程菌的乙酰辅酶A羧化酶活性可达(4.11±0.03) U/mL,较野生菌提高39.7%。综上,乙酰辅酶A羧化酶β-CT为具有较好生物活性的乙酰辅酶A羧化酶亚基。

核桃内生细菌Bacillus subtilis HB1310发酵棉秆水解糖液产油工艺优化

为实现核桃内生产油细菌Bacillus subtilis HB1310发酵棉秆水解糖液高效生产微生物油脂,检测了糖液浓度、氮源浓度、发酵起始p H值以及发酵时间4个主要因素对该菌株发酵棉秆水解糖液产油率的影响。通过单因素试验确定了响应面试验中各因素的水平中心点。通过响应面试验确定了菌株发酵棉秆水解糖液产油的优化工艺参数为糖液浓度7%(w/v)、氮源浓度5 g/L、发酵起始p H值6.0、发酵时间2 d,在此优化工艺条件下进行验证试验,获得的产油率可达30.26%±1.05%(w/w),与模型的理论预测值较接近,说明建立的模型是切实可行的。

核桃内生细菌XHE8对病原真菌的拮抗及种子萌发的影响

为了明确前期分离得到的一株核桃内生细菌XHE8（Bacillus sp.）的生物防治潜力及对作物种子萌发的影响,通过平板对峙法测定了该菌株对12株植物病原真菌的拮抗作用,并室内测定了该菌株对11种作物种子的萌发以及芽和根长的影响。结果表明,XHE8对所有测试的12个菌株都表现出一定的拮抗作用,其中对花椰菜黑斑病菌Alternaria brassicicola的抑制率最高,达到73.55%,而对小麦赤霉病禾谷镰刀菌Fusarium graminearum的拮抗作用相对较弱,其抑制率为31.45%。在该菌株处理下,红苋菜种子发芽率、芽长和根长分别增加了2%、59.42%和78.18%。研究结果为进一步开发该核桃内生细菌的生防和促生应用潜力奠定了一定的基础。

核桃内生细菌HT-6对致病疫霉的持续抑制作用及其抑菌特性研究

为进一步了解核桃内生细菌HT-6菌株在防治马铃薯晚疫病中的利用潜力,采取延长对峙培养时间以及致病疫霉预先培养后再接种HT-6的方法,对其抑菌特性及持续抑菌能力进行了评价。结果显示,延长对峙培养时间到第15天时,致病疫霉菌落半径为11.0 mm,与对照(40.0 mm)仍有极显著差异;以可溶性淀粉和葡萄糖代替黑麦培养基中的蔗糖,对于抑菌作用无明显影响;HT-6菌液浓度与抑菌效果关系密切,最适浓度分别为OD值1.088和1.928的菌液,其抑菌率分别为95.33%和91.78%,且随OD值升高其抑菌率降低;预先培养致病疫霉10 d后再接种HT-6菌液继续对峙培养21 d,仍可强效抑制致病疫霉生长;镜检发现受抑制的致病疫霉孢子囊数量显著低于对照,菌丝体和孢子囊的畸形率显著高于对照。