北京地区核桃黑斑病病原菌的分离、致病性测定和16S rDNA序列分析

核桃黑斑病是危害核桃生产的重要细菌病害,造成树势衰弱,减产严重,甚至树体死亡。2008年在北京郊区栽植的幼树上发现疑似病害,且呈爆发之势。为确定其病原菌分类地位,用组织分离法分离核桃黑斑病菌,纯化培养后用针刺接种法回接到健康核桃树枝条和叶片上,14 d后叶片和枝条分别出现典型病斑,接种发病组织再分离所得病菌性状、16S rDNA与初分离的一致,完成柯赫氏法则验证;以分离的核桃黑斑病菌总DNA为模板,采用细菌16SrDNA的通用引物,通过PCR扩增到约1.5 kb的片段,克隆到pMD-18T载体。测序结果表明克隆的16S rDNA片段长为1 453个核苷酸,通过GenBank上BLAST分析,表明该病原细菌为Xanthomonas campestris。