核激素受体转录共激活因子AIB1的研究进展

AIBl（amplified in breast cancer1）是核激素受体转录共激活因子家族中的一员，又称作SRC-3、ACTR、TRAM-1、RAC3、NCOA3、P／CIP等。作为新定义的一个原癌基因，它是由anzickSL等在寻找乳腺癌中频繁扩增的基因时最早发现的。大量研究表明，AIB1基因的扩增和过表达与多种肿瘤的发生发展有密切的联系，以在乳腺癌中的研究最多最深入。本文就AIB1的研究进展作一综述。

核受体共激活因子及其转录调节

共激活因子是包括核受体在内的转录因子调节基因转录过程中所需要的。它们通常以复合物的形式存在,能介导核受体和基础转录机器成分之间的相互作用,并能修饰组蛋白,导致染色质重构,从而促进基因表达。共激活因子本身的特异性和活性也受到各种共价修饰的调节。

核转录因子κB和糖皮质激素受体在慢性阻塞性肺疾病患者稳定期的相互作用

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期外周血和气道黏膜核转录因子κB(NF-κB)和糖皮质激素受体(GCR)的表达。方法应用Werstern blot方法检测COPD稳定期患者和相匹配的肺功能正常对照组各8例外周血淋巴细胞和支气管黏膜核蛋白核转录因子NF-κB和GCR的表达。结果 COPD患者稳定期外周血淋巴细胞和支气管黏膜核蛋白GCR表达均显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),两组支气管黏膜表达显著高于外周血淋巴细胞(P<0.05,P<0.01);COPD患者稳定期外周血淋巴细胞和支气管黏膜核蛋白NF-κB表达均显著高于对照组(P<0.05),两组支气管黏膜表达高于外周血淋巴细胞(P<0.05,P<0.01)。结论 COPD患者稳定期与对照组NF-κB和GCR表达差异性提示COPD患者即使在稳定期仍存在慢性炎症,尤其是气道局部炎症更为明显。

核受体共激活因子AIB1在子宫内膜癌组织中的表达及其意义

目的研究子宫内膜癌组织中核受体共激活因子(AIB1)mRNA和蛋白质的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测51例子宫内膜癌、13例不典型增生子宫内膜、15例复合型增生子宫内膜、19例单纯型增生子宫内膜和18例正常子宫内膜组织中AIB1 mRNA表达;同时采用免疫组化技术检测AIB1蛋白的表达。结果子宫内膜癌组织中AIB1呈过表达状态。内膜癌组织中AIB1 mRNA阳性表达率和相对表达水平明显高于增生子宫内膜组织及正常子宫内膜组织(2χ=11.025,F=6.930,P<0.01)。不典型增生子宫内膜组织中AIB1 mRNA阳性表达和相对表达水平高于复合性增生内膜组织和单纯性增生内膜组织(2χ=6.133,F=4.213,P<0.05)。内膜癌组织中AIB1蛋白阳性表达率明显高于增生内膜组织和正常子宫内膜组织(χ2=13.546,P<0.01)。子宫内膜癌组织、异常增生内膜组织及正常子宫内膜组织间AIB1蛋白表达强度不同,三者间比较差异有显著性(H=6.023,P<0.01)。AIB1蛋白表达强度在子宫内膜癌组织中呈现过表达,在不典型增生内膜组织中为高表达,在正常组织中为阴性表达或弱表达;AIB1 mRNA和蛋白的过表达与肿瘤的病理类型、组织学分级、淋巴结转移和病人的年龄无关(P>0.05),但与肿瘤组织的肌层浸润深度及ERα蛋白表达有关(χ2=4.832、4.674,t′=2.201、2.362,P<0.05)。结论AIB1过表达发生在子宫内膜癌的早期和癌前病变阶段,过表达的AIB1可能在子宫内膜癌癌变发展过程中发挥作用。

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节及肾损伤的保护

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节以及肾损伤的保护作用。方法选择72只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、模型组(SAP组)和罗格列酮组(ROSI组),各组再随机分为术后6 h、12 h、24 h组,每组8只。SAP组采用两次腹腔注射L-精氨酸制备SAP模型,ROSI组30 min后股静脉注射10%罗格列酮溶液6 mg/kg,SO组腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠肾脏病理改变,测定肾脏TLR4、NF-κB蛋白表达水平,检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Cr含量。结果 ROSI组大鼠肾小管细胞病理损害较SAP组减轻;与SAP组比较,肾组织内NF-κB、TLR4蛋白明显下降(P<0.05);ROSI组外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和BUN、Cr含量与SAP组比较明显下降(P<0.05)。结论 PPAR-γ激动剂罗格列酮能减轻急性胰腺炎大鼠肾小管上皮细胞的损伤,同时抑制NF-κB、TLR4蛋白表达,降低促炎细胞因子水平,推测PPAR-γ激动剂对NF-κB/TLR4通路的调节可能是胰腺炎的保护机制之一。

氢化可的松对脓毒症大鼠肺组织糖皮质激素受体-a及核转录因子-κB表达的影响

目的研究氢化可的松对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体-a及核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将大鼠随机分为生理盐水组(对照组)、脓毒症组(CLP组)、治疗组(HC组),每组各15只;CLP组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)法制备大鼠脓毒症模型;治疗组(HC组)从舌下静脉注射氢化可的松5mg/kg,对照组则注射等渗生理盐水。测定肺组织湿/干比重(W/D),同时用免疫组织化学法分析肺组织糖皮质激素受体-a、NF-κB表达情况及检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果氧合指数水平:脓毒症组和治疗组均较对照组大鼠显著降低(P<0.01),治疗组(HC组)大鼠的氧合指数则较脓毒症组(CLP组)大鼠显著升高(P<0.05)。脓毒症组和治疗组大鼠肺组织湿/干比重(W/D)、TNF-α、IL-1β、NF-κB的表达水平均较对照组大鼠显著升高(P<0.01);与脓毒症组对比,治疗组肺组织糖皮质激素受体-a的表达明显增多(P<0.05),TNF-α、IL-1β水平和肺组织NF-κB的表达均明显降低(P<0.05)。结论氢化可的松对脓毒症急性肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB表达有关。

B细胞转录激活因子、维甲酸相关孤儿核受体γt对急性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨B细胞转录激活因子(BATF)、白细胞介素-17及维甲酸孤儿核受体γt(RORγt)对急性哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 (1)将24只健康雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、哮喘模型组(AS组)、地塞米松治疗组(DEX组),每组8只。第0、7、14天,AS组、DEX组小鼠用卵清蛋白(OVA)抗原液腹腔内注射致敏,NS组用等体积生理盐水腹腔内注射。第21天起,NS组超声雾化吸入生理盐水,AS组、DEX组超声雾化吸入2%的OVA液,均为每天1次,每次40 min,连续5 d。每次雾化前30 min,DEX组以地塞米松1.0 mg/kg腹腔注射,NS组、AS组则以等体积的生理盐水腹腔注射。末次雾化结束24 h后,各组小鼠留取肺组织标本进行检测。结果 (1)肺组织切片显示:NS组肺组织无明显炎症反应,AS组及DEX组均存在炎症反应,且AS组炎症反应明显高于DEX组。(2)免疫组化结果显示:AS组肺组织BATF、IL-17、RORγt的表达明显高于NS组、DEX组(P<0.05);DEX组肺组织IL-17、BATF、RORγt的表达较AS组明显降低(P<0.05)。(3)肺组织BATF的表达与BALF中白细胞(WBC)总数及中性粒细胞(NEU)计数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数呈正相关(r=0.487、0.531、0.515,P<0.05);肺组织BATF的表达与IL-17、RORγt的表达呈正相关(r=0.502、0.493,P<0.05);肺组织IL-17的表达与RORγt的表达呈正相关(r=0.536,P<0.05)。结论 (1)急性哮喘小鼠肺组织中BATF、IL-17、RORγt表达上调。(2)地塞米松可能是通过下调BATF、IL-17、RORγt的表达而减轻气道炎症性损害。

绝经后妇女血清激素受体共激活因子3与骨密度、骨转换水平的相关性（英文）

背景:激素受体共激活因子3属于类固醇激素核受体超家族成员,可通过调节雌激素受体活性促进人成骨细胞增殖和分化。研究发现高加索男性激素受体共激活因子3等位基因突变与腰椎骨密度的变化密切相关。而在绝经后妇女中激素受体共激活因子3是否与骨密度相关尚不清楚。目的:检测绝经后妇女血清激素受体共激活因子3水平及其与骨密度和骨转换水平的关系。方法:检测55名绝经后妇女和35例健康体检者的血清中激素受体共激活因子3、25羟维生素D、骨钙素和骨转换标志物Ⅰ型原胶原N-端前肽、β-胶原特殊序列水平,同时以双能X射线骨密度仪测量L_(1-4)及股骨颈骨密度。结果与结论:绝经后骨质疏松组血清激素受体共激活因子3水平明显低于健康对照组,血清激素受体共激活因子3水平与腰椎骨密度呈正相关,与Ⅰ型原胶原N-端前肽和骨钙素水平呈负相关。说明低血清激素受体共激活因子3水平可能参与绝经型骨质疏松症的病理过程,且可能调控骨转换水平。

淫羊藿苷通过激活转录共激活因子预防大鼠激素性股骨头坏死进展的实验研究

目的研究淫羊藿苷对激素性股骨头坏死的保护作用及机制。方法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)并按以下方式干预:对照组、地塞米松组(1×10^(-6) mol/L),联合干预组[地塞米松(1×10^(-6) mol/L)+不同浓度淫羊藿苷(1×10^(-8) mol/L,1×10^(-7) mol/L,1×10^(-6) mol/L,1×10^(-5) mol/L)];检测各组细胞增殖、凋亡、成骨/成脂分化情况,以及转录共激活因子(transcriptional co⁃activator with PDZ⁃binding mo⁃tif,TAZ)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、Runt相关转录因子2(Runt⁃related transcriptional factor 2,Runx2)蛋白表达变化;siRNA沉默TAZ后,观察各组下游CTGF、Runx2表达变化。体内实验使用52只SD大鼠,随机分为对照组、甲强龙组(甲基强的松龙40 mg·kg^(-1)·d^(-1))和联合干预组(甲基强的松龙40 mg·kg^(-1)·d^(-1)+淫羊藿苷100 mg·kg^(-1)·d^(-1))。HE染色评估股骨头骨小梁结构;免疫组化染色评估抗骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、TAZ、血小板-内皮细胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesion molecule⁃1,PECAM⁃1/CD31)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达;TUNEL染色评估细胞凋亡情况;Micro⁃CT评估股骨头骨密度、骨体积/总体积、骨小梁数、骨小梁间距和骨小梁厚度;血管造影评估股骨头血供情况。结果体外实验表明地塞米松能促进rBMSCs凋亡和成脂分化,抑制其增殖和成骨分化;而淫羊藿苷能显著削弱这些效应。此外,淫羊藿苷能显著逆转地塞米松对rBM⁃SCs中TAZ、CTGF蛋白表达的影响。抑制TAZ表达后,联合干预组rBMSCs中Runx2的表达也受到抑制。体内实验结果证实淫羊藿苷可保护大鼠股骨头软骨下骨质和股骨头内血液供应免受激素的破坏。激素能显著抑制大鼠股骨头TAZ表达,而淫羊藿苷能促进TAZ表达。结论淫羊藿苷可通过激活TAZ表达来预防大鼠激素性股骨头坏死的发生发展。

甲状旁腺激素对人牙囊前体细胞核因子κB受体激活因子配体和骨保护素mRNA表达的影响

目的:研究不同浓度、不同作用时间的甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone,PTH)对体外培养的人牙囊前体细胞表达核因子κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA的影响。方法:原代培养和纯化人牙囊前体细胞,取生长状况良好的第3～5代人牙囊前体细胞,与不同浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)重组人PTH共孵育,分别用RT-PCR检测不同浓度PTH作用2 h和100 ng/mL PTH作用不同时间点人牙囊前体细胞RANKL、OPG的mRNA表达,以GAPDH作为内参,进行灰度值比较。结果:随着PTH浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)和PTH作用时间(2、4、8 h)的增加,人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达逐渐增高,OPG mRNA的表达逐渐降低。不同浓度组间和不同时间之间相比,RANKL和OPG mRNA表达量均有显著性差异(P<0.05)。结论:PTH可增强体外培养的人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达,降低OPG mRNA的表达。

酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺模型大鼠核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响

目的研究酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺模型大鼠核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响。方法将50只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(0.18mg·kg^(-1)·d^(-1))、酸枣仁汤低、高剂量组(6.48 g·kg^(-1)·d^(-1)、12.96 g·kg^(-1)·d^(-1)),除空白组外,其余各组均皮下注射D-半乳糖,于末次给药后进行多平台水环境睡眠剥夺,造模结束后各组开始灌胃给药,连续给药7天。采用自主活动仪检测大鼠光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间,采用比色法检测大鼠下丘脑ATP含量的变化,采用RealTime-PCR、Western-blot和免疫组化分别检测大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间均显著增加(P <0.01);与模型组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间均显著减少(P <0.05,P <0.01);与空白组比较,模型组下丘脑ATP含量显著降低(P <0.01);与模型组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组下丘脑ATP含量显著升高(P <0.05);与空白组比较,模型组核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA和蛋白表达水平显著降低(P <0.05,P <0.01);与模型组比较,阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1αm RNA和蛋白表达水平显著升高(P <0.05,P <0.01)。结论酸枣仁汤有可能基于PPARγ及其共激活因子PGC-1α同时调控昼夜节律与能量代谢。

组蛋白脱乙酰酶2-核转录因子-κB/激活蛋白-1介导的重度哮喘对糖皮质激素不敏感的分子机制

目的探讨重度哮喘患者对糖皮质激素不敏感的分子机制,尤其从糖皮质激素/糖皮质激素受体(glucocorticoid/glucocorticoid receptor,GC/GR)及组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)及其下游的炎性转录因子途径进行研究。方法临床招募健康对照者12例,轻中度哮喘患者12例,重度哮喘患者10例,收集其外周血,进行地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制IL-8释放试验,检测重度哮喘患者外周血单个核细胞(peripheral blood molecule cells,PBMCs)是否存在激素敏感性下降。通过Western blot和细胞免疫荧光染色法检测PBMCs的GRα蛋白质水平及跨膜转运情况。HDAC2活性试剂盒检测PBMCs核蛋白的HDAC2活性,Western blot检测磷酸化NF-κB、激活蛋白1(activating protein-1,AP-1)的亚基磷酸化c-Jun及磷酸化c-Fos的水平。结果重度哮喘患者PBMCs在TNFα诱导IL-8释放实验中表现出对Dex敏感性下降;GR总蛋白质水平虽然代偿性升高,但GRα水平下降且向核内转移减弱;HDAC2活性降低,炎性转录因子NF-κB、AP-1亚基被激活。结论重度哮喘患者的PBMCs中存在激素不敏感,可能是通过HDAC2-NF-κB/Ap-1介导的炎症通路引起了GRα表达量下降和转运能力降低。

补骨脂素干预大鼠成骨细胞骨保护素/核因子κB受体激活因子配体mRNA的表达

背景:补骨脂素有促进大鼠成骨细胞增殖与分化的作用,但其作用机制尚不明确。目的:探讨补骨脂素对大鼠成骨细胞中骨保护素(osteoporogeterin,OPG)和核因子κB受体激活因子配体(receptor activ atornuclear factor kappa b ligand,RANKL)mRNA表达的影响。方法:取第3代生长状况良好的出生24h内的SD大鼠成骨细胞,补骨脂素组加入1×10-7mol/L的补骨脂素,雌二醇组加入1×10-7mol/L的雌二醇,对照组正常培养。给药72h后提取细胞总RNA,RT-PCR方法分析细胞OPG/RANKLmRNA的表达。结果与结论:与对照组比较,补骨脂素组和雌二醇组OPGmRNA的表达均明显增加(P<0.05),而RANKL mRNA的表达明显下降(P<0.05),但补骨脂素组成骨细胞OPG mRNA的表达较雌二醇组弱(P<0.05),VOPG/VRANKL比值也较雌二醇组小(P<0.05)。说明补骨脂素可能通过增加成骨细胞OPG的表达,抑制RANKL的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到防治骨质疏松症的目的,但作用不如雌二醇明显。

核转录因子激活蛋白-1对PPARδ表达的调控作用

目的研究在过氧化物酶体增长因子活化受体δ(PPARδ)表达中的相关调控因子.方法用RT-PCR扩增人类PPARδ启动子序列,通过Deletion及重组将不同长短的PPARδ启动子序列转化到PGL3-basic载体中,转染LOVO细胞,通过观测各重组体转染活性,确定PPARδ启动子活性区域.再通过电泳迁移率变更分析(EMSA)、突变等方法确定核转录因子激活蛋白-1(AP1)对PPARδ表达的作用.结果 Deletion及重组转染后发现PPARδ启动子活性区域在序列3361～3464之间,EMSA、突变发现AP1因子结合位点突变后转染活性明显降低.结论 AP1因子结合位点突变后转染活性明显降低,提示AP1是PPARδ的一个增强子.

川芎嗪对溃疡性结肠炎肠粘膜过氧化物酶体增殖物激活受体γ及核因子κB的影响

目的:通过观测经川芎嗪治疗前后过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、核因子κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子(TNF)-α的变化,探讨川芎嗪治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:以噁唑酮诱导小鼠UC模型,并随机分为实验对照组(CN)、模型组(OXZ)、川芎嗪治疗组(TMP)和0.9%氯化钠治疗对照组(NS)。观察UC炎症评价指标(DAI,大体、组织学损伤评分,MPO值);采用荧光定量PCR法检测各组肠粘膜PPARγ、NF-κBp65、TNF-αmRNA的表达量;免疫组化法检测PPARγ、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与CN组比较,OXZ组的炎症评价指标均明显增高(P<0.01),PPARγ表达量明显下降(P<0.01)、NF-κBp65及TNF-α表达量均显著升高(P<0.01)。应用川芎嗪后,UC的炎症评价指标均较NS组明显降低(P<0.01),PPARγ表达量明显升高(P<0.01)、NF-κBp6及TNF-α表达量均下降(P<0.01)。结论:川芎嗪对UC的结肠粘膜有保护作用,其机制可能与PPARγ的激活,NF-κB的抑制,TNF-α等炎症因子表达的减低有关。

冠心病患者血清成纤维细胞生长因子21和核转录过氧化物酶增殖体激活受体γ水平变化及临床意义

目的探讨冠心病(CHD)患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)、核转录过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)水平变化及临床意义。方法选择2018年3月~2019年3月广州中医药大学祈福医院(以下简称"我院")住院接受治疗的由冠脉造影确诊为CHD患者129例作为观察组,选取同期来我院健康体检的体检者80名作为对照组。根据冠脉病变程度将观察组分为轻度组(n=45)、中度组(n=55)和重度组(n=29);根据冠脉病变分支数量将观察组分为单支病变组(n=48)、双支病变组(n=44)和多支病变组(n=37)。采用酶联免疫吸附试验法检测各组血清FGF21和PPARγ水平,并分析FGF21和PPARγ水平与Gensini评分及病变支数的关系。结果观察组血清FGF21和PPARγ水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。CHD不同程度冠脉病变患者中,中度组的FGF21和PPARγ水平均高于轻度组,而重度组高于中度组和轻度组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。CHD不同程度冠脉病变支数患者中,双支病变组的FGF21和PPARγ水平均高于单只病变组,而多支病变组均高于双支病变组和单只病变组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。Spearman相关性分析发现,CHD患者中FGF21和PPARγ水平与病变支数和Gensini评分呈正相关(r> 0,P <0.05),FGF21水平与PPARγ水平呈正相关(r> 0,P <0.05)。结论 CHD患者血清FGF21和PPARγ水平上升,且FGF21和PPARγ水平与冠脉病变狭窄程度及病变累积密切相关。

核激素受体等对乙型肝炎病毒转录与复制的影响

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)在非肝源细胞复制体系,观察核激素受体等对HBV基因转录和复制的调控作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4.1与核激素受体HNF4、和RXRa/PPARa以及HNF3的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3;用Northern吸印杂交检测HBV 3.5 kb、2.4/2.1 kb、0.7 kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果复制型HBV重组质粒pHBV4.1在肝癌细胞中,能检测到3.5 kb HBV RNA转录产物和HBV DNA复制中间体;用pHBV4.1转染NIH3T3细胞后,在没有核激素受体表达质粒共转染时未能检出3.5 kb HBV RNA等转录产物,也无HBV DNA复制中间体;当用核激素受体HNF4和RXRa/PPARa共转染时,能够激活3.5 kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF3未能激活HBV复制,但在核激素受体HNF4或RXRα/PPARα介导的病毒复制体系中,同时共转染HNF3时,均可见3.5 kb HBV mRNA的转录和HBV DNA复制水平下降。结论利用核激素受体等成功地建立HBV在非肝源细胞中的转录与复制,且显示HNF4和RXRa/PPARa可支持HBV在非肝源细胞中转录与复制;HNF3抑制HBV肝特异性基因转录与复制。

补肾中药对核受体共调节因子表达的影响

目的通过检测含药血清培养的人乳腺癌细胞中核受体共激活因子(steroid receptor coactivator-1,SRC-1)和核受体共抑制因子(nuclear receptor corepressor,NCOR)的mRNA表达,从分子水平上探讨补肾中药对核受体共调节因子表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为3个大组,每大组再分雌雄2组,每大组分别用淫羊藿、女贞子、蒸馏水灌胃14d,制备含药血清,并用含药血清培养雌激素受体缺失的乳腺癌细胞MDA-MB-231,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测SRC-1和NCOR的mRNA表达。结果补肾阳中药淫羊藿雄性大鼠含药血清上调了SRC-1的表达,对NCOR没有显著影响;而补肾阴中药女贞子下调了SRC-1共激活因子的表达,上调了NCOR的表达。结论补肾中药淫羊藿、女贞子对核受体共调节因子的表达有调节作用。

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的:研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1(steroid receptorcoactivator-1,SRC-1)和核受体辅抑制因子(nuclear receptor corepressor,NcoR)表达的调节作用及其机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞于含2%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的α最低必须培养基(α-minimal essential medium,α-MEM)中,给予不同浓度大豆苷原或10^(-8)mol/L的雌二醇作用3 d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex,ICI,10^(-7) mol/L)和雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)特异性拮抗剂(methyl-piperidino-pyrazole,MPP,10^(-6) mol/L)干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果:大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^(-7)mol/L和10^(-5)mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2.5倍(P<0.05)和2倍(P<0.05)。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35%(P<0.05)。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^(-7)mol/L和10^(-5) mol/L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1.8倍(P<0.05)和2.4倍(P<0.05)。结论:大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1/NcoR比值。ERβ参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1/NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。

mTEL-cFms激酶结构域融合蛋白真核表达载体的构建及其对信号转导和转录激活因子核转位的影响

目的构建激酶盘真核表达载体,观察豆蔻酰化的TEL转录调节因子HLH结构域与c-Fms激酶结构域融合蛋白(mTEL-cFmskd)的表达对信号转导和转录激活因子1(STAT1)和STAT3核转位的影响。方法利用DNA重组技术,将人的c-Src豆蔻酰化多肽、TEL转录调节因子HLH结构域、c-Fms激酶结构域以及c-Myc标签的DNA序列克隆在pCORON/neo载体上,构建pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体。将载体转染至稳定表达GFP-STAT1的人骨肉瘤细胞(U2OS)和稳定表达EGFP-STAT3的幼仓鼠肾细胞24 h后,采用IN Cell Analyzer1000获取细胞图像,分析细胞内GFP-STAT1或EGFP-STAT3融合蛋白的核转位程度。结果质粒酶切和测序鉴定表明,构建的pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc真核表达载体序列正确。载体转染细胞24 h后,绿色荧光蛋白标记的STAT1和STAT3均进入细胞核,发生核转位现象。c-Fms激酶抑制剂GW2580和Sutent能抑制mTEL-cFmskd诱导EGFP-STAT3核转位的发生。结论成功构建激酶盘真核表达载体pCORON/neo-HcSrc-Tel-cfmskd-Myc。载体在细胞中表达的mTEL-cFmskd豆蔻酰化融合蛋白具有M-CSF/c-Fms配体受体复合物激活下游信号分子的生物学功能。