活性氧在油菜与核盘菌Sclerotinia sclerotiorum互作中的作用

为比较S.sclerotiorum侵染后,油菜不同抗性品种组织内活性氧产生情况,通过DAB和伊文思兰染色,分别检测接种病菌后不同抗感品种的氧迸发(Reactive Oxygen Intermediates,ROIs)的产生及其诱导的细胞死亡情况。结果表明,抗性品种中双9号、皖油14产生ROIs及细胞死亡的程度均轻于感病品种沪油15、史力丰。使用抗氧化剂如抗坏血酸、H2O2酶预处理叶片后,病斑比对照减小。H2O2预处理则能显著增大病斑,忍受ROIs可能是油菜抗S.sclerotiorum的机理之一。通过甲苯胺蓝染色检测细胞壁修复情况的结果表明,抗性品种叶片在菌丝定殖早期的细胞壁中多酚化合物过氧化结合物的产生量大于感病品种。

核盘菌致病机制研究进展

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)是世界性的死体营养型植物病原真菌,寄主范围极广,所引起的大豆和油菜等菌核病会导致农业生产的巨大经济损失.核盘菌致病机制复杂,不仅具有直接杀死细胞的典型死体营养阶段,也包含需抑制植物免疫的短暂活体营养期.核盘菌具有种类繁多的致病因子,包括介导侵染结构形成或抗逆能力的关键调控因子、降解植物细胞组分的水解酶、草酸、诱导植物细胞死亡或抑制植物免疫的效应蛋白等.综述核盘菌侵染模型,总结各种致病因子,尤其是效应蛋白在核盘菌致病中的作用,并结合最新研究结果对核盘菌致病新机制进行展望,为作物菌核病的防控提供理论依据.

油菜核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)对戊唑醇的抗药性风险评估

为明确油菜核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)对杀菌剂戊唑醇的抗药性风险,通过生长速率法测定了119株核盘菌对戊唑醇的敏感性基线,通过紫外诱导结合药剂筛选获得2株抗药性菌株,开展了抗药性遗传稳定性、菌丝生长速率、产菌核能力、致病力、靶基因序列分析及表达量测定等研究。结果显示:119株油菜核盘菌对戊唑醇的EC50值范围为0.0121~0.8907μg/mL,平均值为0.2403±0.1365μg/mL,呈单峰曲线分布,未发现田间抗药性菌株;经室内诱导获得2株抗药性菌株19AH-5A、19AH-5C,对戊唑醇的EC50值分别是野生型敏感菌株的5.857和12.903倍;此外,抗药性菌株19AH-5C的生物学特性与敏感菌株无显著差异,而19AH-5A的致病力下降严重;2株抗药性菌株中戊唑醇靶标蛋白的编码基因CYP51的碱基序列与敏感菌株完全一致,未发现可引起氨基酸改变的碱基突变,但在戊唑醇培养条件下,抗药性菌株19AH-5C中靶基因CYP51的表达量显著上调3.72倍。油菜核盘菌在戊唑醇选择压力下可产生抗药性菌株,根据119株核盘菌的敏感性基线以及抗性菌株的环境适合度研究结果判断,油菜核盘菌对戊唑醇存在中等抗药性风险,因此使用戊唑醇防治油菜菌核病时应持续开展病原菌抗药性水平监测,同时可将不同作用类型杀菌剂交替使用以延缓田间抗药性的发生。

一种基于菌丝悬浮液的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种方法的建立

通过分析核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌丝培养时间、菌丝体浓度以及接种后的保湿时间等因子对接种后油菜植株发病的影响,建立了一套有效的基于菌丝悬浮液的核盘菌喷雾接种方法体系.主要步骤包括:从在平板活化3 d后核盘菌菌落边缘打取菌碟(Φ6 mm),按10块?100 mL-1加入液体培养基中,25℃、200 r?min-1下振荡培养4 d,用匀浆机匀浆30 s制成菌丝悬浮液,终浓度调至600 nm波长下吸光度值为1.0～2.0,用空压机喷雾接种油菜植株,保湿48 h.该方法适用于油菜苗期对菌核病的抗病性评价,还可用于立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的接种研究.

麝香草酚控制核盘菌侵染不结球白菜效应研究

核盘菌可侵染多种蔬菜,造成蔬菜采后品质下降,筛选高效安全的天然保鲜剂是控制核盘菌侵染的有效手段。通过离体和活体接种试验,研究了植物源天然化合物麝香草酚对核盘菌侵染青菜的控制效应。结果表明:20、40、60μg/mL麝香草酚处理后的菌丝鲜重分别比对照组显著下降了33.8%、53.7%、88.1%;菌丝干重分别比对照组下降了24.5%、53.7%、82.9%;麝香草酚处理导致核盘菌菌丝畸形、皱缩、细胞死亡,可能与菌丝细胞膜损伤有关,表现为相对电导率和丙二醛含量上升;麝香草酚还可诱导菌丝细胞甘油含量显著上升,发生渗透胁迫;50μg/mL麝香草酚处理青菜可显著抑制核盘菌在叶片上的侵染;在接种核盘菌的青菜叶片中,麝香草酚诱导特异型抗性基因BrMPK3和BrMPK4的表达量上调,并显著提升青菜品质(包括叶绿素、蛋白质、可溶性糖、维生素C含量提升)。麝香草酚可有效控制核盘菌对青菜的侵染,表现为抑菌效应和诱导寄主抗性效应。

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)致病分子机理研究进展

核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]可以侵染包括油菜、大豆、向日葵等多种重要农作物在内的400多种植物,引致严重病害,对植物生产危害极大,越来越引起人们的重视。随着分子生物学技术在核盘菌研究中的应用,人们对其致病机理的研究也越来越深入。作者从细胞壁降解酶类、草酸毒素、侵染垫的形成和菌核形成的影响因素以及其与寄主的互作等方面,对核盘菌的分子致病机理研究进行了综述。

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)诱导的桑树差异表达基因及功能分析

桑椹菌核病是影响桑椹产量和品质的主要病害,核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种新发现的疑似桑椹菌核病的病原真菌。以果桑品种大10为供试材料,利用数字基因表达谱技术,筛选核盘菌侵染相关的差异表达基因(DEGs)并分析其功能与代谢途径。在感染和未感染核盘菌的桑树幼果样品之间检测到了显著差异表达基因1 226个(上调表达基因1 088个,下调表达基因138个),其中包含33类172个抗性相关基因,35类112个转录因子基因。生物信息学分析发现,显著差异表达基因显著富集于4个细胞组分(胞外区、细胞壁、外部封装结构、质外体)、6种分子功能(抗氧化活性、酶催化活性、酶调节活性、核酸结合转录因子活性、营养物质代谢、翻译调控活性等)和6个代谢通路(亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、植物-病原互作、苯丙氨酸代谢、芳香族氨基酸生物合成、糖类次生代谢产物生物合成)。选取可能与桑树对核盘菌感染应答相关的Fbox等5个基因作为目的基因,进行实时荧光定量PCR检测验证,检测数据与RNA-seq表达谱的分析结果基本一致。研究结果为阐释桑树应答核盘菌侵染的分子机制积累了基础数据。

向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的种内多态性RAPD分析

利用RAPD技术对向日葵核盘菌12个菌株进行了基因组DNA多态性分析.通过聚类分析发现在类间距15以下12个菌株可以分为5群,来自长春、内蒙、云南和来自吉林的5号菌株类间距离较小,其亲缘关系较近;而另一个来自吉林的4号菌株与来自黑龙江的2号菌株属第二类群;来自新疆的12号、来自陕西的7号菌株表现出与其它菌株较远的遗传背景.

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)arom基因3′-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段。结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3′-末端4104bp的序列。序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255—273)、莽草酸激酶模式(426—453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687)。

印度梨形孢(Piriformospora indica)对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)生长的抑制作用

探讨印度梨形孢对核盘菌的抑制作用及其机理,为利用印度梨形孢进行核盘菌生物防治奠定基础.通过PEG介导的原生质体转化法将绿色荧光蛋白编码基因GFP导入核盘菌“1980”基因组,获得了菌丝形态正常的绿色荧光蛋白转基因菌株“1980-GFP”.通过固体、液体对峙培养,明确印度梨形孢对核盘菌生长的影响;利用实时荧光定量PCR检测对峙培养过程中核盘菌防御与生长发育相关基因Sssod1,Sssmk1,Ssshk1及SsITL的表达水平.平板对峙培养结果表明:印度梨形孢可抑制核盘菌“1980-GFP”的生长,致使其菌落延伸半径降低了36.43%~53.56%,生长速度降低了84.76%,菌核数量降低了73.38%,干质量降低了64.16%.对峙培养后,核盘菌菌丝尖端生长异常,形成短而多的分叉,GFP荧光信号弱化.印度梨形孢发酵培养液致使核盘菌菌丝体干质量相较于PDB和1/2PDB培养液中分别降低了52.01%和25.52%.实时荧光定量PCR分析结果表明:对峙培养过程中,Sssmk1在48 h上调了3.89倍;Sssod1在72 h上调了2.78倍;SsITL在24~72 h内上调了2.94~4.71倍;96 h时,Sssod1,SsITL表达下调;Ssshk1在中后期表达下调.以上结果表明:对峙培养时,印度梨形孢能影响核盘菌的防御响应及生长发育相关基因的表达,并能显著抑制核盘菌的生长发育.

油菜BnJAZ7通过调控抗氧化途径促进核盘菌侵染

【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是危害油菜生产的第一大病害。通过分子克隆获得甘蓝型油菜BnJAZ7,利用生物信息学、细胞生物学以及分子生物学手段,明确甘蓝型油菜BnJAZ7的表达特征及其在核盘菌侵染过程中的作用,为油菜抗菌核病分子育种打下理论基础。【方法】利用分子克隆技术扩增BnJAZ7全长,并分析其生物信息学特征,利用MEGA X构建BnJAZ7的亲缘关系树。利用实时荧光定量PCR技术测定BnJAZ7在油菜中的组织表达以及核盘菌侵染过程中的表达特征;构建BnJAZ7与GFP的融合表达载体,在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的亚细胞定位。在本氏烟叶片中瞬时表达融合蛋白,并接种核盘菌,分析BnJAZ7的表达对核盘菌侵染的影响。构建BnJAZ7-OE过表达转基因油菜,在其T2代叶片上接种核盘菌,观察其对核盘菌侵染的影响。利用生化技术检测核盘菌侵染BnJAZ7-OE后抗氧化酶SOD、POD、CAT以及PAL活性;通过实时荧光定量PCR技术分析核盘菌侵染BnJAZ7-OE油菜后相关基因BnSOD、BnPOD、BnPAL和BnCAT的转录水平。【结果】BnJAZ7全长801 bp,编码266个氨基酸,由TIFY和CCT_2两个结构域组成,分子式为C_(1244)H_(2000)N_(358)O_(384)S_(13),等电点为9.57,理论分子量为28.53 kDa,不具跨膜结构域。BnJAZ7与油菜TIFY 7的亲缘关系最近,在油菜茎中表达量最高,并且核盘菌侵染后6、12、24、48 h其表达量持续上升。亚细胞定位显示eGFP:BnJAZ7定位于细胞膜和细胞核。在本氏烟叶片中异源瞬时表达eGFP:BnJAZ7促进核盘菌侵染;BnJAZ7过表达的BnJAZ7-OE转基因油菜也促进核盘菌侵染。核盘菌在BnJAZ7-OE植株中侵染后显著降低了BnPOD、BnSOD和BnPAL的转录水平,显著增加了BnCAT的转录水平,从而降低POD、SOD和PAL活性,增加CAT活性。【结论】甘蓝型油菜BnJAZ7的表达受到核盘菌侵染诱导,且BnJAZ7过表达显著加快了核盘菌的侵染速度。核盘菌通过诱导BnJAZ7上升后降低抗氧化酶编码基因BnPOD、BnSOD和BnPAL转录水平、增加BnCAT转录水平,从而调控抗氧化酶活性来进一步加快侵染。

cAMP抑制核盘菌菌核形成的差异基因表达分析

【目的】探究核盘菌响应环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)处理的转录组学特征,挖掘调控核盘菌菌核形成的关键基因,为靶向杀菌剂的研发提供参考。【方法】以接种在PDA培养基上生长至菌核原基形成时期的核盘菌作为CK1,开始形成黑色素时期的核盘菌作为CK2,以接种在PDA+5 mmol/L cAMP培养基上生长相同时间(5,7 d)的核盘菌作为试验组,依次命名为M1和M2,对这4组样品进行转录组测序(RNA-seq)比较,阐释cAMP影响菌核形成的调控途径,挖掘菌核原基及菌核黑色素形成中的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。【结果】外源添加的cAMP主要在M1前期影响胞内的cAMP含量。差异表达基因分析结果显示,M1和CK1之间共有681个差异表达基因;KEGG富集分析显示,这些基因主要参与各类氨基酸代谢、脂肪酸代谢、MAPK信号通路等,且通路中的大部分基因都呈上调表达模式,而MAPK及其下游作用因子钙调磷酸酶B亚基(calcineurin B subunit,CnB)和热休克蛋白70(heat shock 70 ku protein,HSP70)则明显下调。M2和CK2之间共筛选到4490个差异表达基因,主要参与各类氨基酸代谢、抗原加工提呈以及cAMP、MAPK等信号通路和自噬途径,通路中的大部分基因呈上调表达模式,且自噬相关因子ATG2、ATG20、ATG22、ATG23、ATG27和ATG29也大量上调表达,而与蛋白质和脂类合成相关的磷酸酶B(phosphatase B,PTPB)和酰基辅酶A氧化酶(acyl coenzyme A oxidase,ACO)的表达量则明显下调。在M1和M2时期,相关基因的qRT-PCR与RNA-seq差异表达分析结果趋势相同,说明转录组测序数据准确。【结论】核盘菌可通过吸收胞外高浓度的cAMP抑制菌核形成菌丝,其抑制作用主要通过影响相关蛋白质及脂类物质的合成而对菌丝形态及信号传递造成障碍。

核盘菌属(Sclerotinia)真菌有性世代的研究

本文较系统地报道了核盘菌属(Sclerotinia)5个种16个代表菌株真菌的有性世代形成规律,结果是S.sclerotiorum和S.trifoliorum菌核1年内可在春、秋两次萌发子囊盘。菌核萌发主要受温度和湿度影响。在适合条件下,花盆内埋藏的菌核可在3年内萌发完,子囊盘发育过程分为针状期、膨大期、漏斗期和平盘期。子囊盘历期的长短和子囊盘放射子囊孢子持续期受菌核大小、温度、湿度和埋土深度的影响,其持续时间1～60d。子囊孢子生活力高温和强光照的影响,在室内条件下,子囊孢子生活力可长60d以上。而S.asari和S.schinseng的菌核有性世代则很难形成,在自然条件下,S.minor菌核未发现形成子囊盘。

桃果实采后响应果生链核盘菌侵染的分子机制

褐腐病是采后桃果实最主要的侵染性病害之一,而我国桃褐腐病主要是由链核盘菌属引起,会严重降低果实品质,造成大量损失。为解析桃果实病原菌胁迫响应机制,该文采用分光光度法测定抗病相关酶活性并基于转录组学解析桃果实响应果生链核盘菌的分子机制。结果发现,桃果实的过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶和β-1,3-葡聚糖酶在侵染的不同时期启动了响应反应,参与了桃果实抵御果生链核盘菌侵染过程。基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析表明,桃果实对果生链核盘菌的侵染会产生复杂的防御反应。

向日葵核盘菌环介导等温扩增检测技术

应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色变化、反应灵敏的向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)检测方法。筛选出检测核盘菌的LAMP特异性引物,建立了LAMP反应体系与优化条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明,以F3-1(ATGCCTGTTCGAGCGTCA)、B3-1(AGTTCAGC-GGGTATCCCTA)、FIP-1(GCCGCCACTGATTTTAGAGCCTTTTCAACCCTCAAGCTCAGC)、BIP-1(TCGTTACAG-GTTCTCGGTGTGCCCTGATCCGAGGTCAACCAT)为引物,反应体系中10×Bst Reaction Buffer 2.4μL、dNTP Mixture1.28 mmol·L^(-1)、F3/B3 0.15μmol·L^(-1)、FIP/BIP 0.8μmol·L^(-1)、HNB 150μmol·L^(-1)、MgSO_(4) 1.2 mmol·L^(-1)、Bst DNA聚合酶0.19 U·L^(-1)、ddH_(2)O 13.4μL等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果,且琼脂糖凝胶电泳验证显示清晰的梯形扩增结果。灰葡萄孢、疫霉、腐霉等其他供试菌株中均没有观察到这些现象,对核盘菌的特异性较强;LAMP技术最低检测限为1×10^(-3) ng·μL^(-1)。该方法的建立为向日葵核盘菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。

关于核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)对多菌灵抗药性的研究

本文对核盘菌的四个菌株对多菌灵的抗性水平进行了监测;对该菌的一个菌株在多菌灵反复处理的条件下,抗性变化情况进行了观察。结果表明,所测的四个菌株均属敏感型,尚无抗药性出现。在多菌灵反复处理的条件下,该菌菌株的抗性逐渐增强,本文对上述结果的理论意义进行了讨论。

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)在大豆叶片上致病过程的初步电镜观察

通过电子显微镜观察核盘菌在大豆叶片上的侵染过程,初步发现该病菌首先在大豆叶表面上形成复合附着器。该附着器可能产生某些酶类软化溶解大豆叶表面,以帮助该病菌侵入叶片内。侵入叶片以后,该病菌既能在叶肉细胞间又能在叶肉细胞内生长。在此过程中,该菌仍借助于酶的分解作用破坏寄主组织,直至再突破叶面角质层,出现在叶面上。然后该菌在叶面上形成菌核。在大豆不同生育期,该病原侵染寄主大豆的速度有所不同。苗期最快,花期最慢。

金鱼草WAK/WAKL基因家族鉴定及抗核盘菌候选基因挖掘

【目的】鉴定金鱼草细胞壁相关受体激酶(Wall-associated kinase,WAK)及类WAK蛋白(WAK-like kinases,WAKL)基因家族成员,并挖掘抗核盘菌的候选基因,为深入解析金鱼草抗核盘菌的WAK/WAKL分子调控机制提供理论参考。【方法】以拟南芥WAK/WAKL家族蛋白为参考序列,利用生物信息学方法从金鱼草基因组数据库中鉴定出WAK/WAKL基因家族成员,并对其理化性质、系统发育、基因结构、保守基序、顺式作用元件及共线性关系等进行预测分析,并通过转录组测序和实时荧光定量PCR对该家族基因在金鱼草抗感核盘菌材料中的表达模式进行分析。【结果】从金鱼草基因组中共鉴定出27个WAK/WAKL基因家族成员,其中WAK家族基因16个(AmWAK1~AmWAK16),WAKL家族基因11个(AmWAKL1~AmWAKL11),编码的氨基酸数量为615~1085个;理论等电点(pI)为4.94~8.69,绝大多数蛋白呈酸性;所有蛋白的总平均亲水性指数(GRAVY)值小于0,均为亲水性蛋白;大多数蛋白亚细胞定位于细胞质膜区域,少部分定位于细胞外、液泡、高尔基体和细胞核。27个WAK/WAKL基因家族成员不均匀地分布在金鱼草的8条染色体上,且与拟南芥WAK/WAKL家族基因存在7对共线性同源基因;基因启动子区域含有与防御和胁迫响应、茉莉酸甲酯响应及水杨酸响应等顺式作用元件。通过叶片离体接种核盘菌试验,筛选出抗性差异明显的易感病品种Am1和抗病品种Am6。有12个WAK/WAKL家族基因在金鱼草抗感材料中显著差异表达(P<0.05),有9个基因表达模式与转录组测序结果基本一致。这9个基因中,有5个基因(AmWAK7、AmWAKL2、AmWAKL8、AmWAK6和AmWAK13)在金鱼草的根、茎和叶组织中高表达,而剩余4个基因(AmWAK2、AmWAK8、AmWAK9和AmWAK12)在根、茎和叶中基本不表达。【结论】筛选出的27个金鱼草WAK/WAKL基因家族成员,具有相似的基因结构和蛋白功能结构域,其中AmWAK6、AmWAK7、AmWAK13、AmWAKL2和AmWAKL8为金鱼草抗核盘菌的关键候选基因,具有介导抗病的潜在功能。

向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌核菌丝型萌发特性

为明确向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)菌核的菌丝型萌发特性,采用控制变量法测定不同因素对菌核菌丝型萌发的影响。结果表明,温度为5~30℃时菌核均能进行菌丝型萌发,最适温度为25℃,30℃时菌核菌丝型萌发后无法形成菌核;酸性条件利于菌核进行菌丝型萌发和菌核形成;光照时间越长越利于菌核菌丝型萌发及萌发后形成菌核,而紫外光照射2 h对其萌发和菌核的形成无明显抑制作用;菌核的菌丝型萌发最佳碳源为蔗糖,氮源为蛋白胨,形成菌核最佳碳源为乳糖,氮源为硝酸铵;菌核致死温度为70℃处理10 min。

基于cAMP-PKA途径研究茶碱影响核盘菌菌核形成的相关机制

【目的】菌核在核盘菌生活史中占据核心地位,茶碱可作用于cAMP-PKA途径中的PDEs而影响生物体生长发育,本研究通过外源添加茶碱,研究茶碱对于核盘菌菌核的产生及其通路中相关因子的影响,其结果可为新型杀菌剂的开发提供参考。【方法】首先,通过外源添加不同浓度的茶碱,检测其对核盘菌菌丝生长抑制率及菌核形成情况的影响,其次,通过试剂盒检测茶碱对核盘菌菌丝体内cAMP含量的影响,最后,通过qRT-PCR方法检测外源添加茶碱对于核盘菌cAMP-PKA通路中相关因子的变化。【结果】外源添加终浓度为1~2.5 mmol/L的茶碱,对于核盘菌菌丝生长速率和菌核的形成均有抑制作用,而茶碱终浓度为0.5 mmoI/L对菌丝生长速率几乎没有影响。外源添加的茶碱主要是在菌核原基形成的S4期及菌核成熟的S5阶段提升胞内cAMP含量,而在S1~S3阶段和对照组胞内cAMP含量无差异。茶碱通过抑制PDE2的表达水平使得胞内cAMP含量升高,而下游基因PKA和RAS的表达量也相应减少,外源添加茶碱后ATG8的表达量显著上升。【结论】一定浓度的茶碱对于核盘菌菌丝生长速率和菌核的产生均有抑制作用,外源添加茶碱可通过抑制PDE2的表达而提高胞内cAMP含量,使得下游基因表达量相应减少。