慢病毒介导核受体相关因子1基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗帕金森病模型大鼠

目的探讨慢病毒介导核受体相关因子1(Nurrl)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植至帕金森病(PD)模型大鼠纹状体后对PD大鼠的治疗作用。方法采用神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体注射成功制备PD大鼠模型18只,将携带绿色荧光的慢病毒GV287-Nurr1感染大鼠BMSCs,然后随机移植入6只PD模型大鼠的纹状体内(实验组),设生理盐水组(假移植组)6只及感染空慢病毒GV287的BMSCs组(对照组)6只;术后第1、2、4周观察大鼠的行为改善情况;免疫组织化学染色法检测纹状体及黑质中Nurrl和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的表达变化;RT-PCR法检测黑质Nurrl mRNA和TH mRNA的表达变化。结果慢病毒感染后的BMSCs及上清中均检测到Nurr1蛋白;对照组与实验组大鼠在移植后第1、2、4周的旋转行为较假移植组均有所改善,且实验组比对照组改善更明显;实验组纹状体Nurr1阳性细胞有效存活并沿胼胝体向皮质及对侧脑组织迁移;实验组纹状体及黑质损毁侧Nurrl和TH蛋白及mRNA的表达较假移植组和对照组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导Nurr1基因修饰大鼠BMSCs移植治疗PD大鼠,能有效地改善PD模型大鼠的行为学症状,增加大鼠脑内纹状体和黑质区Nurr1和TH的表达。

核受体相关因子1基因过表达诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元

目的探讨核受体相关因子1(Nurr1)基因对大鼠中脑神经干细胞(NSCs)体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法通过基因重组技术构建pEGFP-N1-Nurr1真核表达载体,用电穿孔法将重组质粒转染第3代NSCs,用荧光显微镜观察转染效率,免疫印迹法检测基因表达效果;并对转染后的NSCs进行体外分化培养3周,用免疫荧光双标技术检测酪氨酸羟化酶(TH)和微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果电穿孔法转染NSCs48h后转染效率达35%,1周后免疫印迹法检测到Nurr1蛋白高表达,约为对照组的5倍;Nurr1基因转染的NSCs分化为TH阳性神经元的比率为15.45%,明显高于对照组,而MAP-2阳性神经元数量与对照组相似。结论 Nurr1基因过表达可以诱导NSCs向TH阳性的多巴胺能神经元分化。

核受体相关因子1基因转染神经干细胞移植治疗帕金森病

目的探讨转染核受体相关因子1(Nurr1)基因的神经干细胞(NSCs)移植至帕金森病(PD)大鼠纹状体后向多巴胺能神经元的分化及对PD大鼠行为的影响。方法应用脑立体定位技术构建单侧PD大鼠模型。将PD大鼠随机分为3组,每组8只。假手术组注射生理盐水,NSCs组移植未转染的NSCs,Nurr1组先将重组质粒载体pEGFP-N1-Nurr1转染NSCs,用RT-PCR方法及免疫荧光染色检测Nurr1基因的表达效果,然后用转染Nurr1基因的NSCs进行移植。细胞用DIL标记后移植至PD大鼠右侧纹状体中,术后2周起用阿朴吗啡诱发旋转试验观测移植后大鼠行为改善情况,12周后用免疫荧光技术检测移植细胞中酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果重组质粒转染后Nurr1基因能在NSCs中过表达。移植后假手术组和NSCs组PD大鼠的旋转圈数均无下降趋势,两者差异无统计学意义(P>0.05);NSCs组移植区可见DIL阳性细胞,但TH免疫阳性细胞较少,平均每视野为(3.21±0.40)个;Nurr1组移植后PD大鼠的旋转圈数从第6周开始下降,移植区DIL/TH双标神经元每视野达(9.28±1.09)个。结论 Nurr1基因过表达能诱导NSCs在PD大鼠纹状体内分化为TH阳性的多巴胺能神经元,并在一定程度上改善大鼠的行为功能。

核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响

将合成的核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurrl)特异性短发夹寡核苷酸(small-hairpin RNA,shRNA)序列插入真核表达载体pSilenCircle(pSC),构建Nurrl基因特异性shRNA真核表达载体,转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其对MN9D细胞内源Nurrl的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的影响,并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况,探讨Nurrl shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物TH和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响。结果表明,脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内Nurrl、TH的表达正常,而转染Nurrl shRNA真核表达载体(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D细胞内Nurrl和TH的mRNA水平明显降低,Nurrl mRNA的下降率分别为62．3%和45．65%,TH mRNA的下降率分别为76．3%和62．6%。同时Nurrl和TH蛋白的表达亦明显下调,Nurrl蛋白的下降率分别为57．4%和72．0%,TH蛋白的下降率分别为79．1%和70．1%。另外,转染Nurrl shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少,但是与正常细胞无明显差异。结果提示：Nurrl shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源Nurrl和TH mRNA和蛋白的表达,同时可能对MN9D细胞的神经突起延长有一定的抑制作用。Nurrl shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。

垂体同源盒家族因子3和孤儿核受体相关因子1基因在帕金森病模型大鼠腹侧中脑表达显著下调

目的:探讨垂体同源盒家族因子3(Pitx3)和孤儿核受体相关因子1(Nurr1)基因在帕金森病(PD)模型大鼠腹侧中脑的表达变化。方法:(1)采用免疫荧光方法检测PD模型组、成年正常组和假手术组大鼠腹侧中脑TH、Pitx3/TH和Nurr1/TH阳性细胞并计数;(2)分别采用半定量RT-PCR和Western Blot方法检测Pitx3和Nurr1基因在PD模型组、成年正常组和假手术组大鼠腹侧中脑转录和翻译水平的变化。结果:(1)免疫荧光检测显示PD大鼠模型组腹侧中脑多巴胺能神经元数目显著减少;(2)半定量RT-PCR和Western Blot检测显示PD大鼠模型组腹侧中脑左侧Pitx3和Nurr1表达显著下调,其中Pitx3表达下调更明显。结论:Pitx3和Nurr1基因的持续表达与腹侧中脑多巴胺能神经元的生存维持密切相关,为探索PD的病因诊断及基因治疗提供可能的新途径。

核受体相关因子1在大鼠脑发育过程中的表达研究

目的观察孤儿核受体相关因子1(Nurr1)在大鼠脑发育过程中蛋白表达的动态变化及其与增殖细胞核抗原(PCNA)的相关关系,探讨Nurr1表达在神经细胞分化迁移中的意义。方法采用石蜡包埋组织切片,免疫组织化学染色及免疫组织化学双重染色。结果 Nurr1从胚胎12d开始在侧脑室周围出现少量表达,随着发育阳性细胞数目明显增多,而且呈现向脑室远侧分化、迁移的趋势;生后侧脑室周围的阳性细胞明显减少,高量表达出现在生后1～5d的大脑皮层,随着细胞的分化成熟阳性表达又明显减少,成熟的大脑皮层仅见少量阳性表达,与PCNA的对比观察表明,两者表达在不同的部位和不同的细胞中,Nurr1主要表达在分化、迁移的幼稚神经细胞中,在增殖细胞中不表达。结论 Nurr1可能在大鼠脑神经细胞从幼稚到成熟的分化、迁移过程中有调控作用。

锰对大鼠大脑核受体相关因子1表达的影响

目的探讨经腹腔注射锰后,大鼠大脑核受体相关因子1(Nurr1)的改变。方法健康雄性2月龄SD大鼠50只,按体重随机分为5组:生理盐水组(A)、Mn2+2.5 mg/kg(B)、Mn2+5 mg/kg(C)、Mn2+10 mg/kg(D)、Mn2+20mg/kg(E),每天腹腔注射0.5 ml锰溶液,连续染毒30 d。实时荧光定量PCR检测大鼠脑组织中Nurr1 mRNA的相对表达水平,Western blot检测Nurr1的蛋白表达水平。结果脑组织Nurr1 mRNA相对表达的结果显示,与A组相比,B、C、D组Nurr1 mRNA含量降低,分别是A组的0.85,0.66,0.54和0.33倍,经多组比较的单因素方差分析显示不同浓度组间差异有统计学意义(P<0.01)。同时,脑组织Nurr1蛋白含量也随染锰剂量增大而降低,经多组比较的单因素方差分析显示差异有统计学意义(P<0.01)。结论锰可以在mRNA和蛋白质水平改变Nurr1的表达。

核受体相关因子1的研究进展

核受体相关因子 1(nuclearreceptor relatedfactor 1,Nurr1)是一种转录因子 ,属于核受体超家族成员 ,主要表达于中脑黑质与腹侧被盖区 ,作为基因转录调控蛋白而参与了中脑多巴胺能神经元的发育与存活、长时记忆、肝再生及炎症等多种生理和病理过程。本文总结和讨论了有关Nurr1的编码基因、分子结构。

芪参还五胶囊对大鼠帕金森病核受体相关因子1表达的影响及机制

目的 分析芪参还五胶囊对大鼠帕金森病相关基因核受体相关因子1(Nurr1)表达的影响及作用机制。方法 将30只SD大鼠均分芪参还五胶囊低、中、高剂量组及模型对照组和正常对照组,前4组大鼠于内侧前脑束单位注射6-羟基多巴胺建立帕金森病模型、对照组大鼠手术但不造模;造模后的第2天低、中、高剂量组分别大鼠给予0.93、1.87及3.75 g/(kg·d)剂量的芪参还五胶囊溶液灌胃、模型对照组和正常对照组给予等量生理盐水灌胃,连续7 d;于造模成功后的第7天及第14天时,比较各组大鼠黑质纹状体的谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)、白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子(TGF-β)及Nurr1 mRNA水平,检测黑质纹状体细胞的细胞活力、侵袭能力、凋亡率,比较各组大鼠黑质纹状体的神经突触数、突触后致密物(PSD)含量、活性区长度及磷酸化蛋白激酶B(p-AKt)、蛋白激酶B(AKt)蛋白表达水平。结果 造模后第7天及第14天时,与正常对照组相比,芪参还五胶囊低、中、高剂量组及模型对照组大鼠的黑质纹状体GSH、GSH-Px、GSH-ST含量,细胞活力、侵袭能力、突触个数、活性区长度、PSD含量、p-AKt蛋白表达水平均降低;IL-4、TGF-β、Nurrl mRNA水平,细胞凋亡率和AKt蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与高剂量组相比,低剂量和中剂量组、模型对照组大鼠的黑质纹状体GSH、GSH-Px、GSH-ST含量、细胞活力、侵袭能力、突触个数、活性区长度、PSD含量、p-AKt蛋白表达水平均降低,IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA水平、细胞凋亡率、AKt蛋白表达水平均升高,且造模后第14天时低、中、高剂量组大鼠的黑质纹状体GSH、GSH-Px、GSH-ST含量、细胞活力、细胞侵袭能力、突触个数、活性区长度、PSD含量、p-AKt蛋白表达水平随着芪参还五胶囊剂量的升高而升高,IL-4、TGF-β、Nurr1 mRNA水平、细胞凋亡率、AKt蛋白表达水平随着芪参还五胶囊剂量的升高而降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 芪参还五胶囊可能通过抑制PI3K/AKt信号通路,影响PD模型大鼠黑质纹状体氧化还原反应,缓解炎症反应,降低细胞活力和侵袭能力,促进凋亡,保护神经元突触结构完整及超微结构。

核受体相关因子1基因转染骨髓源性神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元的分化

背景:核受体相关因子1基因修饰是否促进骨髓源性神经干细胞向多巴胺能神经元分化少见报道。目的:观察核受体相关因子1基因修饰骨髓源性神经干细胞在体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。方法:体外培养和纯化大鼠骨髓源性神经干细胞,将骨髓源性神经干细胞分为4组,将未转染的骨髓源性神经干细胞随机分为对照组,脑源性神经营养因子组;将筛选出的重组质粒转染阳性的神经干细胞分为核受体相关因子1组和核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组。结果与结论:RT-PCR显示转染的骨髓源性神经干细胞4d后核受体相关因子1高表达,分化结果显示:核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组细胞内酪氨酸羟化酶在mRNA水平上的表达量最高,神经干细胞贴壁分化后各组酪氨酸羟化酶阳性细胞比例均明显高于对照组,其中以核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组分化比例最高,为(52.44±15.9)%。提示核受体相关因子1基因修饰可促进骨髓源性神经干细胞向多巴胺能神经元分化,并通过脑源性神经营养因子的诱导作用,在体外可获得大量的多巴胺能神经元。

核受体相关转录因子1(Nurr1)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制

目的探讨核受体相关转录因子1(Nurr1)对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制。方法采用大脑中动脉闭塞线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(MCAO/R),分为对照组、模型组、阴性病毒组和Nurr1过表达组。过表达Nurr1后,采用Longa改良神经功能评分法进行大鼠神经功能缺损评分,2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死体积,免疫荧光组织化学染色检测微管相关蛋白2(MAP2)表达确定神经细胞损伤情况,相关试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测大鼠脑组织皮质层组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关凋亡调节子X(BAX)的蛋白表达。结果与对照组相比,模型组中大鼠神经功能评分、脑梗死面积、MDA含量、TNF-α、IL-1β和BAX蛋白表达明显增加;MAP2阳性神经细胞数量、SOD活性和Bcl2蛋白表达明显降低;与模型组相比,过表达Nurr1后,神经功能评分、大鼠脑梗死面积、MDA含量、TNF-α、IL-1β和BAX蛋白表达则明显降低;MAP2阳性神经细胞数量、SOD活性和Bcl2蛋白表达明显增高。结论Nurr1可能通过抗氧化、抑制炎症反应,阻断线粒体凋亡信号通路介导的细胞凋亡,从而改善大鼠神经功能缺损,减轻脑缺血再灌注神经元损伤。

帕金森病相关基因α-突触核蛋白和PINK1对Nurr1的调节作用

目的探讨帕金森病相关基因α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)和PTEN诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)对转录因子Nurr1的调节作用。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的方法检测α-syn与Nurr1的相互作用。同时,在PINK1基因敲减的细胞模型中,通过双荧光素酶报告系统检测PINK1对Nurr1转录激活活性的调节作用。结果 FRET检测显示,CFP-α-syn与YFP-Nurr1之间发生了荧光共振能量转移的现象。其FRET效率大约为20.52%。提示α-syn与Nurr1之间可能存在直接的相互作用。对于PINK1基因敲减的细胞进行研究发现,在PINK1被抑制表达24 h或48 h后,Nurr1的活性显著下调。结论以往研究提示α-syn可能是Nurr1的抑制因子。研究显示α-syn可能与Nurr1直接结合而抑制其活性。而PINK1对Nurr1可能存在一个正性调节作用。因此,二者对Nurr1的调节可能存在一个相互协调、相互制约的关系。

人核受体Nurr1基因的克隆和表达及产物纯化(英文)

核受体相关因子 1(nuclearreceptor relatedfactor 1,Nurr1)是主要表达于中脑黑质及腹侧被盖区多巴胺能神经元的一种转录因子 ,属于核受体超家族成员 ,其功能性配体尚未被确认 .研究表明 ,Nurr1对中脑多巴胺神经元的发育、存活以及成熟后功能的维持具有特殊重要意义 .如能找到它的特异性配体 ,将为最终筛选出治疗帕金森病等中枢多巴胺失调性疾病的药物或化学合成先导物打下基础 .为了获取Nurr1蛋白以标定其配体以及研究蛋白质间的相互作用 ,采用RT PCR技术 ,从人胚中脑组织特异性扩增及克隆了人Nurr1cDNA ,并获得一个在氨基端缺失 35 0bp碱基的Nurr1突变体 .将正常的Nurr1基因片段亚克隆至表达载体pET2 8a ,分别在TNTRT7偶联网织红细胞溶胞系统和大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得表达 ,均以可溶性形式存在 ,且产自于体外转录 翻译系统的真核表达Nurr1蛋白已标记上同位素3 5S .Western印迹分析表明 ,所表达的重组目的蛋白具有特异的免疫反应性 .经Ni NTA亲和层析 ,得到了初步纯化的rhNurr1蛋白 .

pCDNA3.1-Nurr1真核表达载体的构建及其表达

目的构建核相关受体因子1(Nurr1)基因真核表达载体,观察其在HeLa细胞内的表达。方法利用RT-PCR技术从大鼠脑组织总RNA中扩增Nurr1cDNA,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine 2000介导转染HeLa细胞,应用荧光定量PCR检测鉴定Nurr1在细胞内的表达。结果 RT-PCR的产物经重组质粒pCDNA3.1酶切,DNA测序证实1 797 bp片段的碱基序列与预期目的基因基本一致。将其转染HeLa细胞后,荧光定量PCR结果表明Nurr1在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-Nurr1,为后续的研究奠定基础。

转录因子Pitx3和Nurr1在中脑多巴胺能神经元终末分化中的表达特点

目的:探讨转录因子垂体同源盒家族因子3(Pitx3)和孤儿核受体相关因子1(Nurr1)在多巴胺(DA)能神经元终末分化中的表达特点。方法:采用免疫荧光方法检测体外培养的中脑源性神经干细胞(mNSCs)诱导分化后和大鼠胚胎发育至出生腹侧中脑Pitx3、Nurr1和酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果:(1)体外培养的mNSCs诱导分化48 h的Map-2阳性细胞不表达Pitx3、Nurr1和TH;分化7 d的TH阳性细胞均表达转录因子Pitx3和Nurr1;(2)在大鼠腹侧中脑黑质(SN)、腹侧被盖区(VTA)和中缝背核(DRN)可见大量TH与Pitx3(或Nurr1)共表达的神经元;(3)Pitx3和Nurr1阳性细胞主要分布于E16.5、P0大鼠SN、VTA和DRN区,其中Pitx3阳性细胞还少量分布于腹侧中脑非DA能神经元区域,Nurr1阳性细胞在腹侧中脑分布范围较Pitx3更广泛。结论:转录因子Pitx3、Nurr1在中脑DA能神经元的终末分化和生存维持中起重要作用。

大鼠中脑发育早期Nurr1时空模式及与TH表达的相关性

目的:观察孤儿核受体相关因子1(Nuclear receptor-related factor1,Nurr1)在大鼠胚胎中脑发育过程中的时空表达模式及与酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的相关性。方法:制备大鼠胚胎E12.5、E13.5、E14.5d中脑脑片,行Nurr1/TH的免疫荧光双标记。在荧光显微镜下分别计数每个视野下TH、Nurr1单标神经元和Nurr1/TH双标神经元的数量,用图像处理系统和Stata7.0软件对所得数据进行统计学分析。结果:Nurr1/TH双标神经元在E12.5d时较少,随着发育时间的推移逐渐增加,至E14.5d时TH阳性细胞中几乎均有Nurr1的表达。结论:本研究结果进一步从形态学的角度提示转录因子Nurr1在胚胎发育过程中对中脑多巴胺(dopamine,DA)能神经元的发育起重要作用。

大鼠生后视网膜发育过程中Nurr1与TH的相关关系研究

目的:观察核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)与多巴胺能神经细胞特异性标记物酪氨酸羟化酶(TH)在生后大鼠视网膜发育过程中的表达变化,探明Nurr1与视网膜多巴胺能神经元的相关关系。方法:石蜡包埋组织切片,免疫组织化学双重标记。结果:Nurr1在视网膜发育过程中的表达出现了显著的动态变化,Nurr1阳性产物主要表达在内核层细胞,生后3～7 d达到高峰,之后随着细胞的成熟阳性表达又逐渐减少,成熟的视网膜组织内仅见少量Nurr1阳性细胞,在视网膜神经细胞从幼稚到成熟的分化过程中仅见个别TH阳性细胞。Nurr1与TH的免疫组化双标结果显示两蛋白可以共表达在同一细胞中,但众多的Nurr1阳性细胞不表达TH。结论:Nurr1在大鼠视网膜多巴胺能神经细胞及非多巴胺能神经细胞从幼稚到成熟的分化过程中可能具有重要的调控作用。

龟羚帕安丸对PD大鼠神经干细胞移植及中脑黑质Nurr1、Shh表达的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠神经干细胞(NSCs)移植后中脑黑质的细胞存活数以及核受体相关因子1(Nurr1)、音猥因子(Shh)蛋白表达的影响。方法采用6-羟基多巴(6-OHDA)注射法建立PD大鼠模型,将60只造模成功大鼠随机分为空白对照组,移植对照组,美多芭组(10 mg·kg^(-1))和中药低、中、高剂量组(龟羚帕安丸1,2,4 g·kg^(-1));各组给予右侧纹状体注射移植5μL NSCs悬液,空白对照组注射5μLPBS;灌胃给药,每日2次,连续28 d。免疫组化法检测PD大鼠中脑黑质的NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,移植对照组的NSCs存活数、Nurr1及Shh蛋白表达水平明显升高(P <0.01)。与移植对照组比较,各治疗组的中脑黑质NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达明显升高(P <0.05,P <0.01)。结论龟羚帕安丸能够促进PD大鼠NSCs移植后的细胞存活,可能与其上调大鼠中脑黑质Nurr1、Shh蛋白表达水平有关。

Nurr1基因shRNA表达载体的构建及其鉴定

目的构建针对小鼠核受体相关因子1(Nurr1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体,为进一步体内外研究Nurr1基因的功能奠定基础。方法选择两段RNA干扰靶序列,在体外分别合成两段互补的寡核苷酸,退火后与线性化的pSilenCirele质粒连接、转化感受态细胞DH5α,扩增、纯化得到所需质粒,通过酶切后琼脂糖电泳以及基因测序鉴定其分子量及插人片段的序列。结果纯化质粒的大小为4．6kb,插入的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符。结论成功构建了针对:Nurr1基因的shRNA的表达载体。

胶质细胞源性神经营养因子促进中脑源神经干细胞增殖和向多巴胺能神经元分化

目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对中脑源神经干细胞(mNSCs)增殖、分化能力和表达垂体同源盒家族因子3(Pitx3)、孤儿核受体相关因子1(Nurr1)和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白的影响。方法:取E14.5d大鼠中脑组织体外培养原代mNSCs,增殖培养传三代后进行分化实验;使用免疫荧光方法检测培养分化的mNSCs表达Pitx3、Nurr1和TH蛋白。结果:在GDNF作用下,体外培养的mNSCs克隆球直径增大,数量增多;分化的神经元中Pitx3、Nurr1和TH蛋白表达增加(P<0.05)。结论:在体外培养条件下,GDNF有促进mNSCs增殖和向多巴胺能神经元分化的作用。