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一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
1
作者
梁爽爽
冀美超
+3 位作者
胡晓晴
付成华
朱长军
董智雄
《国际生物医学工程杂志》
CAS
2015年第5期262-265,281,共5页
目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10%~30%和10%-45%的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体;然后将哺乳动...
目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10%~30%和10%-45%的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体;然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心;再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1.5ml离心管中,测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质,利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好,操作简单,为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
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关键词
连续蔗糖密度梯度
核糖体
核糖体前体
RPL15
原文传递
题名
一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
1
作者
梁爽爽
冀美超
胡晓晴
付成华
朱长军
董智雄
机构
天津师范大学生命科学学院、天津师范大学分子细胞系统生物学重点实验室、天津市动植物抗性重点实验室
出处
《国际生物医学工程杂志》
CAS
2015年第5期262-265,281,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(31271485)
2011年教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET-11-1066)
+6 种基金
天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目(12JC2DJC21400)
国家自然科学基金青年基金项目(31301138)
天津师范大学中青年教授学术创新推进计划项目(52XC1001)
天津师范大学校级项目〉校博士基金(52XB1104)
天津师范大学“渤海学者”基金项目
天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目(14JCYBJC24200)
天津市中小企业科技创新基金项目(14ZXCXSY00121)
文摘
目的利用连续蔗糖密度梯度的方法分离提取哺乳动物细胞的核糖体前体和核糖体。方法采用超速离心法建立连续蔗糖密度梯度,分别用梯度为10%~30%和10%-45%的连续蔗糖密度梯度提取哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体;然后将哺乳动物细胞裂解液加入到已建立好的连续蔗糖密度梯度上进行超速离心;再将不同沉降系数的核糖体前体和核糖体收集到不同的1.5ml离心管中,测量每一个样品的吸光度值A。并提取其中的蛋白质,利用WesternBlot检测核糖体大亚基蛋白RPL15的定位。结果核糖体大亚基蛋白RPL15位于核糖体前体的60S上和成熟核糖体的60S、80S和多聚核糖体上。结论利用水平转头建立的连续蔗糖密度梯度可快捷分离哺乳动物细胞内的核糖体前体和核糖体。该法分离效果好,操作简单,为快速和大量制备、分离多种核糖体提供了一种良好的方法。
关键词
连续蔗糖密度梯度
核糖体
核糖体前体
RPL15
Keywords
Continuous sucrose density gradient
Ribosome
Pre-ribosome
RPL15
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种连续蔗糖密度梯度离心分离哺乳动物细胞核糖体前体和核糖体的技术优化
梁爽爽
冀美超
胡晓晴
付成华
朱长军
董智雄
《国际生物医学工程杂志》
CAS
2015
0
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