核糖体合成调控因子1对人乳腺癌细胞顺铂抗性的影响及作用机制

目的探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)对乳腺癌细胞顺铂抗性的影响及其作用的分子机制。方法通过Western blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测人乳腺癌细胞MCF-7和人耐顺铂乳腺癌MCF-7(MCF-7/DDP)细胞中RRS1 mRNA及蛋白的表达水平;利用慢病毒感染的方法沉默RRS1基因,采用Western blot和RT-qPCR方法检测对照组(感染慢病毒shRNA-Ctrl)和RRS1-shRNA组(感染慢病毒shRNA-RRS1)细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达水平,计算RRS1基因敲降效率;采用CCK8方法检测对照组和RRS1-shRNA组细胞的增殖能力及顺铂对两组细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用流式细胞仪检测对照组和RRS1-shRNA组细胞的周期分布和凋亡率;采用Western blot法检测对照组和RRS1-shRNA组细胞中细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白、磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)蛋白、凋亡抑制蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、促凋亡蛋白Bcl-2关联X(BAX)蛋白相对表达水平。结果MCF-7和MCF-7/DDP细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达量比较差异均有显著性(t=13.50、8.29,P<0.05);对照组和RRS1-shRNA组细胞中RRS1 mRNA和蛋白表达量比较差异均有显著性(t=86.83、6.55,P<0.05),RRS1基因的敲降效率约在70%以上;两组细胞比较,顺铂对MCF-7/DDP细胞的IC_(50)值、细胞增殖能力、细胞周期分布、细胞凋亡率及P-ERK蛋白、Bcl-2蛋白和BAX蛋白的表达水平比较差异均有显著性(t=3.06~8.83,F=17.33、70.35,P<0.05)。结论RRS1基因可能参与了乳腺癌细胞的顺铂抗性过程,其作用可能与RRS1基因高表达引起的细胞凋亡抵抗有关,对临床上提高顺铂疗效具有重要意义。

沉默信息调节因子2相关酶1及脂肪酸合成酶在非酒精性脂肪肝大鼠模型中的表达及意义

目的观察高脂、高糖喂养对大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响,探讨其沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt1)及脂肪酸合成酶(FAS)的表达变化,进而揭示可能引起NAFLD发病的分子途径。方法 Wistar雄性大鼠分为正常组和模型组,分别饲以基础饲料和高脂、高糖饲料。13周后处死,肝脏行苏木精-伊红(HE)染色和油红O染色,检测血清及肝匀浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,应用实时逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和Western blot检测大鼠肝组织FAS、Sirt1的m RNA和蛋白表达水平。结果模型组大鼠体重、能量利用率、血清及肝脏TC和TG明显高于正常组。HE染色和油红O染色观察到模型组大鼠肝细胞脂肪明显变性。模型组肝脏Sirt1 m RNA水平与正常组比较,差异无统计学意义,但蛋白水平明显低于正常组;模型组肝脏中FAS m RNA和蛋白水平明显低于正常组。结论高脂、高糖喂养能使大鼠形成NAFLD,增加血清及肝脏的脂肪浓度。Sirt1表达降低提示其与NAFLD的发生有关,而FAS表达降低与以往部分研究结果截然不同,还需要更深层次的研究。

沉默信息调节因子1调控胆固醇合成对大鼠视神经损伤后RGCs修复的作用机制

目的:探讨沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)调控胆固醇合成在视神经损伤修复中的作用机制。方法:制备视神经损伤的大鼠模型,随机数字法将70只大鼠分为正常组10只,白黎芦醇治疗组(实验组)30只和PBS缓冲液对照组(对照组)30只;再将实验组和对照组分别分为三组,每组各10只;将白黎芦醇或PBS分别注射实验组和对照组大鼠,观察视神经损伤后第7,14,21d处死大鼠。分离视网膜,观察各组大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGCs)的存活数量。分离术眼视神经,检测其胆固醇含量;RT-PCR法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、SREBP2和HMGCR蛋白表达水平。结果:损伤模型大鼠的视网膜RGCs的存活数量以及视神经胆固醇含量均明显减少(P<0.01);SIRT1、SREBP2和HMGCR的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05),并呈时间依赖关系。三组分三个时间点,随时间延长损伤均加重,而治疗组损伤程度较对照组明显减弱。而白黎芦醇治疗组的视神经胆固醇含量以及SIRT1、SREBP2、HMGCR的mRNA和蛋白表达水平,RGCs存活数量均明显回升(P<0.01),且呈时间依赖关系。结论:白黎芦醇通过上调SIRT1、SREBP-2及其下游调控基因HMGCR的表达,从而进一步促进神经元细胞的胆固醇合成以及视网膜神经节细胞的损伤后修复过程。

脂肪酸合成相关的固醇调节元件结合转录因子1在肿瘤中的研究进展

脂肪酸合成增加是肿瘤细胞的第三大代谢表型,固醇调节元件结合转录因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1,SREBP1)是脂质代谢,尤其是脂肪酸合成相关的重要核转录因子。SREBP1在多种肿瘤中有异常高表达,并在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、耐药性及能量代谢等方面发挥着重要作用。本文就SREBP1的结构、功能,在肿瘤细胞中SREBP1的表达、作用及相关通路进行综述。

肿瘤抑制因子WT1对人的诱导型一氧化氮合成酶基因的转录调节作用

将人的诱导型一氧化氮合成酶(hiNOS)启动子构建在带荧光素酶基因的载体pGL3-basic上,构建成用荧光素酶为系统的启动子,以研究载体p8.3iNOS.结果显示,肾母细胞肿瘤抑制因子(WT1)能够有效地抑制hiNOS启动子的转录;且WT1的4个选择性剪接本的抑制效果有所不同,其中WT1(-/-)在两种肝癌细胞(HepG2和Hep3B)中对hiNOS的表达均具有最强的抑制作用,并且抑制效果具有剂量依赖性,用Western blot检测结果进一步证实HepG2细胞中WT1(-/-)过量表达能下调hiNOS表达.以上结果说明WT1在肝癌细胞中对人的hiNOS具有转录调节作用.

脑和肌肉ARNT样蛋白1、周期昼夜节律调节因子2、Notch1、糖原合成酶激酶-3β在结直肠腺癌组织中的表达及意义

目的探讨脑和肌肉ARNT样蛋白1(BMAL1)、周期昼夜节律调节因子2(PER2)、Notch1、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠腺癌组织中的表达及意义。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例结直肠癌患者手术切除的新鲜结直肠癌组织及相应癌旁组织中BMAL1、PER2、Notch1、GSK-3βmRNA的相对表达量;免疫组化法检测50例手术切除的结直肠腺癌及癌旁组织、30例经内镜切除的结直肠腺瘤组织中BMAL1、PER2、Notch1、GSK-3β蛋白的表达情况。结果结直肠癌组织中,BMAL1、PER2 mRNA的相对表达量均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05);结直肠癌组织和癌旁组织中Notch1、GSK-3βmRNA的相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。免疫组化结果显示,结直肠腺癌组织、结直肠腺瘤组织及结直肠腺癌癌旁组织中,BMAL1、PER2的表达呈递增趋势,而Notch1、GSK-3β的表达呈递减趋势。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期结直肠腺癌患者结直肠腺癌组织中BMAL1、Notch1蛋白表达均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.05);病理类型为黏液腺癌的结直肠腺癌组织中PER2蛋白的表达高于管状腺癌(P﹤0.05),GSK-3β的表达低于管状腺癌(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,结直肠癌组织中BMAL1的表达与PER2的表达呈正相关(r=0.332,P=0.018),PER2的表达与GSK-3β的表达呈负相关(r=-0.291,P=0.040),Notch1的表达与GSK-3β的表达呈正相关(r=0.285,P=0.045),其余指标间的表达无相关性。结论BMAL1、Notch信号通路、GSK-3β均可能参与调控结直肠癌的发生、发展过程,且GSK-3β可能与BMAL1和Notch信号通路之间存在相互调控作用。

运动诱导骨骼肌线粒体生成中沉默信息调节因子1的作用

背景:沉默信息调节因子 1 是新近受到体育科学领域关注的能量代谢调节因子,在运动骨骼肌线粒体生成中与其他信号分子一起发挥作用。目的:综述沉默信息调节因子 1 在运动诱导骨骼肌线粒体生物合成中的作用及机制。方法:应用计算机检索 PubMed 和 Highwire 数据库 2000 年 1 月至 2013 年 1 月有关运动、沉默信息调节因子 1、骨骼肌线粒体生物合成的文献,检索词为 SIRT1,AMPK,PGC-1α,mitochondrial biogenesis,skeletalmuscle, exercise,限定文章语言为 English。对资料进行初审,选取沉默信息调节因子 1 与运动诱导骨骼肌线粒体生物合成有关的文献,排除重复研究。结果与结论:共收集相关文献 165 篇,排除重复研究,纳入 62 篇。沉默信息调节因子 1 作为一种 NAD+依赖的去乙酰化酶,在运动中被激活,通过上调过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子表达而诱导骨骼肌线粒体生物合成,其分子机制涉及一磷酸腺苷激活的蛋白激酶、低氧诱导因子 2α等信号分子。但近年来的一些研究对沉默信息调节因子 1 在骨骼肌线粒体生物合成中的作用提出了质疑,认为其并非为运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成所必需。沉默信息调节因子 1 在运动诱导的骨骼肌线粒体生物合成中发挥重要调控作用,但采用蛋白和活性等不同检测方法,在实验结果上可能会造成较大差异。

虎金方通过SIRT1/AMPK通路对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏脂质合成的影响

目的探讨虎金方对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型小鼠的治疗作用及脂质合成的相关机制。方法将50只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组及虎金方高、中、低剂量组(21.24、10.62、5.31 g·kg^(-1))。正常组小鼠给予维持饲料,其余各组均给予高脂饲料,连续饲养14周以复制MAFLD动物模型。从第15周开始,正常组和模型组小鼠按10 mL·kg^(-1)给予0.9%生理盐水灌胃,虎金方各剂量组分别给予相应剂量的浓煎药液灌胃(10 mL·kg^(-1)),每日1次,连续给药8周。末次给药后,禁食不禁水24 h,测定体质量后进行解剖,测定肝脏湿质量,计算肝脏系数;采用RT-PCR及Western Blot法检测肝脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、甾醇调节元件结合蛋白(SREBP)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝湿质量及肝脏系数均显著增加(P<0.001);肝脏SIRT1 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01,P<0.001),AMPK、SREBP、FAS mRNA及蛋白表达均明显上调(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,虎金方高剂量组小鼠的体质量、肝湿质量及肝脏系数均明显降低(P<0.05, P<0.001),肝脏SIRT1 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01, P<0.001), AMPK、SREBP、FAS mRNA及蛋白表达均明显下调(P<0.05,P<0.001)。结论虎金方可能通过调节SIRT1/AMPK通路,促进肝脏脂质代谢,抑制肝脏脂质合成,从而缓解MAFLD的进展。

RRS1在神经母细胞瘤组织和细胞中的表达及意义

目的探究核糖体合成调控因子1(RRS1)在神经母细胞瘤组织和细胞中的表达及意义。方法使用TARGET数据库分析RRS1在神经母细胞瘤组织中的表达情况,并分析RRS1高表达与神经母细胞瘤病理指标及预后之间的关联,随后使用GEO数据库分析RRS1在神经母细胞瘤细胞系中的表达情况。然后运用慢病毒转染技术过表达或敲低SK-N-AS细胞株中RRS1的表达,采用CCK-8法、平板克隆实验、流式细胞术和Transwell法检测RRS1对肿瘤细胞增殖、凋亡、周期分布和迁移的影响。结果TARGET和GEO数据库分析结果显示,RRS1基因在59例NB组织中高表达(59/150),且其在NB高风险组中的表达明显高于中、低风险组(P<0.01);此外,RRS1 mRNA在NB细胞系中的表达水平明显高于其在对照细胞中的表达(P<0.01)。临床病理相关性分析结果显示,RRS1mRNA的表达水平与NB患者的年龄、MYCN扩增、INSS分期、COG分期及NB患者的死亡(临床回访)(P<0.05)有关;Kaplan-Meier生存分析显示,RRS1高表达组NB患者的总生存时间(OS)较低表达患者的短(P<0.001)。细胞功能实验结果表明,RRS1过表达可促进SK-N-AS细胞株的增殖、周期进程和迁移并抑制细胞凋亡;而RRS1敲低时,实验显示相反的趋势。结论RRS1高表达可能与神经母细胞瘤患者的不良预后相关,其可参与调节神经母细胞瘤细胞的增殖、凋亡、周期进程和迁移。

Nature：鉴别出调节血红素合成的特定基因

近日，来自布莱根妇女医院的研究者发现了一种新型基因，其可以在红细胞形成期间调节血红蛋白的合成。这项研究发现刊登在11月7日的国际杂志Nature上，研究发现可帮助我们增加对生物化学知识的理解以及开发人类贫血和线粒体障碍的新型疗法。文章中，研究者使用了斑马鱼遗传筛选技术来克隆线粒体的三磷酸腺苷酶抑制因子-1基因（Atpifl），

基于ERK1/2-GSK3β-NFκB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响

目的 研究基于细胞外信号调节激酶(ERK)1/2-糖原合成酶激酶(GSK)3β-核因子(NF)κB信号通路探究芪黄苁蓉通便散贴敷对肾衰竭大鼠肠道菌群及肾功能的影响。方法 40只SD大鼠随机抽取10只作为健康组进行对照,剩余建立慢性肾衰竭(CRF)模型,建模成功后分为模型组、治疗组(芪黄苁蓉通便散贴)、药物对照组(复元四红散)各10只。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾功能、氧化应激相关指标水平,苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肾组织病理形态学,采集粪便检测肠道细菌种类及数量,Western印迹检测ERK1/2-GSK3β-NFκB通路相关蛋白。结果 与健康组相比,模型组尿素氮、血肌酐、尿酸、丙二醛、肠球菌、肠杆菌、ERK1/2、p-ERK1/2、GSK3β、p-GSK3β、NFκBp65、p-NFκBp65、单核细胞趋化蛋白-1、细胞间黏附分子-1升高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、双歧杆菌、乳酸杆菌水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善,且以治疗组效果显著(P<0.05)。健康组肾组织结构正常;模型组肾小球变形,肾小管扩张,大量炎性细胞浸润;与模型组相比,治疗组与药物对照组均有所改善。Masson染色显示,健康组结构正常;模型组出现肾组织肾小管发生变性、萎缩、破坏及再生等病理改变,间质中单核与淋巴细胞浸润及胶原纤维表达最多;治疗组与药物对照组肾小管、间质的病理改变得到有效改善,蓝色胶原纤维沉积也呈下降趋势。结论 芪黄苁蓉通便散贴可能是通过抑制ERK1-2-GSK3β-NF-κB通路的激活,改善CRF大鼠肠道菌群及肾功能。

RRS1对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、转移和侵袭的影响

目的:明确RRS1(核糖体合成调节因子1)对皮肤鳞状细胞癌(cSCC)细胞增殖、转移和侵袭的影响。方法:通过免疫组化和GEO数据库明确RRS1在cSCC与正常皮肤中表达的差异。慢病毒感染法建立RRS1敲低的cSCC细胞系SCL-1细胞。MTT实验、Celigo划痕实验、Transwell实验研究RRS1敲低后SCL-1细胞增殖、转移和侵袭性的变化。QRT-PCR法检测增殖、转移和侵袭相关基因表达。结果:RRS1在cSCC细胞中表达量明显高于正常皮肤,RRS1敲低后SCL-1细胞增殖、转移和侵袭性均降低。RRS1敲低后,增殖相关基因FGF2,AREG,cyclin E1显著降低。转移和侵袭相关基因VIM,CXCL1,CXCL3,CXCL8,MMP1表达显著降低。结论:RRS1可能参与了cSCC细胞的增殖、转移和侵袭过程。

Janus激酶-信号转导及转录活化因子通路对内毒素/脂多糖体外诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1合成释放的调节作用

目的探讨Janus激酶(JAK)-信号转导及转录活化因子(STAT)通路对内毒素/脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)合成释放的调节作用。方法取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,培养3d后用LPS刺激,分别于刺激前及刺激10、30、60、120min时观察JAK2、STAT1以及STAT3的活化情况,每时相点重复测定4次,以积分吸光度(IA)值表示;另取细胞分为正常组、LPS刺激组、JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组,培养3d后用LPS刺激后4组细胞,刺激前2h,后3组分别加入AG490、氟达拉滨及雷帕霉素,观察各组HMGB1基因表达及蛋白释放情况,每组重复测定4次。结果LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞JAK2、STAT1及STAT3在短时间(120min)内活化,其中STAT3活化最为迅速,10min即可达到峰值(7.47±0.56)。JAK2抑制组、STAT1抑制组、STAT3抑制组HMGB1基因表达均明显受抑制,其表达量均明显低于LPS刺激组(P<0.01),其中JAK2抑制组明显高于正常组(P<0.01),其余两个抑制组则与正常组相近(P>0·05);但3个抑制组HMGB1蛋白表达量与LPS刺激组基本相同,均明显高于正常组(P<0.01).结论JAK-STAT通路可在LPS刺激下早期活化,部分参与了诱导HMGB1合成的信号调控过程。

PES1高表达与胃癌的进展和预后的关系

目的:探讨胃癌患者肿瘤组织内核糖体生物合成因子1(peccadillo ibosomal biogenesis factor 1,PES1)表达与胃癌的进展和预后的关系。方法:收集2012年1月至2013年1月在复旦大学附属闵行医院接受胃癌切除根治术的89例胃癌患者。在胃癌组织中通过免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测PES1的表达情况,并与配对的非肿瘤胃组织表达水平进行对比;将肿瘤标本中PES1的表达情况与临床病理特征进行相关性分析以研究PES1表达与胃癌进展的关系;通过单变量分析PES1表达与患者预后之间的关系。结果:PES1在胃癌组织中高表达,且其高度表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和T分期呈正相关(均P<0.05)。PES1表达可作为TNM I期患者总生存率和无进展生存率的独立预后标志物。结论:PES1高表达与胃癌进展正相关,且可用作预后监测的靶标分子。

miR-299-5p靶向RRS1调控胃癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-299-5p(miRNA-299-5p)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(BGC-823、MKN45、MGC803)及正常胃上皮GES-1细胞中miRNA-299-5p、核糖体合成调控因子(RRS)1 mRNA表达水平,采用Western印迹法检测RRS1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miRNA-299-5p与RRS1的靶标关系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组BGC-823细胞增殖活力;流式细胞术检测各组BGC-823细胞凋亡情况。结果不同胃癌细胞株中miRNA-299-5p表达水平均低于GES-1细胞,而RRS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于GES-1细胞(P<0.05)。miRNA-299-5p组GES-1细胞增殖活力显著低于miR-NC组(P<0.05),miRNA-299-5p表达水平及细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与si-NC组相比,si-RRS1组BGC-823细胞增殖活力及RRS1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);RRS1是miRNA-299-5p的靶基因;与miR-299-5p+pcDNA组相比,miR-299-5p+pcDNA-RRS1组BGC-823细胞增殖活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论miRNA-299-5p可抑制胃癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其主要通过靶向调控RRS1表达而发挥作用。

RRS1对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响及其作用机制

目的探讨核糖体合成调节因子1(RRS1)基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的影响及其作用机制。方法体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞、BT549细胞、人正常乳腺上皮HMEC细胞,采用Western blot方法检测以上细胞中RRS1蛋白的相对表达情况。乳腺癌MDA-MB-231细胞分别转染慢病毒shRNA-Ctrl、shRNA-RRS1、空载质粒及RRS1过表达质粒后,细胞分为空白处理组(A组),转染shRNA-Ctrl组(B组),转染shRNA-RRS1组(C组),转染Vector组(D组),转染Vector-RRS1组(E组),转染48 h后,采用Western blot方法检测5组细胞中RRS1蛋白相对表达情况,采用划痕实验、Transwell实验检测RRS1基因对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力影响;采用Western blot方法检测MDA-MB-231细胞E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)、糖原合成激酶3(GSK3β)、锌指转录因子(Snail)蛋白的相对表达情况。结果Western blot方法检测结果显示,乳腺癌MDA-MB-231、BT549细胞中的RRS1蛋白相对表达量明显高于正常乳腺上皮HMEC细胞(F=74.71,P<0.01)。Western blot方法检测结果显示,C组细胞中RRS1蛋白相对表达量明显低于A、B组,E组细胞中RRS1蛋白的相对表达量明显高于A、B、C、D组(F=33.26,P<0.01)。Transwell小室和划痕实验结果显示,与A、B组相比,C组细胞的侵袭和迁移能力降低,与A、D组相比,E组细胞侵袭和迁移能力升高(F=208.30、187.70,P<0.01)。Western blot检测结果显示,与A、B组相比,C组细胞中Vimentin、P-AKT、GSK3β、Snail蛋白相对表达量低,与A、D组相比,E组细胞中Vimentin、P-AKT、GSK3β、Snail蛋白相对表达量高(F=34.29~69.03,P<0.01),与A、B组相比,C组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量高,与A、D组相比,E组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量低(F=36.00,P<0.01)。结论RRS1可能参与了乳腺癌的侵袭和转移过程,且其作用可能与促进细胞上皮-间质转化有关。

FGFR2-IIIb D3胞外段抑制角质形成细胞的脂质合成

目的:探讨成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)-IIIb D3胞外段对角质形成细胞中脂质合成的抑制作用。方法:利用等温滴定量热(ITC)法和CCK-8法检测FGFR2-IIIb D3胞外段的生物特性,并利用real-time PCR、Western blot、流式细胞术和油红O染色法分析其对角质形成细胞HaCaT脂质合成的抑制作用。结果:(1)ITC、real-time PCR和CCK-8结果显示FGFR2-IIIb在HaCaT细胞中高表达,FGFR2-IIIb D3胞外段可与FGF7特异性结合,抑制HaCaT细胞活力;(2)Western blot结果显示在HaCaT细胞中FGF7可显著上调固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A合成酶(ACS)、硬脂酰辅酶A脱饱和酶(SCD)和羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR) mRNA的表达及p-FGFR、p-AKT和SREBP-1蛋白的表达(P<0.01),用FGFR2-IIIb D3胞外段和AKT抑制剂处理后可抑制它们的上调,且与FGF7组相比差异显著;(3)油红O染色法和流式细胞术结果显示,FGF7诱导后HaCaT细胞的脂质含量明显上调,用FGFR2-IIIb D3胞外段和AKT抑制剂处理后,脂质含量下调(P<0.01)。结论:FGFR2-IIIb D3胞外段竞争性地与FGF7结合,抑制FGFR2-IIIb的自体磷酸化,抑制下游PI3K-AKT信号通路,抑制SREBP-1c和下游脂质合成酶的表达,进而抑制角质形成细胞中脂质的合成。

RRS1对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制

目的探讨核糖体合成调控因子1(RRS1)基因对乳腺癌BT549细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法通过Western Blot实验检测人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮MCF-10A细胞RRS1蛋白的表达量。通过免疫荧光检测RRS1在BT549细胞中的定位。慢病毒感染法建立RRS1敲低的BT549细胞系,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western Blot实验检测感染阴性对照慢病毒细胞(Con组)和感染shRNA-RRS1慢病毒细胞(sh-RRS1组)中RRS1 mRNA和蛋白相对表达量。采用CCK8实验和集落形成实验检测RRS1对BT549细胞增殖能力的影响,通过细胞划痕实验、Transwell实验检测RRS1对BT549细胞迁移能力的影响。采用Western Blot实验检测两组细胞AKT-mTOR相关信号通路蛋白及其下游缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达量。结果MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT549、MCF-7乳腺癌细胞系中RRS1相对表达量与人正常乳腺上皮MCF-10A细胞相比均显著增高(F=48.92,P<0.05)。免疫荧光染色显示,RRS1主要在BT549细胞的细胞核和核仁表达,细胞质也有少量表达。与Con组进行比较,sh-RRS1组RRS1 mRNA和蛋白表达量显著降低,增殖和迁移能力均明显减弱,p-AKT、p-mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达量均显著降低(t=6.29~32.04,F=1368.00、2699.00,P<0.05)。结论RRS1可能通过AKT-mTOR通路促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。

沉默信息调节因子1受抑制导致肝细胞脂类代谢紊乱促进丙型肝炎病毒复制

目的用携带HCV复制子的Huh-7．5细胞探讨HCV复制对沉默信息调节因子1（SIRTl）表达及肝细胞脂类代谢的影响。方法实验分为Huh-7．5细胞、复制子细胞和干扰素处理的复制子细胞3组。应用流式细胞仪、比色法测定细胞活性氧（ROS）变化和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）’／NADH比值变化。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量一PCR（RT-PCR）、Westemblot检测SIRTl活性、mRNA及蛋白的表达。RT-PCR检测SIRTl下游调节脂类代谢基因的mRNA水平。试剂盒检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）的含量，液体闪烁计数仪检测脂肪酸p氧化速度，Westemb10t检测HCV非结构蛋白5A表达水平。计量资料两组间比较用f检验，三组间比较用单因素方差分析。结果与Huh-7．5细胞相比，复制子细胞ROS水平增加（3．8±0．5与1．0±0．2，t=12．736，P〈0．01），NAD’／NADH比值下降（0．03±0．01与0．12士0．03，t=6．971，（P〈0．01）。与Huh-7．5细胞和IFN处理的复制子细胞相比，复制子细胞SIRTl的活性下降（0．3土0．1与1．0士0．2、0．9土0．2，F=6．766，户〈0．01）、mRNA水平下降（0．4土0．1与1．0±0．3、0．9土0．2，F=5．864，P〈0．01）和蛋白水平下降（0．3±0．1与0．8士0．2、0．9士0．2，F=5．419，P〈0．01）l叉头蛋白转录因子（Fox01）磷酸化水平下降（0．2±0．1与0．5土0．1、0．6土0．2，F=4．534，P〈0．05），固醇调节元件结合蛋白-1c基因表达水平上升（1．8土0．4与1．0±0．3、0．9±0．3，F=4．091，P〈0．05），而TG=6．670，P〈0．01）和TC（F=5．789，P〈0．01）合成增加；过氧化物酶体增殖物活化受体a基因表达水平下降（0．4土0．1与1．0±0．3、0．9±0．3，，=5．897，JP〈0．01），脂肪酸p氧化速度下降（0．4±0．1与1．0土0．3、0．9±0．3，F=5．123，P〈0．01）。与未处理或SIRTl激动剂处理组相比，SIRTl抑制剂处理复制子细胞72h后HCV非结构蛋白5A表达水平明显增加（1．90±0．45与1．0士0．15、0．20士0．06，F=13．765，P〈0．01）。结论HCV复制降低NAD’／NADH比值，下调SIRTl活性及表达，改变其下游调节脂类代谢相关基因表达，增加脂肪酸合成，降低脂肪酸氧化，导致肝细胞脂类代谢紊乱，促进HCV复制。

复方芩柏汤调控ERK/JNK信号通路治疗溃疡性结肠炎的效应及机制研究

目的 研究复方芩柏汤对细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)/c-Jun氨基末端激酶(cJun N-terminal kinase, JNK)信号通路的调控作用,以及对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)小鼠血清中炎症因子的影响。方法 将60只SPF级健康雄性BALB/C小鼠利用3%葡聚糖硫酸(dextran sulfate sodium, DSS)建立UC模型,造模成功后随机分为模型组(以生理盐水灌肠)、美沙拉嗪组(以0.196 g/kg美沙拉嗪药液灌肠)、复方芩柏汤组(以1.092 g/kg复方芩柏颗粒剂药液灌肠),每组20只,每天保留灌肠2次,连续3周。另取20只正常饲养小鼠作为空白组。在治疗前和治疗后第7、14、21天,观察小鼠体质量、大便性状、便血情况,并计算疾病活动指数(disease activity index, DAI),且于给药结束后进行麻醉取血并取结肠组织。采用HE染色观察各组小鼠结肠组织病理变化情况;ELISA法检测各组小鼠血清中炎症因子白细胞介素(interleukin)-22、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)含量变化情况;采用Western blot法检测各组小鼠结肠组织中的p90核糖体蛋白S6激酶(p90 ribosomal protein S6 kinase, p90RSK)、JNK、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase, p-JNK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2, ERK 1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phospho extracellular regulated protein kinases, p-ERK 1/2)蛋白的表达。结果 在治疗的第7、14、21天,美沙拉嗪组、复方芩柏汤组小鼠体质量均明显高于模型组(P<0.05,P<0.01),DAI评分明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。光镜下,与模型组相比,美沙拉嗪组及复方芩柏汤组小鼠结肠组织病理改变呈不同程度的恢复,炎症浸润减轻。给药结束后,与空白组比较,模型组p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,美沙拉嗪组和复方芩柏汤组p90RSK、p-JNK、p-ERK 1/2蛋白以及IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),抗炎因子IL-22、IL-10含量明显升高(P<0.01)。结论 复方芩柏汤可能通过抑制ERK/JNK信号通路,促进抗炎因子IL-22、IL-10的表达,抑制促炎因子IL-6、TNF-α的表达,减少肠道炎症反应,促进肠上皮细胞增殖,改善肠黏膜屏障,促进UC小鼠肠道黏膜组织损伤修复。