经穿膜肽与PEG修饰的核糖体失活蛋白Gelonin抗肿瘤作用的研究

目的:通过对核糖体失活蛋白Gelonin进行化学修饰,利用穿膜肽和聚乙二醇(PEG)偶联来提高其到达肿瘤部位和进入肿瘤细胞的能力,使Gelonin更高效地发挥抑瘤作用。方法:利用FPLC Superdex75分子筛预装柱纯化系统对所修饰的Gelonin进行纯化后,在不同细胞系测试细胞毒性;通过倒置荧光显微镜、流式细胞分析技术等对药物进入纤维肉瘤细胞HT1080的能力进行评价;采用小动物活体成像技术考察药物体系在荷瘤动物体内的分布情况。结果:采用分子筛色谱纯化可以得到纯度相对较高的修饰产物,其毒性较无修饰的Gelonin强,且在HT1080细胞系作用最明显;细胞摄取结果显示,与未修饰的Gelonin相比,该药物体系具有更高的细胞摄取效率;动物成像结果表明,PEG5000修饰可以改变Gelonin在动物体内的分布情况,增加在肿瘤的药物蓄积。结论:穿膜肽和PEG5000修饰后的Gelonin有较高的肿瘤细胞摄取和杀伤能力,药物在肿瘤的蓄积量较高,从而增强了药物的抑瘤效果。

苦瓜抗HIV活性蛋白及其聚乙二醇修饰研究进展

苦瓜籽含有许多具有抗HIV活性的核糖体失活蛋白,例如α-苦瓜素,β-苦瓜素和MAP30,它们还分别具有堕胎、抗肿瘤活性、抗乙肝病毒活性等。本文从结构、功能、抗HIV分子机制、与其它病毒作用、与其它药物相互作用等方面总结了MAP30蛋白的研究,并根据现有的聚乙二醇修饰方法对MAP30修饰研究提出了展望。

苦瓜籽MAP30的聚乙二醇化学修饰条件优化及纯化研究

目的探讨聚乙二醇修饰苦瓜籽核糖体失活蛋白(MAP30)的反应条件以及修饰产物的纯化方法。方法在不同条件下,将聚乙二醇活性酯(mPEG)2-NHS与MAP30反应,用SDS-PAGE分析不同反应条件对产物成分的影响;采用Sephacryl S-300HR分子筛柱色谱法对修饰产物进行分离纯化,TNBS法测定目标产物PEG-MAP30的氨基修饰度。结果聚乙二醇修饰MAP30的最优反应条件为4℃,pH8.5硼酸硼砂缓冲液,MAP30质量浓度1mg/mL,MAP30与(mPEG)2-NHS质量比1∶10为最佳修饰条件,5min内反应完全;反应产物进一步纯化,经SDS-PAGE检测目标产物PEG-MAP30中不含未修饰的MAP30;TNBS法测定MAP30的氨基修饰度为44.9%。结论初步确定了聚乙二醇修饰MAP30的反应条件和修饰产物的纯化方法。

聚乙二醇修饰对苦瓜籽中RIP抗肿瘤活性及免疫学特性的影响

目的探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白(RIP)经聚乙二醇(PEG)修饰后的体外及动物体内免疫学特性的变化。方法用MTT法测定RIP和RIP-PEG结合物对小鼠黑色素瘤细胞的抑制率;通过间接ELISA法测定RIP和RIP-PEG结合物在小鼠体内的免疫原性;以全身主动过敏实验(ASA)和被动皮肤过敏实验(PCA)来比较二者在豚鼠和大鼠体内的过敏毒性。结果RIP-PEG结合物对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制率约为RIP的70%,产生的特异性IgG与RIP比较显著下降(P<0.01),诱发的过敏反应也显著降低。结论苦瓜籽RIP经PEG修饰后,其抗肿瘤活性、免疫原性和过敏毒性均显著降低。