核糖体成熟因子RimP、Era和RimJ的研究进展

核糖体由小亚基和大亚基构成,它们都由rRNA和核糖体蛋白质组成。核糖体的组装和成熟是一个快速、复杂且十分耗能的细胞过程,并受到核糖体成熟(组装)因子的引导。RimP、Era和RimJ是大肠杆菌核糖体30S小亚基的成熟因子,促进30S小亚基的组装和成熟。现综述RimP、Era和RimJ在30S小亚基组装和成熟过程中的作用,为进一步揭示30S小亚基组装和成熟的过程以及RimP、Era和RimJ的功能提供依据。

过表达TSR2通过下调PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨TSR2核糖体成熟因子在胃癌中的表达情况及其与胃癌恶性演进的相关性,并分析其潜在的作用机制。方法纳入105例胃癌患者资料,分析TSR2在胃癌组织中表达水平及其对胃癌恶性进展、术后5年生存率的影响;GO及KEGG富集分析预测TSR2的生物学功能及可能的作用机制;通过慢病毒转染技术上调和下调TSR2在胃癌细胞系(MGC-803)的表达水平,并采用CCK-8、Transwell评估其对MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响;Western blot检测p-PI3K、p-AKT表达。结果TSR2在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001),且TSR2的表达水平与CEA、CA19-9、T分期及N分期相关(P<0.05)。单因素联合多因素分析显示,TSR2低表达(P=0.020)、CEA≥5μg/L(P=0.021)、CA19-9≥37 kU/L(P=0.001)、T3~T4分期(P=0.039)和N2~N3分期(P=0.027)是独立影响胃癌患者施行根治术后5年生存率的风险因子。生存分析结果显示,TSR2表达水平与胃癌患者术后5年生存率呈正相关(P<0.001)。生物信息学富集分析预测TSR2的功能可能与PI3K/AKT信号通路相关。CCK-8和Transwell实验结果显示,上调TSR2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),下调则反之(P<0.05)。Western blot结果显示过表达TSR2可下调胃癌细胞中磷脂肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化,敲低则反之(P<0.05)。结论TSR2在胃癌组织中低表达并影响患者预后,其可能与下调PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞的增殖、侵袭与迁移有关。

缺失dbpA导致大肠杆菌DNA复制起始延迟

探讨核糖体成熟因子dbpA对大肠杆菌DNA复制起始的影响。观察ΔdbpA基因缺失突变体的DNA复制式样、细胞倍增时间、细胞体积等表型变化,并使用温度敏感性试验和蛋白定量实验探究dbpA的作用机理。结果发现与野生型BW25113相比,ΔdbpA突变体出现DNA复制的起始延迟,细胞倍增时间延长,细胞体积减小等表型变化,且在LB培养基比在ABTGcasa培养基中的变化更明显。温度敏感性实验显示DbpA与DnaA、DnaB或DnaC蛋白没有相互作用。蛋白定量实验显示ΔdbpA的细胞内总蛋白和DnaA蛋白含量都减少,且在LB培养基比ABTGcasa培养基中的减少程度更大。因此缺失dbpA导致大肠杆菌DNA复制起始延迟,原因可能是dbpA通过影响细菌内核糖体的组装或翻译过程影响蛋白质的合成,使细胞内总蛋白和DnaA蛋白的含量减少。这为明确dbpA的功能提供参考。

人源MDN1蛋白质的电镜结构研究

目的·利用负染电镜技术分析人源midasin AAA-ATPase 1(MDN1,又称Rea1)蛋白质结构。方法·利用CRISPR/Cas9基因编辑方法在Expi293F细胞内源MDN1蛋白质的氨基端敲入3×FLAG纯化标签,采用ANTI-FLAG^(®)M2 Agarose Affinity Gel亲和层析和甘油密度梯度离心的方法分离纯化目的蛋白质;通过负染色电镜技术和单颗粒(single-particle)重构技术探究人源MDN1蛋白质结构。结果·利用亲和层析及密度梯度离心方法分离纯化获得高纯度、均一性较好的人源MDN1蛋白质样品;采用甲酸铀负染色后利用120 kV电镜初步解析了目的蛋白质MDN1的空间结构。结论·利用单颗粒重构技术搭建了人源MDN1蛋白质的低分辨率的负染模型。