基于磷脂酰肌醇3激酶与苏氨酸蛋白激酶1信号通路小檗碱调节巨噬细胞极化机制研究

目的探究小檗碱对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人髓系白血病单核细胞(THP-1)巨噬细胞极化的影响和可能作用机制。方法采用佛波酯(PMA)将THP-1细胞诱导成巨噬细胞,加入不同浓度的小檗碱,分别为对照组、小檗碱5μmol/L组、小檗碱10μmol/L组、小檗碱20μmol/L组、小檗碱40μmol/L组、小檗碱50μmol/L组,干预24 h或48 h。采用细胞计数8试剂盒检测细胞活力,筛选小檗碱最佳浓度和时间。将PMA诱导的THP-1巨噬细胞分为空白组、模型组、小檗碱组、抑制剂组、小檗碱+抑制剂组。酶联免疫吸附测定检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的含量;定量聚合酶链反应检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、苏氨酸蛋白激酶1(Akt1)mRNA表达情况;Western blot检测Akt1和磷酸化Akt1(p-Akt1)抗体蛋白含量。结果干预24 h时,与对照组比较,小檗碱40μmol/L组和50μmol/L组巨噬细胞活性降低(P<0.05);干预48 h时,小檗碱5μmol/L组、小檗碱10μmol/L组、小檗碱20μmol/L组、小檗碱40μmol/L组、小檗碱50μmol/L组巨噬细胞活性均低于对照组[(0.89±0.02)%、(0.82±0.03)%、(0.71±0.02)%、(0.62±0.03)%、(0.53±0.02)%vs(1.01±0.01)%,P<0.05]。小檗碱20μmol/L组处理24 h时对细胞活力影响不大,作为最佳浓度和时间。与空白组比较,模型组iNOS含量和TNF-αmRNA水平升高,TGF-β_(1)含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,小檗碱组iNOS含量和TNF-αmRNA水平降低,TGF-β_(1)含量、Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平升高(P<0.05);与小檗碱组比较,小檗碱+抑制剂组iNOS含量和TNF-αmRNA水平升高,Arg1 mRNA、PI3K mRNA、Akt1 mRNA及p-Akt1/Akt1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论小檗碱可通过激活PI3K/Akt1通路,抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应,并抑制巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化。

自噬途径降解肝脏脂滴的研究进展

自噬是一种高度保守的细胞降解途径,可通过“脂噬”过程来降解脂滴。脂噬可以选择性地识别脂类物质并将其降解,促进β氧化,进而维持细胞内脂质代谢的平衡状态。肝脏通过脂噬信号通路或关键分子来调控脂滴代谢,进而降低肝脏脂肪变性,改善非酒精性脂肪性肝病。本文总结归纳了巨自噬、分子伴侣介导的自噬和微自噬样3种自噬途径降解肝脏脂滴的最新研究进展,AMPK/mTOR-ULK1、ATGL-SIRT1、FGF21-JMJD3、Akt作为调控脂噬过程的主要信号通路,有助于维持肝脂质代谢稳态,能够为临床预防和治疗非酒精性脂肪性肝病提供新思路。

自噬相关基因在非酒精性脂肪性肝病中的表达研究

目的探讨微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1、自噬相关基因5(Atg5)、自噬相关基因3(Atg3)蛋白在高脂饮食(HFD)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型中的表达及其意义。方法随机将20只雄性SD大鼠分为2组(10只/组):NAFLD模型组(给予HFD,即HFD组)和对照组[给予正常饮食(ND),即ND组]。按照实验要求给予相应饲料喂养,20周末时,检测两组小鼠的血清生化指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、游离脂肪酸(FFA)]水平;使用Westeron blot检测两组大鼠肝脏组织中自噬相关基因LC3、Beclin-1、Atg5、Atg3蛋白的表达水平。结果在第8、12、16、20周时,HFD组大鼠的体重显著大于ND组(P<0.05)。HFD组大鼠的ALT、AST、T-CHO、TG、TNF-α、FFA水平显著高于ND组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,HFD组的自噬相关基因LC3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、Beclin-1、Atg5和Atg3蛋白表达水平上调。结论自噬相关基因在NAFLD模型中高表达,并有可能促进NALFD发生与发展。

类鼻疽杆菌通过抑制自噬调控HepG2细胞胞内脂质代谢

目的探讨类鼻疽杆菌感染HepG2细胞后诱导的自噬抑制对胞内脂质代谢的调控作用。方法类鼻疽杆菌感染HepG2细胞6、12、24 h为感染组,以未感染组作为对照。激光共聚焦显微镜观测各组细胞内脂滴和GFP-自噬点的数量;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及胆固醇水平;Western blot检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62表达水平。利用自噬抑制剂3-MA、Baf-A1以及自噬激活剂Rapa处理细胞,检测改变宿主细胞自噬水平后,对类鼻疽杆菌感染HepG2细胞后胞内脂质代谢的影响;外源加入游离脂肪酸三醋酸甘油酯,通过细菌胞内计数实验检测类鼻疽杆菌胞内存活情况。结果类鼻疽杆菌感染HepG2细胞6、12、24 h后,与未感染组比较,胞内脂滴数量增多,脂质成分甘油三酯和胆固醇水平也随感染时间延长逐渐升高,且在感染24 h后达到最高水平(P<0.01);自噬检测发现,与未感染组比较,LC3Ⅱ蛋白表达随感染时间逐渐下降,p62蛋白表达水平随感染时间逐渐蓄积,胞内自噬小体的数量也随感染时间逐渐减少,且感染24 h后数量最低(P<0.01),提示类鼻疽杆菌感染HepG2细胞后自噬受抑;使用自噬抑制剂3-MA、Baf-A1以及自噬激活剂Rapa处理细胞后,与对照组比较,抑制自噬导致胞内脂质蓄积加重(P<0.01),而激活自噬可以减轻胞内脂质的蓄积(P<0.01);此外,外源补充三醋酸甘油酯促进宿主细胞脂质代谢速率能明显降低类鼻疽杆菌胞内存活量(P<0.01)。结论类鼻疽杆菌感染HepG2细胞后,通过诱导自噬抑制调控HepG2细胞胞内脂质代谢。

鸟分枝杆菌脂类诱导的人肺泡巨噬细胞抗结核免疫反应性的改变及机制的初步研究

目的研究鸟分枝杆菌脂类(MALs)对人肺泡巨噬细胞抗结核免疫反应性的影响。方法平板计数法评价MALs对人肺泡巨噬细胞杀结核菌效应的影响;ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Greisse法检测一氧化氮(NO)水平。结果MALs减弱了人肺泡巨噬细胞对牛结核分枝杆菌(BCG)的杀灭。MALs刺激后,结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)和干扰素γ(IFN-γ)诱导的人肺泡巨噬细胞TNF-α和NO的分泌均有所下降。结论 MALs减弱了人肺泡巨噬细胞对结核分枝杆菌的免疫反应性。

苯并噁唑类衍生物K339抑制脂多糖诱导巨噬细胞的炎症反应

目的探讨苯并噁唑类衍生物K339对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎效应。方法通过LPS(100µg/L)刺激RAW264.7细胞建立炎性细胞模型;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度K339对RAW264.7细胞活力的影响;通过一氧化氮(NO)检测试剂盒检测K339对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的影响;荧光定量PCR及酶联免疫吸附反应检测诱导型NO合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达及在上清中的分泌;蛋白质印迹技术检测p-NFκB蛋白质表达水平。结果小分子化合物K339在最高浓度30µmol/L不影响RAW264.7细胞活力,但可明显降低LPS诱导产生的NO;可抑制iNOS、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的表达及在细胞培养上清中的分泌;可明显下调LPS诱导的磷酸化NFκB p65蛋白表达。结论小分子化合物K339可能通过Toll样受体4(TLR4)/NFκB通路有效抑制LPS刺激的RAW264.7细胞炎症因子的产生,具有明显的抗炎效应。

细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤模型中的保护作用及机制

目的利用D-氨基半乳糖(D-Gal N)/脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型研究细胞自噬在急性肝损伤中的作用及机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-Gal N/LPS建立小鼠急性肝损伤模型。动物实验分组:对照组、DGal N/LPS组、雷帕霉素+D-Gal N/LPS组、三甲基腺嘌呤(3-MA)+D-Gal N/LPS组、Atg7 siRNA+D-Gal N/LPS组。观察不同分组中小鼠的生存情况,观察肝组织病理变化评价肝损伤情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平,实时荧光定量PCR检测肝组织中TNFα和IL-6基因表达,荧光显微镜观察肝组织中肝细胞凋亡情况。多样本组间比较采用One-way ANOVA分析,进一步两两比较,方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时采用Games-Howell法。结果与D-Gal N/LPS组相比,应用自噬激活剂雷帕霉素干预后,小鼠生存率明显升高(80%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显减轻,肝细胞凋亡明显减少,血清ALT、AST水平明显降低[ALT:(427.4±195.5)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P=0.002;AST:(378.2±169.7)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P=0.004],肝组织中炎症因子TNFα和IL-6 mRNA表达水平明显降低[TNFαmRNA:0.288±0.010 vs 1.136±0.267,P=0.003;IL-6mRNA:0.272±0.061 vs 0.869±0.317,P=0.010];应用自噬抑制剂3-MA和Atg7 siRNA干预后,小鼠生存率明显降低(0、10%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显加重,肝细胞凋亡明显增多,血清ALT、AST水平明显升高[ALT:(1836.0±560.5)、(1654.0±627.6)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P值分别为0.006、0.034;AST:(1948.0±645.5)、(1804.0±492.6)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P值分别为0.029、0.033],肝组织中TNFα表达水平明显升高[2.026±0.342、1.994±0.286 vs 1.136±0.267,P值分别为0.006、0.005]。结论在D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝损伤中,细胞自噬发挥着重要的保护性作用,其调控机制可能与自噬抑制炎症因子和肝细胞凋亡有关。

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的 :探讨氧化型低密度脂蛋白 (ox -LDL)对人巨噬细胞分泌巨噬细胞移动抑制因子 (MIF)的影响。方法 :体外培养巨噬细胞株 2 8SC ,在其培养基中加入终浓度为 15 0mg/L的氧化型低密度脂蛋白进行时间效应实验 ,37℃共育后 ,分别于 0h、3h、6h、12h、2 4h、36h收集细胞和培养介质 ;在其培养基中分别加入终浓度为 0mg/L、15mg/L、30mg/L、75mg/L、15 0mg/L、30 0mg/L的氧化型低密度脂蛋白进行剂量效应实验 ,37℃共育 2 4h后收集细胞和培养介质。采用RT -PCR和ELISA分别测定MIFmRNA和蛋白表达水平。结果 :氧化型低密度脂蛋白可诱导培养巨噬细胞分泌MIFmRNA和蛋白 ,并呈时间和剂量依赖性增加。结论

非酒精性脂肪性肝病细胞模型中自噬与脂质代谢的相互调节

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中自噬与脂质代谢的相互作用。方法体外人肝细胞培养(脂肪变性)制备NAFLD细胞模型,雷帕霉素诱导细胞自噬,3-甲基腺嘌呤抑制细胞自噬,MTT比色法测定细胞活力,ELISA法检测各组细胞TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb水平,IF法检测LC3-Ⅱ的定位与分布,Western Blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果诱导自噬组的吸光度值和细胞活率与脂肪变组比较,明显下降(HL-7702细胞q值分别为4.160、4.110,SK-HEP-1细胞q值分别为4.407、4.032;P值均<0.05)。脂肪变组TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb水平与对照组相比,明显升高(HL-7702细胞q值分别为5.316、3.730、4.013、6.967、6.192、5.531,SK-HEP-1细胞q值分别为4.963、3.603、4.774、7.479、6.319、5.193;P值均<0.05)。诱导自噬组TG、ALT、AST、LDH、GGT、Alb水平与脂肪变组相比,明显降低(HL-7702细胞q值分别为4.978、3.695、3.960、5.130、4.695、3.192,SK-HEP-1细胞q值分别为3.846、5.575、4.184、5.019、4.203、3.049;P值均<0.05)。LC3-Ⅱ在各组肝细胞中的标记值,诱导自噬组最高(HL-7702细胞为90.1%,SK-HEP-1细胞为80.0%),其次是脂肪变组(HL-7702细胞为47.2%,SK-HEP-1细胞为48.4%)及抑制自噬组(HL-7702细胞为30.2%,SK-HEP-1细胞为45.5%)。诱导自噬组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与脂肪变组相比,明显升高(HL-7702细胞q值为6.786,SK-HEP-1细胞q值为5.926;P值均<0.05)。结论自噬的上调有利于促进肝脏脂肪的清除,而下调则促进脂质的聚积。

慢性华支睾吸虫感染对脂多糖刺激巨噬细胞反应的影响

目的:了解慢性华支睾吸虫(Cs)感染的免疫状态及其对巨噬细胞表型和炎症反应的影响。方法:选择Sprague-Dawley雄性大鼠,按随机数字表法分组进行2部分实验。(1)经口华支睾吸虫虫卵灌胃感染70 d建立慢性Cs感染模型,分为正常对照组和慢性Cs感染组,每组10只,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素4(IL-4)、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)水平,腹腔灌洗获取巨噬细胞,流式细胞术检测腹腔巨噬细胞亚型;(2)腹腔灌洗获取巨噬细胞,按照腹腔巨噬细胞的来源,分为空白对照组、正常组和慢性Cs感染组,以脂多糖(LPS,10μg/L)刺激孵育,用ELISA法动态监测LPS刺激后0、2、12和24 h细胞培养上清液的TNF-α和IL-10的变化。结果:(1)慢性Cs感染组大鼠血清促炎因子TNF-α[(77.64±3.25)ng/L]和IFN-γ[(212.69±12.60)ng/L]水平较正常组TNF-α[(55.13±3.25)ng/L]和IFN-γ[(108.15±10.49)ng/L]升高(均P<0.05),而抗炎因子IL-4[(248.24±8.99)ng/L]和IL-10[(223.56±5.60)ng/L]水平较正常组血清IL-4[(52.40±3.97)ng/L]和IL-10[(60.18±5.36)ng/L]也显著升高(均P<0.01),并可使腹腔巨噬细胞向替代活化型(M2型)巨噬细胞分化;(2)2组腹腔巨噬细胞培养上清液TNF-α水平在LPS刺激后2 h即开始上升,至24 h达到高峰,慢性Cs感染组巨噬细胞在LPS刺激后2、12和24 h上清液的TNF-α水平均显著低于正常大鼠组[2 h:(88.20±1.91)ng/L vs(123.45±2.98)ng/L;12 h:(123.66±4.31)ng/L vs(161.11±7.38)ng/L;24 h:(154.52±4.83)ng/L vs(227.85±10.67)ng/L,均P<0.05],而IL-10的水平较正常组升高[2 h:(105.46±12.28)ng/L vs(80.86±2.28)ng/L;12 h:(194.19±8.62)ng/L vs(117.56±8.02)ng/L;24 h:(280.02±11.31)ng/L vs(168.14±8.97)ng/L,均P<0.05]。结论:慢性Cs感染时宿主血清的促炎因子升高,而抗炎因子升高得更明显,使巨噬细胞向M2型极化;体外实验表明慢性Cs感染宿主的巨噬细胞对LPS刺激产生耐受。

类胡萝卜素对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

目的 :观察类胡萝卜素对巨噬细胞释放一氧化氮 (NO)的影响 ,探讨类胡萝卜素免疫调节作用的机制。方法 :选用小鼠腹腔巨噬细胞为对象 ,观察不同浓度的虾青素和β-胡萝卜素对细胞产生 NO的影响。结果 :用 1 mg/L的内毒素脂多糖刺激巨噬细胞时 ,2× 1 0 - 7mol/L和 2× 1 0 - 8mol/L的虾青素使巨噬细胞释放 NO分别下降 77%和 43% ;而浓度相同 β-胡萝卜素仅使巨噬细胞释放NO分别下降 2 8%和 8%。两者对正常状态的巨噬细胞没有明显影响。结论 :类胡萝卜素能抑制受L PS刺激的巨噬细胞释放 NO,其免疫调节功能可能与影响

脂蛋白对培养巨噬细胞表达噬巨细胞移动抑制因子的实验研究

目的:探讨不同脂蛋白对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子基因和蛋白水平的影响。方法:2 8SC人巨噬细胞株用含有1×10 5U·L-1青霉素、10 0mg·L-1链霉素和10 %FBS的RPMI 16 40培养基于37℃,5 %的CO2 中培养。以每孔1×10 4个细胞接种于6孔板中,每孔2ml培养液,加入终浓度为15 0mg·L-1的不同脂蛋白,于37℃共同孵育2 4h收集细胞和培养介质。采用RT PCR和ELISA分别测定MIFmRNA和蛋白表达水平。结果:巨噬细胞有MIF表达,低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂组诱导巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达水平,试验组较正常对照组升高(P <0 .0 5 ) ;而高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白组诱导巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达水平,试验组与正常对照组变化相近(P >0 .0 5 )。结论:不同脂质对巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达作用不同。MIF可能参与了低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂所致的动脉粥样硬化进程。

氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞Toll样受体-4的表达效应

目的研究低密度脂蛋白(LDL)氧化对人单核细胞源巨噬细胞Toll样受体-4(TLR-4)表达的影响及其机制。方法用RPM I 1640培养基体外培养人THP-1单核细胞系,加入佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯(PMA)培养48 h使其分化为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)或LDL,用免疫细胞化学、蛋白质免疫印迹和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察脂蛋白氧化前、后对巨噬细胞表达TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的影响。结果Ox-LDL可提高TLR-4蛋白及TLR-4 mRNA的表达(P<0.01);而LDL对TLR-4蛋白及其mRNA的表达无影响(P<0.05)。结论LDL的氧化可能促进THP-1源巨噬细胞TLR-4转录水平的上调,导致蛋白质的合成增加;Ox-LDL可能是动脉粥样硬化中炎症的始发原因之一。

氧化低密度脂蛋白、荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的影响

目的:了解不同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及荷叶生物碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达的影响。方法:用佛波酯(PMA)诱导THP-1源性单核细胞分化为巨噬细胞:以不同浓度的ox-LDL孵育其24h;50mg/L的ox-LDL孵育使该细胞成为泡沫细胞,再以不同浓度荷叶生物碱对其进行干预24h。以PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)分别检测不同浓度ox-LDL及荷叶生物碱干预下各组细胞ABCA1的表达。以油红O染色观察各组细胞。结果:镜下:ox-LDL处理组细胞内脂滴的大小与多少随着ox-LDL的浓度的增加而增加;随荷叶生物碱浓度的升高而减少。ABCA1mRNA表达量:ox-LDL各组的表达量均较空白对照组明显升高[25mg/L组:(1.4677±0.0907),50mg/L组:(2.0510±0.1065),100 mg/L组:(1.5356±0.0903)比0mg/L组:(1.00),P均<0.05],荷叶生物碱各组细胞的表达量[荷叶生物碱25mg/L:(1.0460±0.0580),50mg/L:(0.8391±0.0661),100mg/L:(1.1003±0.0752)]表达量均较单纯50mg/L ox-LDL干预组(0.5136±0.0632)明显升高(P均<0.05)。ABCA1蛋白的表达与ABCA1mRNA表达水平改变相一致。结论:ox-LDL可上调PMA诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞内ABCA1的表达,使其细胞内脂质蓄积。荷叶生物碱既使上述细胞内ABCA1表达上调,又使其细胞内脂质蓄积减少。

氧化低密度脂蛋白及溶血卵磷脂对巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的 :观察氧化低密度脂蛋白 (OxLDL)及其成分溶血卵磷脂 (LPC)对小鼠腹腔巨噬泡沫细胞胆固醇外流的影响及其机制的初步探讨。方法 :( 1)以载脂蛋白AI(apoAI)分别诱导OxLDL和乙酰化低密度脂蛋白 (AcLDL)负载小鼠腹腔巨噬细胞所形成的巨噬泡沫细胞 ,观察其胆固醇外流情况。 ( 2 )分离正常及apoE基因缺陷 (E0 )小鼠腹腔巨噬细胞 ,以AcLDL负载形成巨噬泡沫细胞 ,分别以LPC及apoAI作为诱导物 ,观察其胆固醇外流情况。结果 :( 1)apoAI能引起AcLDL组巨噬泡沫细胞胆固醇大量外流 ,而OxLDL组外流明显受阻。 ( 2 )LPC能引起正常组小鼠腹腔巨噬泡沫细胞胆固醇外流 ,且呈剂量效应关系 ,但E0 组未见明显外流 ;apoAI能引起两组的胆固醇外流 ,且外流量显著高于LPC。结论 :( 1)OxLDL能造成胆固醇外流途径受阻。 ( 2 )LPC能促进巨噬泡沫细胞胆固醇外流 。

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。

天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白促进动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α mRNA

目的 :探讨天然及氧化低密度和极低密度脂蛋白 (n -LDL ,n -VLDL ,ox -LDL ,ox -VLDL)是否能促进培养的动脉平滑肌细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 (MIP) 1αmRNA。方法 :将培养的兔主动脉平滑肌细胞暴露于上述 4种脂蛋白后 ,分别用原位分子杂交法及逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测其MIP - 1αmRNA的表达。结果 :培养的兔主动脉平滑肌细胞能表达低水平的MIP - 1αmRNA ,4种脂蛋白均能增强平滑肌细胞表达MIP - 1αmRNA ,氧化型脂蛋白作用强于天然型脂蛋白 ,其中又以ox-VLDL作用最强 ,组间差异有极显著意义 (P <0 0 1)。结论 :n -LDL ,n -VLDL ,ox -LDL和ox -VLDL可能通过诱导平滑肌细胞表达MIP - 1α ,从而在动脉粥样硬化早期病变的形成中起重要作用。

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞来源巨噬细胞胆固醇代谢和细胞因子分泌的影响

目的探讨低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)对单核细胞来源巨噬细胞胆固醇代谢和细胞因子分泌的影响。方法用胆固醇酶联法测定细胞内胆固醇含量,ELISA法检测培养上清TNFα和IL-1β水平。结果LDL-IC组细胞内胆固醇含量及上清TNFα、IL-1β水平均明显高于LDL、IgG-IC及阴性对照组。结论LDL-IC可以显著增加细胞内胆固醇含量与培养上清TNFα和IL-1β的水平,提示LDL-IC能通过干扰细胞脂质代谢及细胞因子分泌而在AS中起重要作用。

白细胞介素34对巨噬细胞脂质摄取可能机制的研究

目的探讨白细胞介素34(IL-34)对巨噬细胞脂质摄取能力的影响及其可能机制。方法实验以小鼠巨噬细胞系RAW 246.7培养,氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导建立泡沫细胞模型,分为对照组、IL-34组(50ng/ml)、oxLDL组(40μg/ml)、联合组(oxLDL 40μg/ml+IL-34 50ng/ml)。油红O染色观察细胞内脂滴的形成;荧光标记oxLDL孵育后荧光显微镜观察细胞内脂质荧光强度;Western blot及RT-PCR检测清道夫受体A、CD36蛋白及转录水平的表达变化。结果对照组及IL-34组细胞内未见红染颗粒。与oxLDL组比较,联合组细胞内红染颗粒明显增多,荧光强度增加;CD36蛋白和mRNA明显升高(0.89±0.03 vs 0.56±0.11,1.25±0.17 vs 0.60±0.09,P<0.05)。结论 IL-34能够通过上调CD36而增加巨噬细胞对脂蛋白的摄取。

小凹蛋白1对氧化型低密度脂蛋白诱导RAW 264.7巨噬细胞衰老的影响

目的探讨小凹蛋白1(caveolin-1)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导RAW 264.7细胞衰老的影响及可能机制。方法不同浓度oxLDL(0、20、40、80和120μg/ml)诱导RAW 264.7细胞衰老,依次为A、B、C、D和E组,检测细胞中caveolin-1的变化。通过RNA干扰(siRNA)的方式下调细胞caveolin-1表达,分为oxLDL组、质粒对照组、siRNA组和无血清对照组,观察oxLDL(60μg/ml)诱导的RAW 264.7细胞衰老的影响,同时Western blot检测p47phox在膜蛋白中的表达,细胞上清液中丙二醛含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 C、D和E组较A组细胞衰老阳性率增加(P<0.05),同时caveolin-1表达增加,与p47phox表达增加一致,与oxLDL组比较,siRNA组细胞衰老活性率减少(P<0.05),细胞膜p47phox表达下降,细胞上清液丙二醛含量明显下降[(7.12±1.26)nmol/ml vs(11.97±1.78)nmol/ml,P<0.05],SOD活性明显增加[(79.98±3.94)U/ml vs(50.03±6.57)U/ml,P<0.05]。结论 caveolin-1可能通过氧化应激影响oxLDL诱导巨噬细胞的衰老过程,从而影响衰老相关性动脉粥样硬化过程。